Robust antistoff- og cytokinrespons på hepatitt B-vaksine blant ikke-behandlede pasienter med kronisk hepatitt C: En åpen kontrollstudie i Kina

Studiedesign og deltakere Studien ble utført i tre fylker (Yucheng, Xintai og Dongchangfu) i Shandong-provinsen, Kina, som hadde de høyeste rapporterte HCV-tilfellene i provinsen. Potensielle pasienter med kronisk HCV-infeksjon ble rekruttert ved å sjekke sykejournalene til sykehusene eller ved å henvende seg til landsbyens leger. Friske individer ble tilfeldig utvalgt av 3 til 5 ganger potensielle pasienter med HCV-infeksjon i samme fylke. Spørreskjemaundersøkelse ble utført og blodprøver ble samlet inn for hver potensiell pasient og friskt individ på samme måte.

Spørreskjemaundersøkelse Vi utførte en spørreskjemabasert undersøkelse for å samle inn grunnleggende informasjon om deltakerne, inkludert demografisk informasjon (alder, kjønn, høyde og vekt), sykehistorie (allergi, diagnose og behandling av kronisk hepatitt C, vaksinasjon, feber og andre akutte sykdommer), og atferdsstatus (røyking, drikking, graviditet og amming).

Hepatitt B-vaksinasjon og oppfølging Tre doser hepatitt B-vaksine laget av rekombinant DNA-teknikker i Saccharomyces Cerevisiae (20 μg HBsAg/1,0 ml per dose, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, Guangdong-provinsen, Kina) ble gitt intramuskulært i deltoideusregionen til alle deltakere ved henholdsvis 0, 1 og 6 måneder. Blodprøver fra deltakerne ble tatt en måned etter første og tredje vaksinasjonsdose.

Laboratorieanalyser og fysisk undersøkelse Screeningtest og fysisk undersøkelse HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HCV og HCV RNA ble analysert for alle forsøkspersoner ved inklusjonsbesøk; serumbilirubin, serumalbumin, protrombintid, plasma-ALAT og aspartataminotransferase (AST) ble påvist for HCV-gruppen. HBsAg, anti-HBs, HBeAg, anti-HBe og anti-HBc ble analysert av Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irland). Anti-HCV ble målt ved ELISA med et kommersielt sett (Intec products, INC, Xiamen, Kina). HCV RNA ble målt ved kvantitativ sanntids PCR med kommersielt tilgjengelige sett (QIAGEN, Shenzhen, Kina). Serumbilirubin, albumin, protrombintid, plasma ALT og AST ble målt ved bruk av standard reagens og metoder. For å vurdere sykdomsaktivitet fikk hver pasient med HCV-infeksjon klinisk undersøkelse, inkludert avhør, fysisk undersøkelse og ultralyd.

Anti-HBs-analyse etter vaksinasjon Anti-HBs ble påvist ved bruk av CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Ireland) én måned etter den første og den tredje vaksinasjonsdosen. Selv uten serologiske HBV-markører, ble forsøkspersoner definert som å ha en historie med HBV-infeksjon eller hepatitt B-vaksinasjon dersom anti-HBs ≥100 mIU/ml en måned etter den første vaksinasjonsdosen.

CMI-analyse Før den første vaksinasjonsdosen og en måned etter den tredje vaksinasjonsdosen ble 43 personer fra HCV-gruppen og 37 personer fra den friske kontrollgruppen valgt tilfeldig til henholdsvis isolerte perifere mononukleære blodceller (PBMC) og testet CMI-funksjon, inkludert interferon -y (IFN-y), interleukin-2 (IL-2), interleukin-4 (IL-4), interleukin-5 (IL-5) og interleukin-6 (IL-6). S28-39 polypeptid, MHC klasse I polypeptid, MHC klasse II polypeptid og HBsAg ble brukt som henholdsvis celleimmunologisk stimulant av IFN-y. Hepatitt B-virusoverflateantigen ble brukt som celleimmunologisk stimulant av IL-2, IL-4, IL-5 og IL-6. S28-39 polypeptid ，MHC klasse I polypeptidblandinger og MHC klasse II polypeptidblandinger ble syntetisert i BO MAI JIE Technology Co. LTD. (Beijing, Kina). HBsAg ble levert av Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. (Shenzhen, Kina).

PBMC-er separert fra EDTA-antikoagulert blod ble justert til konsentrasjonen på 2 × 106 celler/ml. 100 μL 2 × 106 celler/ml PBMCer ble tilsatt i de forhåndsbelagte PVDF 96-brønns platene og 100 μL HBsAg S28-39 peptid (IPQSLDSWWTSL, sluttkonsentrasjon: 10 μg/ml), 100 μL polypeptidblandinger, 100 μL MHC. μL MHC klasse II polypeptidblanding eller 100 μL HBsAg (80 μg/mL) i hver brønn. Når det gjaldt IL-2, IL-4, IL-5 og IL-6, ble platene oversvømmet med 100 μL 2 × 106 celler/ml PBMC og 100 μL HBsAg (80μg/mL) i hver brønn. Deretter ble de inkubert ved 37 °C, i en 5% CO2 og fuktet inkubator i 20 timer (IFN-y, IL-2) eller 40 timer (IL-4, IL-5 og IL-6). Etter inkubering ble platene manipulert i henhold til R&D ELISPOT Kit (R&D Systems, Inc.) instruksjonshåndbok. Spot-dannende celler (SFCs) ble oppregnet med ImmunoSpotTM-systemet (Cellular Technology Ltd.).

Sikkerhetsvurdering Deltakerne fikk dagbokkort for å registrere forekomsten og alvorlighetsgraden av etterspurte lokale reaksjoner på injeksjonsstedet (smerte, indurasjon, erytem, ​​ødem, kløe) i løpet av 7 dager etter vaksinasjon, etterspurte systemiske reaksjoner (feber, hodepine, trøtt, hoste) , myalgi, asteni, svimmelhet, diaré), og alle uønskede bivirkninger i løpet av 29 dager etter vaksinasjon.

Statistiske analyser Dataregistrering og databasebehandling ble utført av henholdsvis EPIDATA 3.0 og Microsoft excel 2010. Dataanalyse ble utført av Stata 11.0. Forskjeller mellom HCV-gruppe og frisk kontrollgruppe i kontinuerlige og kategoriske variabler ble undersøkt ved bruk av betinget logistisk regresjon. Undergrupper av ikke- og lav-respondere versus normal- og høy-respondere ble evaluert i forhold til demografiske egenskaper, biokjemiske indikatorer, leversykdomsstatuer og HCV RNA. En Students t-test eller enveis ANOVA ble brukt for å sammenligne gjennomsnittlig anti-HBs-titer mellom forskjellige undergrupper. Fishers eksakte test ble brukt for å sammenligne svarprosentene. Ikke-parametrisk test ble brukt for å sammenligne immundotting-flekker. Sperman rangkorrelasjonsanalyse ble brukt for å evaluere korrelasjonen mellom immunodotting-flekker og anti-HBs. For alle disse sammenligningene anses en tosidig P<0,05 som statistisk signifikant.