Réponse robuste des anticorps et des cytokines au vaccin contre l'hépatite B chez les patients non en traitement atteints d'hépatite C chronique : une étude de contrôle en ouvert en Chine

Conception de l'étude et participants L'étude a été menée dans trois comtés (Yucheng, Xintai et Dongchangfu) de la province du Shandong, en Chine, qui avaient le plus grand nombre de cas de VHC signalés dans la province. Les patients potentiels atteints d'une infection chronique par le VHC ont été recrutés en vérifiant les dossiers médicaux des hôpitaux ou en interrogeant les médecins du village. Des individus en bonne santé ont été sélectionnés au hasard par 3 à 5 fois des patients potentiels infectés par le VHC dans le même comté. Une enquête par questionnaire a été réalisée et des échantillons de sang ont été prélevés pour chaque patient potentiel et individu en bonne santé de la même manière.

Enquête par questionnaire Nous avons réalisé une enquête par questionnaire pour recueillir les informations de base des participants, y compris les informations démographiques (âge, sexe, taille et poids), les antécédents médicaux (allergie, diagnostic et traitement de l'hépatite C chronique, vaccination, fièvre et autres maladies aiguës) et l'état du comportement (tabagisme, alcool, grossesse et allaitement).

Vaccination contre l'hépatite B et suivi Trois doses de vaccin contre l'hépatite B fabriquées par des techniques d'ADN recombinant dans Saccharomyces Cerevisiae (20 μg HBsAg/1,0 ml par dose, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, province du Guangdong, Chine) ont été administrées par voie intramusculaire dans la région deltoïde à tous les participants à 0, 1 et 6 mois respectivement. Des échantillons de sang des participants ont été prélevés un mois après la première et la troisième dose de vaccination.

Dosages biologiques et examen physique Test de dépistage et examen physique L'AgHBs, les anti-HBs, l'AgHBe, les anti-HBe, les anti-HBc, les anti-VHC et l'ARN du VHC ont été dosés pour tous les sujets lors des visites d'inclusion ; la bilirubine sérique, l'albumine sérique, le temps de prothrombine, l'ALT plasmatique et l'aspartate aminotransférase (AST) ont été détectés pour le groupe VHC. HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe et anti-HBc ont été dosés par Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irlande). L'anti-HCV a été mesuré par ELISA avec un kit commercial (Intec products, INC, Xiamen, Chine). L'ARN du VHC a été mesuré par PCR quantitative en temps réel avec des kits disponibles dans le commerce (QIAGEN, Shenzhen, Chine). La bilirubine sérique, l'albumine, le temps de prothrombine, l'ALT et l'AST plasmatiques ont été mesurés à l'aide de réactifs et de méthodes standard. Afin d'évaluer l'activité de la maladie, chaque patient infecté par le VHC a subi un examen clinique comprenant un interrogatoire, un examen physique et une échographie.

Dosage des anti-HBs après vaccination Les anti-HBs ont été détectés à l'aide du CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irlande) un mois après la première et la troisième dose de vaccination. Bien que sans marqueurs sérologiques du VHB, les sujets ont été définis comme ayant des antécédents d'infection par le VHB ou de vaccination contre l'hépatite B si anti-HBs ≥ 100 mUI/ml un mois après la première dose de vaccination.

Test CMI Avant la première dose de vaccination et un mois après la troisième dose de vaccination, 43 sujets du groupe VHC et 37 sujets du groupe témoin sain ont été sélectionnés au hasard pour isoler les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) et tester la fonction CMI respectivement, y compris l'interféron -γ (IFN-γ), interleukine-2 (IL-2), interleukine-4 (IL-4), interleukine-5 (IL-5) et interleukine-6 ​​(IL-6). Le polypeptide S28-39, le polypeptide du CMH de classe I, le polypeptide du CMH de classe II et le HBsAg ont été utilisés respectivement comme stimulant immunologique cellulaire de l'IFN-γ. L'antigène de surface du virus de l'hépatite B a été utilisé comme stimulant immunologique cellulaire de l'IL-2, de l'IL-4, de l'IL-5 et de l'IL-6. Le polypeptide S28-39, les mélanges de polypeptides du CMH de classe I et les mélanges de polypeptides du CMH de classe II ont été synthétisés dans BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Pékin, Chine). HBsAg a été fourni par Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Shenzhen, en Chine).

Les PBMC séparés du sang anticoagulé sur EDTA ont été ajustés à la concentration de 2 × 106 cellules/mL. 100 μL de 2 × 106 cellules/mL de PBMC ont été ajoutés dans les plaques pré-enduites de PVDF à 96 puits et 100 μL de peptide HBsAg S28-39 (IPQSLDSWWTSL, concentration finale : 10 μg/mL), 100 μL de mélanges de polypeptides de classe I de MHC, 100 μL de mélange de polypeptides du CMH de classe II ou 100 μL de HBsAg (80 μg/mL) dans chaque puits. En ce qui concerne l'IL-2, l'IL-4, l'IL-5 et l'IL-6, les plaques ont été inondées avec 100 μL 2 × 106 cellules/mL PBMC et 100 μL HBsAg (80 μg/mL) dans chaque puits. Ensuite, ils ont été incubés à 37 °C, dans un incubateur à 5 % de CO2 et humidifié pendant 20 h (IFN-γ, IL-2) ou 40 h (IL-4, IL-5 et IL-6). Après incubation, les plaques ont été manipulées conformément au manuel d'instructions du kit R&D ELISPOT (R&D Systems, Inc.). Les cellules formant des taches (SFC) ont été dénombrées avec le système ImmunoSpotTM (Cellular Technology Ltd.).

Évaluation de la sécurité Les participants ont reçu des cartes de journal pour enregistrer l'apparition et la gravité des réactions locales sollicitées au site d'injection (douleur, induration, érythème, œdème, prurit) pendant 7 jours après la vaccination, réactions systémiques sollicitées (fièvre, maux de tête, fatigue, toux , myalgie, asthénie, vertige, diarrhée) et tout effet indésirable non sollicité pendant les 29 jours suivant la vaccination.

Analyses statistiques La saisie des données et la gestion de la base de données ont été réalisées respectivement par EPIDATA 3.0 et Microsoft Excel 2010. L'analyse des données a été effectuée par Stata 11.0. Les différences entre le groupe VHC et le groupe témoin sain dans les variables continues et catégorielles ont été examinées à l'aide d'une régression logistique conditionnée. Les sous-groupes de non-répondeurs et de faibles répondeurs par rapport aux répondeurs normaux et élevés ont été évalués en fonction des caractéristiques démographiques, des indicateurs biochimiques, des statuts de maladie hépatique et de l'ARN du VHC. Un test t de Student ou une ANOVA unidirectionnelle ont été utilisés pour comparer le titre moyen d'anti-HBs entre différents sous-groupes. Le test exact de Fisher a été utilisé pour comparer les taux de réponse. Un test non paramétrique a été utilisé pour comparer les points d'immunodotting. L'analyse de corrélation de rang de Sperman a été utilisée pour évaluer la corrélation entre les points d'immunodotting et les anti-HBs. Pour toutes ces comparaisons, un P<0,05 bilatéral est considéré comme statistiquement significatif.