Vahva vasta-aine- ja sytokiinivaste hepatiitti B -rokotteelle kroonista C-hepatiittia sairastavien potilaiden keskuudessa, jotka eivät saa hoitoa: Avoin kontrollitutkimus Kiinassa

Tutkimuksen suunnittelu ja osallistujat Tutkimus suoritettiin kolmessa läänissä (Yucheng, Xintai ja Dongchangfu) Shandongin maakunnassa Kiinassa, joissa oli maakunnan korkeimmat raportoidut HCV-tapaukset. Mahdollisia kroonista HCV-infektiota sairastavia rekrytoitiin tarkastamalla sairaaloiden potilastiedot tai tiedustelemalla kylälääkäreiltä. Terveet yksilöt valittiin satunnaisesti 3–5 kertaa mahdollisista HCV-infektion potilaista samassa läänissä. Kyselytutkimus tehtiin ja verinäytteet otettiin jokaiselta mahdolliselta potilaalta ja terveeltä henkilöltä samalla tavalla.

Kyselykysely Teimme kyselytutkimuksen kerätäksemme osallistujien perustiedot, mukaan lukien demografiset tiedot (ikä, sukupuoli, pituus ja paino), sairaushistoria (allergia, kroonisen hepatiitti C:n diagnoosi ja hoito, rokotukset, kuume ja muut akuutit sairaudet) ja käyttäytymistila (tupakointi, juominen, raskaus ja imetys).

Hepatiitti B -rokotus ja seuranta Saccharomyces Cerevisiaessa Rekombinantti DNA Techniques -menetelmällä valmistettua hepatiitti B -rokotetta (20 μg HBsAg/1,0 ml annosta kohti, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, Guangdongin maakunta, Kiina) annettiin kolme annosta. intramuskulaarisesti hartialihakseen kaikille osallistujille 0, 1 ja 6 kuukauden kohdalla. Verinäytteet osallistujilta kerättiin kuukauden kuluttua ensimmäisestä ja kolmannesta rokotusannoksesta.

Laboratoriomääritykset ja fyysinen tutkimus Seulontatesti ja fyysinen tutkimus HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HCV ja HCV RNA määritettiin kaikille koehenkilöille inkluusiokäynneillä; seerumin bilirubiini, seerumin albumiini, protrombiiniaika, plasman ALAT ja aspartaattiaminotransferaasi (AST) havaittiin HCV-ryhmälle. HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe ja anti-HBc määritettiin Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssaylla (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irlanti). Anti-HCV mitattiin ELISA:lla kaupallisella pakkauksella (Intec products, INC, Xiamen, Kiina). HCV RNA mitattiin kvantitatiivisella reaaliaikaisella PCR:llä kaupallisesti saatavilla olevilla kitillä (QIAGEN, Shenzhen, Kiina). Seerumin bilirubiini, albumiini, protrombiiniaika, plasman ALT ja AST mitattiin käyttämällä standardireagenssia ja -menetelmiä. Taudin aktiivisuuden arvioimiseksi jokainen HCV-infektiota sairastava potilas sai kliinisen tutkimuksen, johon kuului kuulustelut, fyysinen tutkimus ja ultraääni.

Anti-HBs-määritys rokotuksen jälkeen Anti-HBs havaittiin käyttämällä CMIA:ta (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irlanti) kuukauden kuluttua ensimmäisestä ja kolmannesta rokotusannoksesta. Vaikka koehenkilöillä ei ollut serologisia HBV-markkereita, he määriteltiin, että heillä oli aiemmin ollut HBV-infektio tai hepatiitti B -rokotus, jos anti-HBs ≥ 100 mIU/ml kuukauden kuluttua ensimmäisestä rokotusannoksesta.

