Robustní protilátková a cytokinová odpověď na vakcínu proti hepatitidě B u neléčených pacientů s chronickou hepatitidou C: Otevřená kontrolní studie v Číně

Návrh studie a účastníci Studie byla provedena ve třech okresech (Yucheng, Xintai a Dongchangfu) provincie Shandong v Číně, které měly nejvyšší hlášený počet případů HCV v provincii. Potenciální pacienti s chronickou infekcí HCV byli získáváni na základě kontroly lékařských záznamů nemocnic nebo dotazů u vesnických lékařů. Zdraví jedinci byli náhodně vybráni 3 až 5krát potenciálními pacienty s infekcí HCV ve stejném okrese. Bylo provedeno dotazníkové šetření a stejným způsobem byly odebrány vzorky krve pro každého potenciálního pacienta a zdravého jedince.

Dotazníkové šetření Provedli jsme dotazníkový průzkum, abychom shromáždili základní informace o účastnících, včetně demografických informací (věk, pohlaví, výška a váha), anamnézy (alergie, diagnóza a léčba chronické hepatitidy C, očkování, horečka a jiná akutní onemocnění) a stav chování (kouření, pití, těhotenství a kojení).

Očkování proti hepatitidě B a následné sledování Byly podány tři dávky vakcíny proti hepatitidě B vyrobené technologií Recombinant DNA Techniques in Saccharomyces Cerevisiae (20 μg HBsAg/1,0 ml na dávku, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, provincie Guangdong, Čína). intramuskulárně do oblasti deltového svalu všem účastníkům po 0, 1 a 6 měsících. Vzorky krve účastníkům byly odebrány měsíc po první a třetí dávce očkování.

Laboratorní testy a fyzikální vyšetření Screeningový test a fyzikální vyšetření HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HCV a HCV RNA byly testovány u všech subjektů při inkluzních návštěvách; pro skupinu HCV byly detekovány sérový bilirubin, sérový albumin, protrombinový čas, plazmatická ALT a aspartátaminotransferáza (AST). HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe a anti-HBc byly testovány pomocí Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irsko). Anti-HCV byla měřena pomocí ELISA s komerční soupravou (Intec products, INC, Xiamen, China). HCV RNA byla měřena kvantitativní PCR v reálném čase s komerčně dostupnými soupravami (QIAGEN, Shenzhen, Čína). Sérový bilirubin, albumin, protrombinový čas, plazmatická ALT a AST byly měřeny pomocí standardních činidel a metod. Za účelem posouzení aktivity onemocnění podstoupil každý pacient s infekcí HCV klinické vyšetření, včetně výslechu, fyzikálního vyšetření a ultrasonografie.

Stanovení anti-HBs po očkování Anti-HBs bylo detekováno pomocí CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irsko) měsíc po první a třetí dávce očkování. Ačkoli bez sérologických markerů HBV, byli jedinci definováni jako subjekty s anamnézou infekce HBV nebo očkování proti hepatitidě B, pokud anti-HBs ≥100 mIU/ml jeden měsíc po první dávce vakcinace.

Test CMI Před první dávkou vakcinace a jeden měsíc po třetí dávce vakcinace bylo náhodně vybráno 43 subjektů ze skupiny HCV a 37 subjektů ze zdravé kontrolní skupiny, aby byly izolované mononukleární buňky periferní krve (PBMC) a testována funkce CMI, včetně interferonu -y (IFN-y), interleukin-2 (IL-2), interleukin-4 (IL-4), interleukin-5 (IL-5) a interleukin-6 (IL-6). Polypeptid S28-39, polypeptid MHC třídy I, polypeptid MHC třídy II a HBsAg byly použity jako buněčný imunologický stimulant IFN-y. Povrchový antigen viru hepatitidy B byl použit jako buněčný imunologický stimulant IL-2, IL-4, IL-5 a IL-6. Polypeptid S28-39, směsi polypeptidů MHC třídy I a směsi polypeptidů MHC třídy II byly syntetizovány v BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Peking, Čína). HBsAg dodala společnost Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Shenzhen, Čína).

PBMC separované z EDTA-antikoagulované krve byly upraveny na koncentraci 2 x 106 buněk/ml. 100 μl 2 × 106 buněk/ml PBMC bylo přidáno do předem potažených PVDF 96-jamkových destiček a 100 μl HBsAg S28-39 peptidu (IPQSLDSWWTSL, konečná koncentrace: 10 μg/ml), 100 μl MHC, směs polypeptidů třídy I0 μl směsi polypeptidů MHC třídy II nebo 100 μl HBsAg (80 μg/ml) v každé jamce. Pokud jde o IL-2, IL-4, IL-5 a IL-6, destičky byly zaplaveny 100 μl 2 x 106 buněk/ml PBMC a 100 μl HBsAg (80 μg/ml) v každé jamce. Poté byly inkubovány při 37 °C, v 5% CO2 a zvlhčeném inkubátoru po dobu 20 hodin (IFN-y, IL-2) nebo 40 hodin (IL-4, IL-5 a IL-6). Po inkubaci byly destičky manipulovány podle R&D ELISPOT Kit (R&D Systems, Inc.) Instruction Manual. Buňky tvořící skvrny (SFC) byly počítány pomocí systému ImmunoSpotTM (Cellular Technology Ltd.).

Posouzení bezpečnosti Účastníkům byly poskytnuty deníkové karty k zaznamenání výskytu a závažnosti požadovaných lokálních reakcí v místě vpichu (bolest, indurace, erytém, edém, pruritus) během 7 dnů po očkování, požadované systémové reakce (horečka, bolest hlavy, únava, kašel myalgie, astenie, vertigo, průjem) a jakékoli nevyžádané nežádoucí účinky během 29 dnů po vakcinaci.

Statistické analýzy Zadávání dat a správu databází byly provedeny pomocí EPIDATA 3.0 a Microsoft excel 2010. Analýza dat byla provedena pomocí Stata 11.0. Rozdíly mezi HCV skupinou a zdravou kontrolní skupinou v spojitých a kategoriálních proměnných byly zkoumány pomocí podmíněné logistické regrese. Podskupiny nereagujících a slabě reagujících versus normálních a vysoce reagujících byly hodnoceny ve vztahu k demografickým charakteristikám, biochemickým ukazatelům, sochám onemocnění jater a HCV RNA. Ke srovnání průměrného titru anti-HBs mezi různými podskupinami byl použit Studentův t test nebo jednocestná ANOVA. Ke srovnání míry odezvy byl použit Fisherův exaktní test. Neparametrický test byl použit k porovnání imunotečkovaných skvrn. K vyhodnocení korelace mezi imunotečkovacími skvrnami a anti-HBs byla použita korelační analýza pořadí spermií. Pro všechna tato srovnání je dvoustranné P<0,05 považováno za statisticky významné.