Robuuste antilichaam- en cytokinerespons op hepatitis B-vaccin bij patiënten met chronische hepatitis C die niet in behandeling zijn: een open-label controleonderzoek in China

Onderzoeksopzet en deelnemers Het onderzoek werd uitgevoerd in drie provincies (Yucheng, Xintai en Dongchangfu) van de provincie Shandong, China, die de hoogste gerapporteerde aantallen HCV-gevallen in de provincie hadden. Potentiële patiënten met een chronische HCV-infectie werden gerekruteerd door de medische dossiers van de ziekenhuizen te controleren of door navraag te doen bij dorpsartsen. Gezonde personen werden willekeurig geselecteerd door 3 tot 5 keer potentiële patiënten met HCV-infectie in dezelfde provincie. Er werd een vragenlijstonderzoek gedaan en voor elke potentiële patiënt en gezond individu werden op dezelfde manier bloedmonsters genomen.

Vragenlijstonderzoek We hebben een op vragenlijsten gebaseerd onderzoek uitgevoerd om basislijninformatie van de deelnemers te verzamelen, waaronder demografische informatie (leeftijd, geslacht, lengte en gewicht), medische geschiedenis (allergie, diagnose en behandeling van chronische hepatitis C, vaccinatie, koorts en andere acute ziekten) en gedragsstatus (roken, drinken, zwangerschap en borstvoeding).

Hepatitis B-vaccinatie en follow-up Drie doses hepatitis B-vaccin gemaakt door Recombinant DNA Techniques in Saccharomyces Cerevisiae (20 μg HBsAg/1,0 ml per dosis, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, provincie Guangdong, China) werden gegeven intramusculair in het deltaspiergebied aan alle deelnemers op respectievelijk 0, 1 en 6 maanden. Bloedmonsters van de deelnemers werden een maand na de eerste en de derde vaccinatiedosis verzameld.

Laboratoriumassays en lichamelijk onderzoek Screeningstest en lichamelijk onderzoek HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HCV en HCV-RNA werden getest voor alle proefpersonen tijdens opnamebezoeken; serumbilirubine, serumalbumine, protrombinetijd, plasma ALT en aspartaataminotransferase (AST) werden gedetecteerd voor de HCV-groep. HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe en anti-HBc werden getest door Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Ierland). Anti-HCV werd gemeten door ELISA met een commerciële kit (Intec-producten, INC, Xiamen, China). HCV-RNA werd gemeten door middel van kwantitatieve real-time PCR met in de handel verkrijgbare kits (QIAGEN, Shenzhen, China). Serumbilirubine, albumine, protrombinetijd, plasma ALT en AST werden gemeten met behulp van standaardreagens en methoden. Om de ziekteactiviteit te beoordelen, onderging elke patiënt met HCV-infectie klinisch onderzoek, inclusief ondervraging, lichamelijk onderzoek en echografie.

Anti-HBs-test na vaccinatie Anti-HBs werd gedetecteerd met behulp van CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Ierland) een maand na de eerste en de derde vaccinatiedosis. Hoewel ze geen serologische HBV-markers hadden, werden proefpersonen gedefinieerd als personen met een voorgeschiedenis van HBV-infectie of hepatitis B-vaccinatie als anti-HBs ≥100 mIU/ml één maand na de eerste vaccinatiedosis.

CMI-assay Vóór de eerste vaccinatiedosis en één maand na de derde vaccinatiedosis werden 43 proefpersonen uit de HCV-groep en 37 proefpersonen uit de gezonde controlegroep willekeurig geselecteerd om respectievelijk perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) en geteste CMI-functie te isoleren, inclusief interferon -γ (IFN-γ), interleukine-2 (IL-2), interleukine-4 (IL-4), interleukine-5 (IL-5) en interleukine-6 ​​(IL-6). S28-39-polypeptide, MHC klasse I-polypeptide, MHC klasse II-polypeptide en HBsAg werden respectievelijk gebruikt als celimmunologische stimulans van IFN-y. Hepatitis B-virus oppervlakte-antigeen werd gebruikt als celimmunologische stimulans van IL-2, IL-4, IL-5 en IL-6. S28-39-polypeptide, MHC klasse I-polypeptidemengsels en MHC klasse II-polypeptidemengsels werden gesynthetiseerd in BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Beijing, China). HBsAg werd geleverd door Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Shenzhen, China).

PBMC's gescheiden van EDTA-geanticoaguleerd bloed werden aangepast tot de concentratie van 2 x 106 cellen / ml. 100 μl 2 x 106 cellen / ml PBMC's werden toegevoegd aan de voorgecoate PVDF-platen met 96 putjes en 100 μl HBsAg S28-39-peptide (IPQSLDSWWTSL, eindconcentratie: 10 μg / ml), 100 μL MHC klasse I-polypeptidemengsels, 100 μl μL MHC klasse II-polypeptidemengsel of 100 μL HBsAg (80 μg/ml) in elk putje. Als het ging om IL-2, IL-4, IL-5 en IL-6, werden de platen overspoeld met 100 μl 2 x 106 cellen / ml PBMC en 100 μl HBsAg (80 μg / ml) in elk putje. Daarna werden ze geïncubeerd bij 37 °C, in een 5% CO2 en bevochtigde incubator gedurende 20 uur (IFN-γ, IL-2) of 40 uur (IL-4, IL-5 en IL-6). Na incubatie werden de platen gemanipuleerd volgens de instructiehandleiding van R&D ELISPOT Kit (R&D Systems, Inc.). Spotvormende cellen (SFC's) werden geteld met het ImmunoSpotTM-systeem (Cellular Technology Ltd.).

Veiligheidsbeoordeling De deelnemers kregen dagboekkaarten om het optreden en de ernst van gevraagde lokale reacties op de injectieplaats (pijn, verharding, erytheem, oedeem, pruritus) gedurende 7 dagen na vaccinatie vast te leggen, gevraagde systemische reacties (koorts, hoofdpijn, vermoeidheid, hoesten , myalgie, asthenie, duizeligheid, diarree) en eventuele ongewenste bijwerkingen gedurende 29 dagen na vaccinatie.

Statistische analyses Gegevensinvoer en databasebeheer werden respectievelijk uitgevoerd door EPIDATA 3.0 en Microsoft Excel 2010. Gegevensanalyse werd uitgevoerd door Stata 11.0. Verschillen tussen de HCV-groep en de gezonde controlegroep in continue en categorische variabelen werden onderzocht met behulp van geconditioneerde logistische regressie. Subgroepen van non- en low-responders versus normale en high-responders werden geëvalueerd in relatie tot demografische kenmerken, biochemische indicatoren, leverziektebeelden en HCV-RNA. Een Student's t-test of one-way ANOVA werden gebruikt om de gemiddelde anti-HBs-titer tussen verschillende subgroepen te vergelijken. Fisher's exact test werd gebruikt om de responspercentages te vergelijken. Niet-parametrische test werd gebruikt om immunodotting-spots te vergelijken. Sperman-rangcorrelatieanalyse werd gebruikt om de correlatie tussen immunodotting-spots en anti-HBs te evalueren. Voor al deze vergelijkingen wordt een tweezijdige P<0,05 als statistisch significant beschouwd.