Надежный ответ антител и цитокинов на вакцину против гепатита В среди не получающих лечения пациентов с хроническим гепатитом С: открытое контрольное исследование в Китае

Дизайн исследования и участники Исследование проводилось в трех уездах (Юйчэн, Синтай и Дунчанфу) провинции Шаньдун, Китай, в которых было зарегистрировано самое высокое число зарегистрированных случаев ВГС в провинции. Потенциальных пациентов с хронической инфекцией ВГС набирали путем проверки медицинских карт больниц или опроса сельских врачей. Здоровые люди были случайным образом отобраны от 3 до 5 раз среди потенциальных пациентов с инфекцией ВГС в одном и том же округе. Анкетирование проводилось и образцы крови собирались у каждого потенциального больного и здорового человека одинаковым образом.

Анкетный опрос Мы провели анкетный опрос для сбора исходной информации об участниках, включая демографические данные (возраст, пол, рост и вес), историю болезни (аллергия, диагностика и лечение хронического гепатита С, вакцинация, лихорадка и другие острые заболевания) и поведенческий статус (курение, употребление алкоголя, беременность и лактация).

Вакцинация против гепатита В и последующее наблюдение Были введены три дозы вакцины против гепатита В, изготовленной методом рекомбинантной ДНК на Saccharomyces Cerevisiae (20 мкг HBsAg/1,0 мл на дозу, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Шэньчжэнь, провинция Гуандун, Китай). внутримышечно в дельтовидную область всем участникам в 0, 1 и 6 месяцев соответственно. Образцы крови у участников были собраны через месяц после первой и третьей дозы вакцинации.

Лабораторные анализы и физикальное обследование Скрининг-тест и физикальное обследование HBsAg, анти-HBs, HBeAg, анти-HBe, анти-HBc, анти-HCV и РНК HCV были проанализированы для всех субъектов во время визитов включения; В группе ВГС определяли билирубин сыворотки, альбумин сыворотки, протромбиновое время, АЛТ и аспартатаминотрансферазу (АСТ) плазмы. HBsAg, анти-HBs, HBeAg, анти-HBe и анти-HBc анализировали с помощью иммуноанализа микрочастиц Abbott Chemiluminesent (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Слайго, Ирландия). Анти-HCV измеряли с помощью ELISA с коммерческим набором (Intec products, INC, Xiamen, Китай). РНК ВГС измеряли с помощью количественной ПЦР в реальном времени с использованием имеющихся в продаже наборов (QIAGEN, Шэньчжэнь, Китай). Сывороточный билирубин, альбумин, протромбиновое время, АЛТ и АСТ в плазме измеряли с использованием стандартных реагентов и методов. Для оценки активности заболевания каждому пациенту с HCV-инфекцией проводилось клиническое обследование, включающее опрос, физикальное обследование и ультразвуковое исследование.

Анализ анти-HBs после вакцинации Анти-HBs определяли с помощью CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Слайго, Ирландия) через месяц после первой и третьей дозы вакцинации. Несмотря на отсутствие серологических маркеров ВГВ, субъекты определялись как имеющие в анамнезе инфекцию ВГВ или вакцинацию против гепатита В, если анти-HBs ≥100 мМЕ/мл через месяц после первой дозы вакцинации.

Анализ CMI Перед первой дозой вакцинации и через месяц после третьей дозы вакцины 43 субъекта из группы ВГС и 37 субъектов из здоровой контрольной группы были случайным образом выбраны для изолированных мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) и тестировали функцию CMI соответственно, включая интерферон. -γ (ИФН-γ), интерлейкин-2 (ИЛ-2), интерлейкин-4 (ИЛ-4), интерлейкин-5 (ИЛ-5) и интерлейкин-6 (ИЛ-6). Полипептид S28-39, полипептид MHC класса I, полипептид MHC класса II и HBsAg использовали в качестве клеточного иммунологического стимулятора IFN-γ соответственно. В качестве клеточного иммунологического стимулятора ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5 и ИЛ-6 использовали поверхностный антиген вируса гепатита В. Полипептид S28-39, смеси полипептидов MHC класса I и смеси полипептидов MHC класса II были синтезированы в BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Пекин, Китай). HBsAg был поставлен компанией Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Шэньчжэнь, Китай).

PBMC, выделенные из крови с антикоагулянтом EDTA, доводили до концентрации 2 × 106 клеток/мл. 100 мкл 2 × 106 клеток/мл PBMC добавляли в предварительно покрытые PVDF 96-луночные планшеты и 100 мкл пептида HBsAg S28-39 (IPQSLDSWWTSL, конечная концентрация: 10 мкг/мл), 100 мкл смесей полипептидов MHC класса I, 100 мкл. мкл смеси полипептидов МНС класса II или 100 мкл HBsAg (80 мкг/мл) в каждую лунку. Что касается IL-2, IL-4, IL-5 и IL-6, планшеты заливали 100 мкл 2 × 106 клеток/мл PBMC и 100 мкл HBsAg (80 мкг/мл) в каждую лунку. Затем их инкубировали при 37 °С в увлажненном инкубаторе с 5% СО2 в течение 20 ч (ИФН-γ, ИЛ-2) или 40 ч (ИЛ-4, ИЛ-5 и ИЛ-6). После инкубации планшеты обрабатывали в соответствии с инструкцией по эксплуатации набора R&D ELISPOT Kit (R&D Systems, Inc.). Пятнообразующие клетки (SFC) подсчитывали с помощью системы ImmunoSpotTM (Cellular Technology Ltd.).

Оценка безопасности Участникам были предоставлены дневниковые карточки для регистрации возникновения и тяжести желаемых местных реакций в месте инъекции (боль, уплотнение, эритема, отек, зуд) в течение 7 дней после вакцинации, желаемых системных реакций (лихорадка, головная боль, утомляемость, кашель). миалгия, астения, головокружение, диарея) и любые нежелательные побочные эффекты в течение 29 дней после вакцинации.

Статистический анализ. Ввод данных и управление базой данных выполнялись с помощью EPIDATA 3.0 и Microsoft excel 2010 соответственно. Анализ данных был выполнен Stata 11.0. Различия между группой ВГС и здоровой контрольной группой в непрерывных и категориальных переменных были исследованы с использованием условной логистической регрессии. Подгруппы не- и низкоответивших по сравнению с нормальными и высокоотвечающими оценивались в отношении демографических характеристик, биохимических показателей, статуса заболевания печени и РНК ВГС. Критерий Стьюдента или односторонний ANOVA использовали для сравнения среднего титра анти-HBs между различными подгруппами. Для сравнения частоты ответов использовали точный критерий Фишера. Для сравнения пятен иммунодотирования использовали непараметрический тест. Ранговый корреляционный анализ Спермана использовали для оценки корреляции между пятнами иммунодоттинга и анти-HBs. Для всех этих сравнений двусторонний P<0,05 считается статистически значимым.