Robust antistof- og cytokinrespons på hepatitis B-vaccine blandt ikke-behandlede patienter med kronisk hepatitis C: En åben kontrolundersøgelse i Kina

Undersøgelsesdesign og deltagere Undersøgelsen blev udført i tre amter (Yucheng, Xintai og Dongchangfu) i Shandong-provinsen, Kina, som havde de højeste rapporterede HCV-tilfældetal i provinsen. Potentielle patienter med kronisk HCV-infektion blev rekrutteret ved at tjekke hospitalernes journaler eller ved at forespørge landsbyens læger. Raske individer blev tilfældigt udvalgt af 3 til 5 gange potentielle patienter med HCV-infektion i samme amt. Der blev foretaget spørgeskemaundersøgelse, og blodprøver blev indsamlet for hver potentiel patient og rask person på samme måde.

Spørgeskemaundersøgelse Vi udførte en spørgeskemabaseret undersøgelse for at indsamle basislinjeoplysninger for deltagerne, herunder demografiske oplysninger (alder, køn, højde og vægt), sygehistorie (allergi, diagnose og behandling af kronisk hepatitis C, vaccination, feber og andre akutte sygdomme) og adfærdsstatus (rygning, drikkeri, graviditet og amning).

Hepatitis B-vaccination og opfølgning Der blev givet tre doser hepatitis B-vaccine fremstillet ved rekombinant DNA-teknikker i Saccharomyces Cerevisiae (20 μg HBsAg/1,0 ml pr. dosis, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, Guangdong-provinsen, Kina). intramuskulært i deltaregionen til alle deltagere ved henholdsvis 0, 1 og 6 måneder. Blodprøver fra deltagerne blev indsamlet en måned efter den første og den tredje vaccinationsdosis.

Laboratorieanalyser og fysisk undersøgelse Screeningtest og fysisk undersøgelse HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HCV og HCV RNA blev analyseret for alle forsøgspersoner ved inklusionsbesøg; serumbilirubin, serumalbumin, protrombintid, plasma-ALAT og aspartataminotransferase (AST) blev påvist for HCV-gruppen. HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe og anti-HBc blev analyseret af Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irland). Anti-HCV blev målt ved ELISA med et kommercielt sæt (Intec products, INC, Xiamen, Kina). HCV RNA blev målt ved kvantitativ realtids-PCR med kommercielt tilgængelige kits (QIAGEN, Shenzhen, Kina). Serumbilirubin, albumin, protrombintid, plasma-ALAT og AST blev målt ved anvendelse af standardreagens og -metoder. For at vurdere sygdomsaktivitet modtog hver patient med HCV-infektion en klinisk undersøgelse, herunder afhøring, fysisk undersøgelse og ultralyd.

Anti-HBs-assay efter vaccination Anti-HBs blev påvist ved hjælp af CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irland) en måned efter den første og den tredje vaccinationsdosis. Skønt uden serologiske HBV-markører, blev forsøgspersoner defineret som havende en historie med HBV-infektion eller hepatitis B-vaccination, hvis anti-HB'er ≥100 mIU/ml en måned efter den første vaccinationsdosis.

CMI-assay Før den første vaccinationsdosis og en måned efter den tredje vaccinationsdosis blev 43 forsøgspersoner fra HCV-gruppen og 37 forsøgspersoner fra rask kontrolgruppe udvalgt tilfældigt til henholdsvis isolerede perifere mononukleære blodceller (PBMC'er) og testet CMI-funktion, inklusive interferon -y (IFN-y), interleukin-2 (IL-2), interleukin-4 (IL-4), interleukin-5 (IL-5) og interleukin-6 (IL-6). S28-39 polypeptid, MHC klasse I polypeptid, MHC klasse II polypeptid og HBsAg blev anvendt som henholdsvis celleimmunologisk stimulans af IFN-y. Hepatitis B-virusoverfladeantigen blev anvendt som celleimmunologisk stimulans af IL-2, IL-4, IL-5 og IL-6. S28-39 polypeptid ，MHC klasse I polypeptidblandinger og MHC klasse II polypeptidblandinger blev syntetiseret i BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Beijing, Kina). HBsAg blev leveret af Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Shenzhen, Kina).

PBMC'er adskilt fra EDTA-antikoaguleret blod blev justeret til koncentrationen på 2 × 106 celler/ml. 100 μL 2 × 106 celler/mL PBMC'er blev tilsat i de præ-coatede PVDF 96-brønds plader og 100 μL HBsAg S28-39 peptid (IPQSLDSWWTSL, slutkoncentration: 10 μg/mL), 100 μl polypeptidblanding, 100 klasse I10 MHC μL MHC klasse II polypeptidblanding eller 100 μL HBsAg (80 μg/mL) i hver brønd. Når det kom til IL-2, IL-4, IL-5 og IL-6, blev pladerne oversvømmet med 100 μL 2 × 106 celler/ml PBMC og 100 μL HBsAg (80μg/mL) i hver brønd. Derefter blev de inkuberet ved 37 °C i en 5% CO2 og befugtet inkubator i 20 timer (IFN-y, IL-2) eller 40 timer (IL-4, IL-5 og IL-6). Efter inkubation blev pladerne manipuleret i henhold til R&D ELISPOT Kit (R&D Systems, Inc.) instruktionsmanual. Pletdannende celler (SFC'er) blev opregnet med ImmunoSpotTM-systemet (Cellular Technology Ltd.).

Sikkerhedsvurdering Deltagerne fik udleveret dagbogskort til at registrere forekomsten og sværhedsgraden af ​​opfordrede lokale reaktioner på injektionsstedet (smerte, induration, erytem, ​​ødem, pruritus) i løbet af 7 dage efter vaccination, opfordrede systemiske reaktioner (feber, hovedpine, træt, hoste) myalgi, asteni, vertigo, diarré) og enhver uopfordret bivirkning i løbet af 29 dage efter vaccination.

Statistiske analyser Dataindtastning og databasestyring blev udført af henholdsvis EPIDATA 3.0 og Microsoft excel 2010. Dataanalyse blev udført af Stata 11.0. Forskelle mellem HCV-gruppe og rask kontrolgruppe i kontinuerlige og kategoriske variabler blev undersøgt ved hjælp af betinget logistisk regression. Undergrupper af ikke- og lav-respondere versus normal- og høj-respondere blev evalueret i forhold til demografiske karakteristika, biokemiske indikatorer, leversygdomsstatuer og HCV RNA. En Students t-test eller en-vejs ANOVA blev brugt til at sammenligne den gennemsnitlige anti-HBs titer mellem forskellige undergrupper. Fishers eksakte test blev brugt til at sammenligne svarprocenterne. Ikke-parametrisk test blev brugt til at sammenligne immundotting-pletter. Sperman-rangkorrelationsanalyse blev brugt til at evaluere sammenhængen mellem immundotting-pletter og anti-HB'er. For alle disse sammenligninger anses en tosidet P<0,05 for statistisk signifikant.