新生血管加齢黄斑変性症におけるヒト角膜内皮細胞に対するアフリベルセプトの効果

血管内皮増殖因子 (VEGF) 阻害剤の硝子体内注射は、眼科診療における血管新生加齢黄斑変性症 (AMD) の治療にますます使用されています.1-4 最も一般的に使用される VEGF 阻害剤は、ベバシズマブ (Avastin®、Genentech、米国カリフォルニア州サンフランシスコ)、ラニビズマブ (Lucentis®、Genentech、米国カリフォルニア州サンフランシスコ)、およびアフリベルセプト (Eylea®、Regeneron Pharmaceuticals Inc.、Tarrytown、Newヨーク、米国) のうち、アフリベルセプトとラニビズマブは、この適応症について食品医薬品局 (FDA) によって承認されました。

アフリベルセプトは、ヒト IgG の Fc ドメインに融合された受容体 1 および 2 (VEGFR1 および VEGFR2) からのヒト VEGF 受容体細胞外ドメインからなる組換え融合タンパク質を含む、最も最近開発された VEGF 阻害剤です。 このタンパク質にはすべてのヒトアミノ酸配列が含まれているため、患者の免疫原性の可能性が最小限に抑えられます。 ラニビズマブと比較してアフリベルセプトの硝子体内半減期が長いことは、注射、モニタリング、および診察の点でより低い治療負荷につながる可能性があります。 いくつかの in vitro 研究では、網膜障害の治療に通常使用される濃度のアフリベルセプトが眼細胞に対して毒性を示さないことが示されています。 ただし、ラニビズマブとベバシズマブの両方が角膜内皮に有害な影響を及ぼさないことが示されていますが、ヒト角膜内皮に対する硝子体内アフリベルセプトの効果はこれまで報告されていません。 特に高齢者集団における角膜内皮の機能的重要性を考慮して、本研究は、血管新生型 AMD 患者のヒト角膜内皮細胞に対するアフリベルセプトの in vivo 毒性を評価するように設計されました。

血管新生型 AMD の 34 人の連続した患者 (男性 19 人、女性 15 人、平均年齢 66.4±3.4 歳、年齢範囲 57 ～ 76 歳) の 34 眼が、この観察的前向き研究に採用されました。 研究プロトコルは倫理委員会によって承認され、ヘルシンキ宣言の教義を順守した。 すべての参加者は、研究関連の手順の前にインフォームド コンセントに署名しました。

すべての参加者は、アフリベルセプトの硝子体内注射を毎月 1 回、3 か月連続して受け、必要に応じてその後の治療が適用されました。 追跡期間は6ヶ月でした。

硝子体内アフリベルセプト注射の手順は、標準的な無菌技術を用いて行った。 プロパラカイン塩酸塩点眼薬 (Alcaine、Alcon Laboratories Inc、米国テキサス州フォートワース) で局所麻酔を行った後、まぶたと下結膜円蓋を 5% ポビドン ヨードで滅菌しました。 アフリベルセプト (2.0 mg、0.05 ml) は、27 ゲージの針を使用して、扁平部 (輪部の 4 mm 後ろ) から注射されました。

最初のアフリベルセプト硝子体内注射の前および注射の１、３、６ヶ月後に、非接触鏡面顕微鏡法（Ｔｏｍｅｙ ＥＭ－３０００ Ｓｐｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、Ｔｏｍｅｙ Ｃｏｒｐ、日本）を角膜中心部で実施した。 盲目の観察者 (S.D.) が角膜内皮画像を取得しました。 鏡面顕微鏡は、内皮細胞密度 (ECD)、細胞サイズの変動係数 (CoV)、多形症の客観的尺度、および六角形細胞のパーセンテージ (Hex%)、多形性の指標を自動的に評価しました。 鏡面顕微鏡法は、光学パキメトリー測定も提供しました。 内皮に対するアフリベルセプトの急性毒性は、角膜浮腫および前房反応の存在、ならびに注射後初日の眼圧によって評価された。 未処置の眼を対照群とした。

アフリベルセプトの硝子体内注射は、ヒト角膜内皮細胞に悪影響を及ぼしませんでした。角膜浮腫、前房反応、または高眼圧である内皮に対するアフリベルセプトの急性毒性効果の兆候は、いずれの眼にも記録されませんでした。注射から1日目。

