未接受治疗的慢性丙型肝炎患者对乙型肝炎疫苗的强烈抗体和细胞因子反应：一项在中国进行的开放标签对照研究

研究设计和参与者 该研究在中国山东省的三个县（禹城、新泰和东昌府）进行，这三个县是该省报告的 HCV 病例数最高的县。 通过查看医院病历或询问乡村医生，招募慢性HCV感染的潜在患者。 健康个体由同县HCV潜在感染者的3～5倍随机抽取。 对每个潜在患者和健康个体进行问卷调查，并以相同的方式采集血样。

问卷调查 我们进行了问卷调查，收集参与者的基线信息，包括人口统计信息（年龄、性别、身高和体重）、病史（过敏、慢性丙型肝炎的诊断和治疗、接种疫苗、发烧和其他急性疾病）和行为状态（吸烟、饮酒、怀孕和哺乳）。

乙肝疫苗接种及随访 接种三剂酿酒酵母重组 DNA 技术乙肝疫苗（每剂 20 μg HBsAg/1.0ml，深圳市康泰生物制品有限公司，中国广东省深圳市）分别在 0、1 和 6 个月时对所有参与者进行三角肌区域肌肉注射。 在第一剂和第三剂疫苗接种后一个月收集参与者的血样。

实验室化验和体格检查 筛选测试和体格检查 HBsAg、抗 HBs、HBeAg、抗 HBe、抗 HBc、抗 HCV 和 HCV RNA检测HCV组血清胆红素、血清白蛋白、凝血酶原时间、血浆ALT和谷草转氨酶（AST）。 HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe 和抗-HBc 通过 Abbott 化学发光微粒免疫测定 (CMIA)（Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Ireland）进行测定。 使用商业试剂盒（Intec products, INC, Xiamen, China）通过 ELISA 测量抗 HCV。 使用市售试剂盒（QIAGEN，中国深圳）通过定量实时 PCR 测量 HCV RNA。 使用标准试剂和方法测量血清胆红素、白蛋白、凝血酶原时间、血浆ALT和AST。 为了评估疾病活动性，每位HCV感染患者都接受了临床检查，包括问诊、体格检查和超声检查。

接种疫苗后抗-HBs 测定 在第一剂和第三剂疫苗接种后一个月，使用 CMIA（雅培爱尔兰诊断部门，斯莱戈，爱尔兰）检测抗 HBs。 尽管没有血清学 HBV 标志物，但如果在第一次接种疫苗后一个月后抗-HBs ≥100 mIU/ml，则受试者被定义为具有 HBV 感染史或乙型肝炎疫苗接种史。

CMI检测 第一剂疫苗接种前和第三剂疫苗接种后一个月，随机抽取HCV组43例和健康对照组37例，分别分离外周血单个核细胞（PBMCs）并检测CMI功能，包括干扰素-γ (IFN-γ)、白细胞介素 2 (IL-2)、白细胞介素 4 (IL-4)、白细胞介素 5 (IL-5) 和白细胞介素 6 (IL-6)。 S28-39多肽、MHC I类多肽、MHC II类多肽和HBsAg分别作为IFN-γ的细胞免疫刺激剂。 乙型肝炎病毒表面抗原被用作IL-2、IL-4、IL-5和IL-6的细胞免疫刺激剂。 S28-39多肽，MHC I类多肽混合物和MHC II类多肽混合物由博麦捷科技有限公司合成。 （中国北京）。 HBsAg由深圳市康泰生物制品有限公司提供。 （中国深圳）。

从 EDTA 抗凝血液中分离出的 PBMCs 调整至 2×106 个细胞/mL 的浓度。在预包被的 PVDF 96 孔板中加入 100 μL 2 × 106 个细胞/mL PBMCs 和 100 μL HBsAg S28-39 肽（IPQSLDSWWTSL，终浓度：10 μg/mL），100 μL MHC I 类多肽混合物，100每孔加入 μL MHC II 类多肽混合物或 100 μL HBsAg (80μg/mL)。 当涉及 IL-2、IL-4、IL-5 和 IL-6 时，板的每个孔中充满 100 μL 2 × 106 个细胞/mL PBMC 和 100 μL HBsAg (80μg/mL)。 然后将它们在 37°C、5% CO2 和加湿培养箱中培养 20 小时（IFN-γ、IL-2）或 40 小时（IL-4、IL-5 和 IL-6）。 孵育后，根据 R&D ELISPOT 试剂盒（R&D Systems, Inc.）说明手册操作平板。 使用 ImmunoSpotTM 系统（Cellular Technology Ltd.）对斑点形成细胞 (SFC) 进行计数。

安全性评估 向参与者提供日记卡，以记录在接种疫苗后 7 天内在注射部位引起的局部反应（疼痛、硬结、红斑、水肿、瘙痒）、引起的全身反应（发烧、头痛、疲劳、咳嗽）的发生和严重程度、肌痛、虚弱、眩晕、腹泻），以及在接种疫苗后 29 天内出现的任何不请自来的不良反应。

统计分析数据输入和数据库管理分别由EPIDATA 3.0 和Microsoft excel 2010 执行。 数据分析采用Stata 11.0进行。 使用条件逻辑回归检查 HCV 组和健康对照组在连续和分类变量方面的差异。 在人口统计学特征、生化指标、肝病状况和 HCV RNA 方面，对无反应者和低反应者与正常反应者和高反应者的亚组进行了评估。 使用学生 t 检验或单向方差分析来比较不同亚组之间的平均抗 HBs 滴度。 Fisher 精确检验用于比较响应率。 非参数检验用于比较免疫点。 精子等级相关分析用于评估免疫点与抗-HBs 之间的相关性。 对于所有这些比较，两侧 P<0.05 被认为具有统计学意义。