CMI-määritys Ennen ensimmäistä rokotusannosta ja kuukausi kolmannen rokotusannoksen jälkeen 43 koehenkilöä HCV-ryhmästä ja 37 koehenkilöä terveestä kontrolliryhmästä valittiin satunnaisesti eristettyihin perifeerisen veren mononukleaarisoluihin (PBMC) ja testattiin vastaavasti CMI:n toiminta, mukaan lukien interferoni. -y (IFN-y), interleukiini-2 (IL-2), interleukiini-4 (IL-4), interleukiini-5 (IL-5) ja interleukiini-6 (IL-6). S28-39-polypeptidiä, MHC-luokan I polypeptidiä, MHC-luokan II polypeptidiä ja HBsAg:tä käytettiin vastaavasti IFN-y:n soluimmunologisena stimulanttina. Hepatiitti B -viruksen pinta-antigeeniä käytettiin IL-2:n, IL-4:n, IL-5:n ja IL-6:n soluimmunologisena stimulanttina. S28-39-polypeptidi, MHC-luokan I polypeptidiseokset ja MHC-luokan II polypeptidiseokset syntetisoitiin yrityksessä BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Peking, Kiina). HBsAg:n toimitti Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Shenzhen, Kiina).

EDTA:lla antikoaguloidusta verestä erotetut PBMC:t säädettiin konsentraatioon 2 x 106 solua/ml. 100 µl 2 × 106 solua/ml PBMC:itä lisättiin esipäällystetyille 96-kuoppaisille PVDF-levyille ja 100 µl HBsAg S28-39 -peptidiä (IPQSLDSWWTSL, lopullinen konsentraatio: 10 µg/ml), 100 MHC:n luokka I μ10 peptidien seos. μL MHC luokan II polypeptidiseosta tai 100 μL HBsAg (80 μg/ml) jokaiseen kuoppaan. Kun oli kyse IL-2:sta, IL-4:stä, IL-5:stä ja IL-6:sta, levyt täytettiin 100 µl:lla 2 × 106 solua/ml PBMC:tä ja 100 µl:lla HBsAg:a (80 µg/ml) jokaiseen kuoppaan. Sitten niitä inkuboitiin 37 °C:ssa 5 % C02:ssa ja kostutetussa inkubaattorissa 20 tuntia (IFN-y, IL-2) tai 40 tuntia (IL-4, IL-5 ja IL-6). Inkuboinnin jälkeen levyjä käsiteltiin R&D ELISPOT Kit (R&D Systems, Inc.) -ohjekirjan mukaisesti. Spot-forming Cells (SFC:t) laskettiin ImmunoSpotTM-järjestelmällä (Cellular Technology Ltd.).

Turvallisuusarviointi Osallistujille annettiin päiväkirjakortteja, joihin kirjattiin pyydettyjen paikallisten reaktioiden esiintyminen ja vakavuus pistoskohdassa (kipu, kovettuma, eryteema, turvotus, kutina) 7 päivän aikana rokotuksen jälkeen, kehotetut systeemiset reaktiot (kuume, päänsärky, väsymys, yskä) , myalgia, voimattomuus, huimaus, ripuli) ja kaikki ei-toivotut haittavaikutukset 29 päivän aikana rokotuksen jälkeen.

Tilastolliset analyysit Tietojen syöttämisen ja tietokannan hallinnan suoritti EPIDATA 3.0 ja Microsoft excel 2010. Tietojen analysointi suoritettiin Stata 11.0:lla. HCV-ryhmän ja terveen kontrolliryhmän välisiä eroja jatkuvissa ja kategorisissa muuttujissa tutkittiin käyttämällä ehdollista logistista regressiota. Aliryhmät, jotka eivät reagoineet ja reagoivat vähän verrattuna normaaleihin ja hyvin reagoiviin, arvioitiin suhteessa demografisiin ominaisuuksiin, biokemiallisiin indikaattoreihin, maksasairauspatsaisiin ja HCV-RNA:han. Studentin t-testiä tai yksisuuntaista ANOVAa käytettiin keskimääräisen anti-HBs-tiitterin vertaamiseen eri alaryhmien välillä. Fisherin tarkkaa testiä käytettiin vastausprosenttien vertailuun. Ei-parametrista testiä käytettiin vertaamaan immunoottisia kohtia. Sperman rankkorrelaatioanalyysiä käytettiin arvioimaan korrelaatiota immunodating spottien ja anti-HBs välillä. Kaikissa näissä vertailuissa kahden puolen P < 0,05 katsotaan tilastollisesti merkitseväksi.