Robusztus antitest- és citokinválasz a hepatitis B vakcinára a krónikus hepatitis C-ben szenvedő, nem kezelt betegek körében: Nyílt kontrollvizsgálat Kínában

A vizsgálat felépítése és a résztvevők A vizsgálatot a kínai Shandong tartomány három megyéjében (Yucheng, Xintai és Dongchangfu) végezték, ahol a tartományban a legmagasabb jelentett HCV esetszám volt. A potenciális krónikus HCV-fertőzött betegeket a kórházak kórlapjainak ellenőrzésével vagy a falusi orvosok megkérdezésével toborozták. Egészséges egyéneket véletlenszerűen választottak ki ugyanabban a megyében potenciálisan HCV-fertőzött betegek 3-5-szöröse. Kérdőíves vizsgálatot végeztünk és vérmintát vettünk minden potenciális betegről és egészséges személyről azonos módon.

Kérdőíves felmérés Kérdőíves felmérést végeztünk a résztvevők alapinformációinak összegyűjtésére, beleértve a demográfiai adatokat (életkor, nem, magasság és testsúly), a kórelőzményt (allergia, krónikus hepatitis C diagnózisa és kezelése, védőoltások, láz, stb. egyéb akut betegségek) és viselkedési állapot (dohányzás, ivás, terhesség és szoptatás).

Hepatitis B elleni védőoltás és nyomon követés Három adag hepatitis B oltóanyagot adtak be Rekombináns DNS-technikával Saccharomyces Cerevisiae-ben (20 μg HBsAg/1,0 ml adagonként, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, Guangdong tartomány, Kína) intramuszkulárisan a deltoid régióban minden résztvevőnek 0, 1 és 6 hónapos korban. A résztvevők vérmintáját egy hónappal az első és a harmadik oltás után vettük.

Laboratóriumi vizsgálatok és fizikális vizsgálat Szűrővizsgálat és fizikális vizsgálat HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HCV és HCV RNS-t minden alanynál megvizsgáltak a zárványvizitek során; szérum bilirubint, szérum albumint, protrombin időt, plazma ALT-t és aszpartát aminotranszferázt (AST) mutattak ki a HCV csoportra. A HBsAg-t, az anti-HBs-t, a HBeAg-t, az anti-HBe-t és az anti-HBc-t Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay-vel (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Írország) vizsgáltuk. Az anti-HCV-t ELISA-val mértük egy kereskedelmi készlettel (Intec products, INC, Xiamen, Kína). A HCV RNS-t kvantitatív valós idejű PCR-rel mértük a kereskedelemben kapható kitekkel (QIAGEN, Shenzhen, Kína). A szérum bilirubint, albumint, protrombin időt, plazma ALT-t és AST-t standard reagenssel és módszerekkel mértük. A betegség aktivitásának felmérése érdekében minden HCV-fertőzött beteg klinikai vizsgálaton esett át, beleértve a kihallgatást, fizikális vizsgálatot és ultrahangvizsgálatot.

Anti-HBs vizsgálat vakcinázás után Az anti-HBs-t CMIA-val (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Írország) mutatták ki egy hónappal az első és a harmadik vakcinázási adag után. Bár nem voltak szerológiai HBV-markerek, az alanyokat úgy határozták meg, hogy a kórelőzményében HBV-fertőzés vagy hepatitis B oltás szerepel, ha az anti-HBs ≥100 mIU/ml egy hónappal az oltás első adagja után.

CMI-teszt Az oltás első dózisa előtt és egy hónappal a harmadik vakcinázási adag után 43 alanyt a HCV-csoportból és 37 alanyt az egészséges kontrollcsoportból véletlenszerűen választottak ki, hogy izolált perifériás vér mononukleáris sejteket (PBMC) és vizsgálták a CMI-funkciót, beleértve az interferont is. -γ (IFN-y), interleukin-2 (IL-2), interleukin-4 (IL-4), interleukin-5 (IL-5) és interleukin-6 (IL-6). Az S28-39 polipeptidet, az I. osztályú MHC polipeptidet, az MHC II. osztályú polipeptidet és a HBsAg-t alkalmaztuk az IFN-y sejt immunológiai stimulánsaként. A hepatitis B vírus felszíni antigénjét az IL-2, IL-4, IL-5 és IL-6 sejtimmunológiai stimulánsaként használták. Az S28-39 polipeptid ，MHC I. osztályú polipeptid keverékeket és MHC II. osztályú polipeptid keverékeket a BO MAI JIE Technology Co. LTD-ben szintetizálták. (Peking, Kína). A HBsAg-ot a Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. szállította. (Shenzhen, Kína).

Az EDTA-val antikoagulált vérből elkülönített PBMC-ket 2 × 106 sejt/ml koncentrációra állítottuk be. 100 μL 2 × 106 sejt/mL PBMC-t adtunk az előre bevont PVDF 96-lyukú lemezekre és 100 μL HBsAg S28-39 peptidet (IPQSLDSWWTSL, végső koncentráció: 10 μg/mL), 100 MHC I osztályú μ10 peptid keverék. μL MHC II. osztályú polipeptid keverék vagy 100 μL HBsAg (80 μg/ml) minden lyukban. Amikor az IL-2-ről, IL-4-ről, IL-5-ről és IL-6-ról volt szó, a lemezeket 100 μL 2 × 106 sejt/mL PBMC-vel és 100 μL HBsAg-vel (80 μg/ml) öntöttük el minden egyes lyukban. Ezután 37 °C-on, 5% CO2 és párásított inkubátorban inkubáltuk 20 órán át (IFN-γ, IL-2) vagy 40 órán át (IL-4, IL-5 és IL-6). Inkubálás után a lemezeket az R&D ELISPOT Kit (R&D Systems, Inc.) használati útmutatója szerint kezeltük. A foltképző sejteket (SFC-k) az ImmunoSpotTM rendszerrel (Cellular Technology Ltd.) számba vettük.

Biztonsági értékelés A résztvevőket naplókártyákkal látták el, amelyek rögzítik az injekció beadásának helyén fellépő helyi reakciók (fájdalom, keményedés, bőrpír, ödéma, viszketés) előfordulását és súlyosságát az oltást követő 7 napon belül, a kért szisztémás reakciókat (láz, fejfájás, fáradtság, köhögés). , izomfájdalom, asthenia, szédülés, hasmenés), és bármilyen nemkívánatos mellékhatás az oltást követő 29 napon belül.

Statisztikai elemzések Az adatbevitelt és az adatbáziskezelést az EPIDATA 3.0, illetve a Microsoft excel 2010 szoftverrel végeztük. Az adatok elemzését a Stata 11.0 végezte. A HCV-csoport és az egészséges kontrollcsoport közötti különbségeket folyamatos és kategorikus változókban feltételes logisztikus regresszióval vizsgáltuk. A nem és az alacsony válaszadók alcsoportjait a normál és a magas válaszadókkal szemben a demográfiai jellemzők, a biokémiai mutatók, a májbetegségek és a HCV RNS alapján értékelték. Student-féle t-tesztet vagy egyutas ANOVA-t használtunk az átlagos anti-HBs titerek összehasonlítására a különböző alcsoportok között. A válaszadási arányok összehasonlítására Fisher-féle egzakt tesztet használtunk. Az immunodó foltok összehasonlítására nem paraméteres tesztet használtunk. Sperman rangkorrelációs analízist alkalmaztunk az immunodó foltok és az anti-HBs közötti összefüggés értékelésére. Mindezen összehasonlítások esetében a kétoldali P<0,05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető.