異なる段階で子宮内膜症に罹患した女性の子宮内膜症組織におけるM1およびM2マクロファージの評価。

背景と理論的根拠: 子宮内膜症は、子宮腔外の機能的な子宮内膜組織、腺、間質の異所性の存在と成長によって定義されるエストロゲン依存性疾患です (Kavoussi et al, 2016)。 子宮内膜症の病因は依然として議論の余地があります.免疫、ホルモン、遺伝、およびエピジェネティックな要因がすべて関与している可能性があり、それを説明するためにいくつかの理論が提案されています.

この疾患は、生殖年齢の女性の 2 ～ 10%、不妊症の女性の 50% に影響を及ぼし (Dunselman et al, 2014)、骨盤痛 (Triolo et al, 2013; Butticè et al, 2013)、異常出血、不妊/不妊症を引き起こす可能性があります。その結果、重大な心理的問題が発生します (Laganà et al, 2015)。 子宮内膜症は、子宮内膜移植片、プラーク、子宮内膜腫および/または癒着の数、サイズ、および表面および/または深部の位置に応じて分類されます。 子宮内膜症の最も使用されている分類は、米国生殖医学会によって開発されました (Rock JA、1995)。ただし、他の分類は、深部浸潤性子宮内膜症 (Haas et al, 2011) または子宮内膜症と不妊症 (Adamson et al, 2010)。

広く証明されているように (Donnez et al, 2016)、中等度/重度の子宮内膜症に関連する不妊症は、機械的要因、つまり通常の骨盤の解剖学的構造の歪み/転覆によるものであることが一般に認められています。 それどころか、極小/軽度の子宮内膜症に関連する不妊症/生殖能力低下の背後にある要因はあまり明確ではありません. それにもかかわらず、今日まで、子宮内膜症に関連する不妊症を徹底的に説明した仮説メカニズムはありませんが、そのような疾患は、遺伝的およびエピジェネティックな修飾を含む複数の要因によって引き起こされる可能性があります（Sofo et al、2015; Maniglio et al、2016）。

蓄積された証拠 (Laganà et al, 2013; Laganà et al, 2016) は、子宮内膜症に罹患した女性の腹膜微小環境が、常在マクロファージの関与、および末梢単核の誘引および動員を伴う、多くの局所的な炎症修復現象を受けることを示唆しています。血液から腹腔への細胞（単球およびリンパ球）：子宮内膜症の間、サイトカインに対処する細胞増殖（Pizzo et al、2002）およびアポトーシスの調節不全（Sturlese et al、2011; Salmeriら、2015)。

単球は、感染または炎症の部位に移動し、マクロファージで分化し、抗原提示細胞 (APC) として機能するため、適応免疫において重要な役割を果たします。

メッシーナの Elie Metchnikoff による食作用の最初の同定 (JAMA、1968 年) 以来、ヒトデの幼虫での実験の後、多くの進歩により、マクロファージの食細胞としての役割とは別に、マクロファージの幅広い概観を得ることができました。

周囲の微小環境は、一時的で可逆的な分極に向かってマクロファージの可塑性に対処する可能性があります。 これらの偏った表現型は、炎症誘発性または抗炎症性の状態を反映しており、時間の経過とともに変化する可能性があります。 それらは、「古典的に活性化された」マクロファージ (M1) と「代替的に活性化された」マクロファージ (M2) の 2 つの主な集団に機能的に分類できます (Sica & Mantovani, 2012)。 M1 と M2 がマクロファージ活性化の全スペクトルの 2 つの末端を表すことは広く受け入れられていますが (Liu et al, 2014)、最近のデータ (Locati et al, 2013; Mantovani et al, 2013; Capobianco & Rovere-Querini, 2013)これらの 2 つの集団を次のように特徴付けることができます。

• M1 マクロファージ: CD14+ CD68+ CCR7+ CD80+
• M2 マクロファージ: CD14+ CD68+ CD163+ CD206+

研究集団：研究者は、組織学的に確認された子宮内膜症（症例）および卵巣機能性嚢胞（対照）の影響を受けた患者を選択し、腹腔鏡手術を受ける。 改訂された米国生殖医学会の子宮内膜症分類 (Rock JA、1995) に従って、子宮内膜症患者は 4 つのグループに分類されます。

すべての腹腔鏡手術は、月経周期の増殖期に行われます。 研究者は、他の骨盤障害、慢性循環器疾患、自己免疫疾患または腫瘍性疾患の影響を受けている女性、および過去6か月間に抗炎症薬またはホルモン薬または免疫調節薬を服用した女性を研究から除外します。

組織サンプルの調製とマクロファージの特徴付け: 組織切片 (症例では子宮内膜症組織、対照では卵巣機能性嚢胞) を切り刻み、最終濃度 3.4 mg/ml パンクレアチン、0.1 mg/ml ヒアルロニダーゼ、1.6 mg/ml を含む酵素カクテルでインキュベートします。 2 mg/ml D-グルコースを含むハンクス緩衝生理食塩水 (HBSS) 中のコラゲナーゼ I を 37°C で 2 時間処理します。 消化後、250 μm メッシュスクリーンを通して細胞をこすって分散させ、HBSS で洗浄します。 組織細胞は、フローサイトメトリー分析のために染色および固定されます。 マクロファージ分離の前に、死細胞除去キットを使用して死細胞を培養物から除去します。 細胞生存率は、トリパンブルー排除によって評価されます。

マクロファージ マーカーの表面発現を評価するために、組織サンプルは、CD14、CD68、CCR7、および CD80 に対する蛍光色素結合モノクローナル抗体を使用してフローサイトメトリー用に染色され、M1 を識別します。 M2.

統計分析: 連続変数の正規分布の仮定は、適合度についてコルモゴロフ-スミルノフ検定によって検定されます。 すべての推論分析は、ノンパラメトリック統計検定を使用して実行されます。 グループ間の非正規分布変数は、Kruskal-Wallis 検定を使用して比較されます。 統計的有意性の範囲は P < .05 です。 さらに、治験責任医師は、事後多重比較検定を使用して、コントロールに対して、または各ステージに対してデータを分析します。