Solidna odpowiedź przeciwciał i cytokin na szczepionkę przeciw wirusowemu zapaleniu wątroby typu B wśród nieleczonych pacjentów z przewlekłym wirusowym zapaleniem wątroby typu C: otwarte badanie kontrolne w Chinach

Projekt badania i uczestnicy Badanie przeprowadzono w trzech hrabstwach (Yucheng, Xintai i Dongchangfu) w prowincji Shandong w Chinach, które odnotowały najwyższą liczbę zgłoszonych przypadków zakażenia HCV w prowincji. Potencjalnych pacjentów z przewlekłym zakażeniem HCV rekrutowano, sprawdzając dokumentację medyczną szpitali lub zasięgając informacji u wiejskich lekarzy. Zdrowe osoby zostały losowo wybrane przez 3 do 5 razy potencjalnych pacjentów z zakażeniem HCV w tym samym powiecie. Przeprowadzono badanie kwestionariuszowe i pobrano próbki krwi od każdego potencjalnego pacjenta i osoby zdrowej w ten sam sposób.

Ankieta ankietowa Przeprowadziliśmy ankietę opartą na kwestionariuszu, aby zebrać podstawowe informacje o uczestnikach, w tym dane demograficzne (wiek, płeć, wzrost i waga), historię medyczną (alergia, diagnostyka i leczenie przewlekłego wirusowego zapalenia wątroby typu C, szczepienia, gorączka i inne ostre choroby) oraz stan behawioralny (palenie, picie, ciąża i laktacja).

Szczepienie przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B i obserwacja Trzy dawki szczepionki przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B wykonane technikami rekombinacji DNA w Saccharomyces Cerevisiae (20 μg HBsAg/1,0 ml na dawkę, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, prowincja Guangdong, Chiny) domięśniowo w okolicy mięśnia naramiennego wszystkim uczestnikom odpowiednio w wieku 0, 1 i 6 miesięcy. Próbki krwi od uczestników pobrano miesiąc po pierwszej i trzeciej dawce szczepionki.

Testy laboratoryjne i badanie fizykalne Test przesiewowy i badanie fizykalne Podczas wizyt włączenia u wszystkich pacjentów oznaczano HBsAg, anty-HBs, HBeAg, anty-HBe, anty-HBc, anty-HCV i HCV RNA; dla grupy HCV oznaczono bilirubinę w surowicy, albuminę w surowicy, czas protrombinowy, ALT w osoczu i aminotransferazę asparaginianową (AST). HBsAg, anty-HBs, HBeAg, anty-HBe i anty-HBc oznaczano za pomocą Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irlandia). Anty-HCV mierzono metodą ELISA za pomocą zestawu handlowego (produkty Intec, INC, Xiamen, Chiny). RNA HCV mierzono metodą ilościowego PCR w czasie rzeczywistym za pomocą dostępnych w handlu zestawów (QIAGEN, Shenzhen, Chiny). Stężenie bilirubiny w surowicy, albuminy, czas protrombinowy, ALT i AST w osoczu mierzono przy użyciu standardowych odczynników i metod. W celu oceny aktywności choroby każdy pacjent z zakażeniem HCV został poddany badaniu klinicznemu obejmującemu przesłuchanie, badanie fizykalne oraz badanie ultrasonograficzne.

Test anty-HBs po szczepieniu Anty-HBs wykryto za pomocą CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irlandia) jeden miesiąc po pierwszej i trzeciej dawce szczepienia. Chociaż nie posiadali serologicznych markerów HBV, pacjentów definiowano jako mających w wywiadzie zakażenie HBV lub szczepienie przeciw wirusowemu zapaleniu wątroby typu B, jeśli poziom przeciwciał anty-HB ≥100 mIU/ml jeden miesiąc po pierwszej dawce szczepionki.