Aflibercept は最近承認された抗 VEGF 薬で、血管新生型 AMD の新しい治療法を提供します。 これは VEGF 受容体 1 と 2 の融合タンパク質です。ラニビズマブやベバシズマブと比較して VEGF への親和性が高く、アフリベルセプトの作用持続時間が長くなります。 実験的および臨床試験では、AMD の治療におけるアフリベルセプトの有効性は、ラニビズマブおよびベバシズマブの有効性に匹敵することが示されています。 アフリベルセプトをベバシズマブまたはラニビズマブと比較した研究では、アフリベルセプトは、細胞形態の変化、アポトーシス、または細胞生存率、細胞密度または増殖の永久的な減少など、網膜細胞株に対する悪影響がほとんどありませんでした。 アフリベルセプトは、ラニビズマブおよびベバシズマブよりも VEGF に対する結合親和性が高く、ラニビズマブおよびベバシズマブよりも硝子体内注射の頻度が少なくて済みます。 アフリベルセプトの硝子体半減期はベバシズマブより短いが、ラニビズマブより長い。 ブタの眼から調製された網膜色素上皮および網膜培養において、アフリベルセプトは最小濃度で 6 時間にわたって VEGF を完全に阻害し、ベバシズマブおよびラニビズマブと比較して長時間の VEGF 阻害を示しました。 しかし、アフリベルセプトのこの利点は、長期使用による副作用の可能性について懸念を引き起こします。

角膜内皮は、房水から実質への流体の流れに対する障壁です。 間質の水和を調節することにより、角膜の透明度を維持する役割があります。 内皮細胞密度は年齢とともに減少し、病気、外傷、または薬物による角膜内皮へのさらなる損傷は、角膜浮腫、角膜透明度の低下、および視力の喪失を引き起こす機能の喪失につながる可能性があります。 したがって、角膜内皮を健康に保つことは、特に高齢者にとって非常に重要です。 硝子体内注射により、かなりの濃度の VEGF 阻害剤がヒト角膜内皮細胞と接触します。 以前の研究では、VEGF とその受容体が角膜内皮と角膜上皮で発現し、VEGF 阻害剤は硝子体内注射後に房水で検出できることが示されており、どちらも VEGF 阻害剤がヒト角膜内皮細胞に対して細胞毒性を示す可能性があることを示しています。角膜内皮へのラニビズマブまたはベバシズマブの硝子体内注射の効果は以前に研究されています。 ペレスリコ等。ラニビズマブの硝子体内注射は、注射後7日または6ヶ月で内皮細胞密度、CoV、およびHex％に有意な影響を及ぼさなかったと報告しました。 ラニビズマブの硝子体内注射を 6 か月間繰り返しても、角膜内皮に実質的な変化は生じませんでした。 チェン等。 2.5 mgのベバシズマブの硝子体内注射後6か月までのヒト角膜の厚さの変化と角膜内皮細胞密度を評価し、硝子体内のベバシズマブが角膜内皮に有害な影響を及ぼさないことを発見しました。 In vitro 研究では、ベバシズマブがヒト由来の角膜細胞に対して毒性がないことも示されました。 さらに、ラニビズマブの房内注射はウサギ角膜の内皮細胞形態の悪化を引き起こしましたが、ベバシズマブの房内注射はウサギまたはヒト角膜の内皮細胞の生存率または形態に影響しませんでした。 ベバシズマブは、in vitro でヒト角膜内皮細胞および線維芽細胞のアポトーシスまたは壊死を誘発しませんでした。 最近の研究では、3 か月連続してベバシズマブまたはラニビズマブを毎月硝子体内注射しても、糖尿病性黄斑浮腫患者の角膜形態に影響を与えず、内皮に有害な影響を及ぼさないことが報告されました。 この本研究の結果は、ラニビズマブもベバシズマブも角膜内皮細胞に悪影響を及ぼさないことを示すこれらの研究とも一致しています。 研究者らは、CCT、ECD、CoV、および Hex% が、どちらの眼にもアフリベルセプトの硝子体内注射後 6 か月間変化しなかったことを発見しました。 さらに、CCT、ECD、CoV、および Hex% は、硝子体内注射後の 6 か月のフォローアップ前およびフォローアップ中に、硝子体内アフリベルセプトで治療した眼と対側の未治療眼との間に統計的に有意な差を示さなかった。

この研究の主な制限は、サンプルサイズが限られていることであり、これにより、ヒト角膜内皮に対する硝子体内アフリベルセプトの効果について決定的な結論に達することができなくなりました。 それにもかかわらず、このパイロット研究は、硝子体内アフリベルセプト注射がヒト角膜内皮に悪影響を及ぼさないという最初の証拠を提供します。

結論として、アフリベルセプトの臨床的に有効な用量の硝子体内注射は、6 か月間に平均 4 回、鏡面顕微鏡で評価したヒト角膜内皮に有害な影響を誘発しません。 硝子体内アフリベルセプトが角膜毒性なしに新生血管型 AMD の治療に安全に使用できることを確認するには、さらに前向きで大規模で長期にわたる研究が必要です。