Robust antikropps- och cytokinrespons på hepatit B-vaccin bland icke-behandlade patienter med kronisk hepatit C: En öppen kontrollstudie i Kina

Studiedesign och deltagare Studien genomfördes i tre län (Yucheng, Xintai och Dongchangfu) i Shandong-provinsen, Kina, som hade det högsta rapporterade antalet HCV-fall i provinsen. Potentiella patienter med kronisk HCV-infektion rekryterades genom att kontrollera sjukhusens journaler eller genom att fråga byns läkare. Friska individer valdes slumpmässigt ut av 3 till 5 gånger av potentiella patienter med HCV-infektion i samma län. Enkätundersökning gjordes och blodprover togs för varje potentiell patient och frisk individ på samma sätt.

Frågeformulärsundersökning Vi genomförde en enkätbaserad undersökning för att samla in basinformation från deltagarna, inklusive demografisk information (ålder, kön, längd och vikt), medicinsk historia (allergi, diagnos och behandling av kronisk hepatit C, vaccination, feber och andra akuta sjukdomar) och beteendestatus (rökning, alkoholkonsumtion, graviditet och amning).

Hepatit B-vaccination och uppföljning Tre doser av hepatit B-vaccin gjorda av rekombinanta DNA-tekniker i Saccharomyces Cerevisiae (20 μg HBsAg/1,0 ml per dos, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, Guangdong-provinsen, Kina) gavs intramuskulärt i deltoideusregionen till alla deltagare vid 0, 1 respektive 6 månader. Blodprover från deltagarna togs en månad efter första och tredje vaccinationsdosen.

Laboratorieanalyser och fysisk undersökning Screeningtest och fysisk undersökning HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HCV och HCV RNA analyserades för alla försökspersoner vid inklusionsbesök; serumbilirubin, serumalbumin, protrombintid, plasma-ALAT och aspartataminotransferas (AST) detekterades för HCV-gruppen. HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe och anti-HBc analyserades av Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irland). Anti-HCV mättes med ELISA med ett kommersiellt kit (Intec products, INC, Xiamen, Kina). HCV-RNA mättes med kvantitativ realtids-PCR med kommersiellt tillgängliga kit (QIAGEN, Shenzhen, Kina). Serumbilirubin, albumin, protrombintid, plasma-ALAT och AST mättes med användning av standardreagens och standardmetoder. För att bedöma sjukdomsaktiviteten fick varje patient med HCV-infektion klinisk undersökning, inklusive förhör, fysisk undersökning och ultraljud.

Anti-HBs-analys efter vaccination Anti-HBs upptäcktes med CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irland) en månad efter den första och den tredje vaccinationsdosen. Även om de saknade serologiska HBV-markörer, definierades försökspersoner med en historia av HBV-infektion eller hepatit B-vaccination om anti-HBs ≥100 mIU/ml en månad efter den första vaccinationsdosen.

CMI-analys Före den första vaccinationsdosen och en månad efter den tredje vaccinationsdosen valdes 43 försökspersoner från HCV-gruppen och 37 försökspersoner från frisk kontrollgrupp ut slumpmässigt till isolerade mononukleära celler från perifert blod (PBMC) respektive testade CMI-funktion, inklusive interferon -y (IFN-y), interleukin-2 (IL-2), interleukin-4 (IL-4), interleukin-5 (IL-5) och interleukin-6 (IL-6). S28-39 polypeptid, MHC klass I polypeptid, MHC klass II polypeptid och HBsAg användes som cellimmunologiskt stimulerande medel för IFN-y respektive. Hepatit B-virusytantigen användes som cellimmunologiskt stimulerande medel för IL-2, IL-4, IL-5 och IL-6. S28-39 polypeptid ，MHC klass I polypeptidblandningar och MHC klass II polypeptidblandningar syntetiserades i BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Peking, Kina). HBsAg levererades av Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Shenzhen, Kina).

PBMC: er separerade från EDTA-antikoagulerat blod justerades till koncentrationen av 2 × 106 celler/ml. 100 μL 2 × 106 celler/mL PBMC tillsattes i de förbelagda PVDF 96-brunnars plattorna och 100 μL HBsAg S28-39 peptid (IPQSLDSWWTSL, slutkoncentration: 10 μg/ml), 100 μL polypeptidblandningar, 100 μL MHC μL MHC klass II polypeptidblandning eller 100 μL HBsAg (80 μg/ml) i varje brunn. När det gällde IL-2, IL-4, IL-5 och IL-6, översvämmades plattorna med 100 μL 2 × 106 celler/ml PBMC och 100 μL HBsAg (80μg/mL) i varje brunn. Sedan inkuberades de vid 37 °C, i en 5% CO2 och fuktad inkubator i 20 timmar (IFN-y, IL-2) eller 40 timmar (IL-4, IL-5 och IL-6). Efter inkubation manipulerades plattorna enligt R&D ELISPOT Kit (R&D Systems, Inc.) Instruktionsmanual. Fläckbildande celler (SFC) räknades upp med ImmunoSpotTM-systemet (Cellular Technology Ltd.).

Säkerhetsbedömning Deltagarna försågs med dagbokskort för att registrera förekomsten och svårighetsgraden av efterfrågade lokala reaktioner på injektionsstället (smärta, förhärdning, erytem, ​​ödem, klåda) under 7 dagar efter vaccination, efterfrågade systemiska reaktioner (feber, huvudvärk, trötthet, hosta) myalgi, asteni, svindel, diarré) och alla oönskade biverkningar under 29 dagar efter vaccination.

Statistiska analyser Datainmatning och databashantering utfördes av EPIDATA 3.0 respektive Microsoft excel 2010. Dataanalys utfördes av Stata 11.0. Skillnader mellan HCV-grupp och frisk kontrollgrupp i kontinuerliga och kategoriska variabler undersöktes med betingad logistisk regression. Undergrupper av icke- och lågsvarare kontra normal- och högsvarare utvärderades i relation till demografiska egenskaper, biokemiska indikatorer, leversjukdomsstatyer och HCV-RNA. Ett Students t-test eller envägs ANOVA användes för att jämföra den genomsnittliga anti-HBs-titern mellan olika undergrupper. Fishers exakta test användes för att jämföra svarsfrekvensen. Icke-parametriskt test användes för att jämföra immunodrickande fläckar. Sperman rank korrelationsanalys användes för att utvärdera korrelationen mellan immunodrickande fläckar och anti-HBs. För alla dessa jämförelser anses en tvåsidig P<0,05 vara statistiskt signifikant.