Test CMI Przed pierwszą dawką szczepionki i miesiąc po trzeciej dawce szczepionki 43 osoby z grupy HCV i 37 osób ze zdrowej grupy kontrolnej wybrano losowo do wyizolowanych komórek jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMC) i zbadano odpowiednio funkcję CMI, w tym interferonu -γ (IFN-γ), interleukina-2 (IL-2), interleukina-4 (IL-4), interleukina-5 (IL-5) i interleukina-6 (IL-6). Polipeptyd S28-39, polipeptyd MHC klasy I, polipeptyd MHC klasy II i HBsAg zastosowano odpowiednio jako komórkowy immunologiczny stymulator IFN-γ. Antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B zastosowano jako komórkowy immunologiczny stymulator IL-2, IL-4, IL-5 i IL-6. Polipeptyd S28-39, mieszaniny polipeptydów MHC klasy I i mieszaniny polipeptydów MHC klasy II zsyntetyzowano w BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Pekin, Chiny). HBsAg dostarczyła firma Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Shenzhen, Chiny).

PBMC oddzielone od krwi antykoagulowanej EDTA doprowadzono do stężenia 2 x 106 komórek/ml. 100 μl 2 × 106 komórek/ml PBMC dodano do 96-dołkowych płytek wstępnie powleczonych PVDF i 100 μl peptydu HBsAg S28-39 (IPQSLDSWWTSL, stężenie końcowe: 10 μg/ml), 100 μl mieszanin polipeptydów MHC klasy I, 100 μl mieszaniny polipeptydów MHC klasy II lub 100 μl HBsAg (80 μg/ml) w każdym dołku. Jeśli chodzi o IL-2, IL-4, IL-5 i IL-6, płytki zalano 100 μl 2 x 106 komórek/ml PBMC i 100 μl HBsAg (80 μg/ml) w każdym dołku. Następnie inkubowano je w temperaturze 37°C, w 5% CO2 i nawilżanym inkubatorze przez 20 godzin (IFN-γ, IL-2) lub 40 godzin (IL-4, IL-5 i IL-6). Po inkubacji płytkami manipulowano zgodnie z instrukcją obsługi zestawu R&D ELISPOT (R&D Systems, Inc.). Komórki tworzące plamki (SFC) policzono za pomocą systemu ImmunoSpotTM (Cellular Technology Ltd.).

Ocena bezpieczeństwa Uczestnicy otrzymali karty dzienniczka, w których odnotowywali występowanie i nasilenie oczekiwanych reakcji miejscowych w miejscu wstrzyknięcia (ból, stwardnienie, rumień, obrzęk, świąd) w ciągu 7 dni po szczepieniu, oczekiwanych reakcji ogólnoustrojowych (gorączka, ból głowy, zmęczenie, kaszel). , bóle mięśni, astenia, zawroty głowy, biegunka) oraz wszelkie niepożądane działania niepożądane w ciągu 29 dni po szczepieniu.

Analizy statystyczne Wprowadzanie danych i zarządzanie bazą danych przeprowadzono odpowiednio za pomocą EPIDATA 3.0 i Microsoft Excel 2010. Analiza danych została przeprowadzona przez Stata 11.0. Różnice między grupą HCV a grupą kontrolną osób zdrowych w zmiennych ciągłych i kategorycznych zbadano za pomocą warunkowej regresji logistycznej. Podgrupy osób niereagujących i słabo reagujących w porównaniu z osobami reagującymi normalnie i silnie oceniano w odniesieniu do cech demograficznych, wskaźników biochemicznych, statusu choroby wątroby i RNA HCV. Do porównania średniego miana anty-HBs między różnymi podgrupami zastosowano test t-Studenta lub jednokierunkową ANOVA. Do porównania wskaźników odpowiedzi zastosowano dokładny test Fishera. Do porównania punktów immunodottingu zastosowano test nieparametryczny. Analiza korelacji rang Sperma została wykorzystana do oceny korelacji między punktami kropek immunologicznych a przeciwciałami anty-HBs. Dla wszystkich tych porównań dwustronne P <0,05 uważa się za statystycznie istotne.