Respuesta robusta de anticuerpos y citoquinas a la vacuna contra la hepatitis B entre pacientes con hepatitis C crónica que no están en tratamiento: un estudio de control de etiqueta abierta en China

Diseño del estudio y participantes El estudio se llevó a cabo en tres condados (Yucheng, Xintai y Dongchangfu) de la provincia de Shandong, China, que tenían el mayor número de casos de VHC notificados en la provincia. Los pacientes potenciales con infección crónica por el VHC se reclutaron consultando los registros médicos de los hospitales o preguntando a los médicos de las aldeas. Individuos sanos fueron seleccionados al azar por 3 a 5 veces de pacientes potenciales con infección por VHC en el mismo condado. Se realizó una investigación mediante cuestionario y se recolectaron muestras de sangre para cada paciente potencial e individuo sano de la misma manera.

Encuesta con cuestionario Realizamos una encuesta basada en un cuestionario para recopilar la información de referencia de los participantes, incluida información demográfica (edad, sexo, altura y peso), historial médico (alergia, diagnóstico y tratamiento de la hepatitis C crónica, vacunación, fiebre y otras enfermedades agudas), y el estado de comportamiento (fumar, beber, embarazo y lactancia).

Vacunación contra la hepatitis B y seguimiento Se administraron tres dosis de la vacuna contra la hepatitis B elaborada mediante técnicas de ADN recombinante en Saccharomyces Cerevisiae (20 μg de HBsAg/1,0 ml por dosis, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, provincia de Guangdong, China). por vía intramuscular en la región deltoidea a todos los participantes a los 0, 1 y 6 meses respectivamente. Se recogieron muestras de sangre de los participantes un mes después de la primera y tercera dosis de vacunación.

Ensayos de laboratorio y examen físico Prueba de detección y examen físico Se analizaron HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HCV y HCV RNA para todos los sujetos en las visitas de inclusión; Se detectaron bilirrubina sérica, albúmina sérica, tiempo de protrombina, ALT plasmática y aspartato aminotransferasa (AST) para el grupo VHC. Se analizaron HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe y anti-HBc mediante el inmunoensayo de micropartículas quimioluminiscente (CMIA) de Abbott (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irlanda). El anti-HCV se midió por ELISA con un kit comercial (Intec products, INC, Xiamen, China). El ARN del VHC se midió mediante PCR cuantitativa en tiempo real con kits comercialmente disponibles (QIAGEN, Shenzhen, China). La bilirrubina sérica, la albúmina, el tiempo de protrombina, la ALT y la AST en plasma se midieron utilizando reactivos y métodos estándar. Para evaluar la actividad de la enfermedad, cada paciente con infección por VHC recibió un examen clínico, que incluyó interrogatorio, examen físico y ecografía.

Ensayo de anti-HBs después de la vacunación Se detectó anti-HBs utilizando CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irlanda) un mes después de la primera y la tercera dosis de vacunación. Aunque sin marcadores serológicos de VHB, los sujetos se definieron como con antecedentes de infección por VHB o vacunación contra la hepatitis B si anti-HBs ≥100 mIU/ml un mes después de la primera dosis de vacunación.

Ensayo CMI Antes de la primera dosis de vacunación y un mes después de la tercera dosis de vacunación, 43 sujetos del grupo VHC y 37 sujetos del grupo de control sano fueron seleccionados al azar para aislar células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y probar la función CMI respectivamente, incluido el interferón -γ (IFN-γ), interleucina-2 (IL-2), interleucina-4 (IL-4), interleucina-5 (IL-5) e interleucina-6 (IL-6). El polipéptido S28-39, el polipéptido MHC de clase I, el polipéptido MHC de clase II y el HBsAg se usaron como estimulante inmunológico celular de IFN-γ, respectivamente. El antígeno de superficie del virus de la hepatitis B se utilizó como estimulante inmunológico celular de IL-2, IL-4, IL-5 e IL-6. El polipéptido S28-39, las mezclas de polipéptidos del MHC de clase I y las mezclas de polipéptidos del MHC de clase II se sintetizaron en BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Beijing, China). HBsAg fue suministrado por Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Shenzhen, China).

Las PBMC separadas de sangre anticoagulada con EDTA se ajustaron a la concentración de 2 × 106 células/mL. Se agregaron 100 μL de 2 × 106 células/mL de PBMC en las placas de 96 pocillos de PVDF recubiertas previamente y 100 μL de péptido HBsAg S28-39 (IPQSLDSWWTSL, concentración final: 10 μg/mL), 100 μL de mezclas de polipéptidos MHC de clase I, 100 μL de mezcla de polipéptidos MHC de clase II o 100 μL de HBsAg (80 μg/mL) en cada pocillo. Cuando se trataba de IL-2, IL-4, IL-5 e IL-6, las placas se inundaron con 100 μL 2 × 106 células/mL de PBMC y 100 μL de HBsAg (80 μg/mL) en cada pocillo. Luego se incubaron a 37 °C, en una incubadora humedecida con CO2 al 5% durante 20 h (IFN-γ, IL-2) o 40 h (IL-4, IL-5 e IL-6). Después de la incubación, las placas se manipularon de acuerdo con el manual de instrucciones del kit R&D ELISPOT (R&D Systems, Inc.). Las células formadoras de puntos (SFC) se enumeraron con el sistema ImmunoSpotTM (Cellular Technology Ltd.).

Evaluación de la seguridad Se proporcionaron a los participantes tarjetas de diario para registrar la aparición y la gravedad de las reacciones locales solicitadas en el lugar de la inyección (dolor, induración, eritema, edema, prurito) durante los 7 días posteriores a la vacunación, reacciones sistémicas solicitadas (fiebre, dolor de cabeza, fatiga, tos , mialgia, astenia, vértigo, diarrea), y cualquier adverso no solicitado durante los 29 días posteriores a la vacunación.

Los análisis estadísticos La entrada de datos y la gestión de la base de datos se realizaron mediante EPIDATA 3.0 y Microsoft Excel 2010, respectivamente. El análisis de datos fue realizado por Stata 11.0. Las diferencias entre el grupo VHC y el grupo de control sano en variables continuas y categóricas se examinaron mediante regresión logística condicionada. Se evaluaron los subgrupos de respondedores bajos y no respondedores frente a los respondedores normales y altos en relación con las características demográficas, los indicadores bioquímicos, los estados de enfermedad hepática y el ARN del VHC. Se usó una prueba t de Student o ANOVA unidireccional para comparar el título promedio de anti-HBs entre diferentes subgrupos. Se utilizó la prueba exacta de Fisher para comparar las tasas de respuesta. Se utilizó una prueba no paramétrica para comparar los puntos de inmunopunto. Se usó el análisis de correlación de rango de Speman para evaluar la correlación entre las manchas de inmunopunto y anti-HBs. Para todas estas comparaciones, una P<0,05 bilateral se considera estadísticamente significativa.