CAPA-IVM 対 STANDARD IVM

患者の準備

PCOMの患者は、研究への登録が許可されています：（1）通常の月経周期の長さ（≤35日）の女性、および（2）月経量が少ない女性（月経が35日以上の間隔で発生し、年に4〜9回の月経がある）または完全な無月経。 妊娠が終わるまで患者を追跡した。

患者は、月経周期の 2 日目に最初のクリニックを訪れます。 今回の訪問では、FSH (卵胞刺激ホルモン)、LH (黄体形成ホルモン)、エストラジオール、プロゲステロンの評価のために血液サンプルが採取され、午後に 1 日 1 回 150 IU (国際単位) のゴナドトロピン注射を受けました。 すべての患者は翌日の朝 (サイクル 3 日目) に超音波検査を受けに戻り、ゴナドトロピンの最終投与は午後 (午後 2 時) に行われました。 すべての卵胞の直径が 8 mm 未満になったとき、ゴナドトロピンの別の投与量が投与され、患者は翌日超音波検査と血液検査のために再来し、その日の午後 (午後 2 時) にゴナドトロピンの最終投与を受けました。 ゴナドトロピン注射の最大回数は 3 回であり、すべての患者で最後のゴナドトロピン注射の 42 ～ 46 時間後に採卵が予定されています。 FSH、LH、エストラジオール、プロゲステロンのレベルを測定するための超音波検査と血液検査は、OPU (卵母細胞採取) の日に行われます。 OPU では、穿刺前に卵胞サイズを測定します。 大きい毛包 (≥6 mm) が最初に穿刺され、次に針がフラッシュされ、次に小さい毛包 (<6 mm) が穿刺されます。 したがって、各チューブには、特定のサイズ (<6 または ≥6 mm) の COC (卵丘-卵母細胞複合体) が含まれています。

卵子培養

ＣＡＰＡ－ＩＶＭ群の患者からの卵母細胞を収集し、減数分裂阻害剤としてのＣＮＰ（Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド）の存在下で処理する。 CAPA-IVM グループでは、1 mIU/mL rFSH、5 ng/mL を添加した CAPA 培地 (Medicult IVM 培地、Origio、デンマーク) を使用して、COC を 10 COC/ウェルで 4 ウェル ディッシュ (Nunc、デンマーク) に播種します。インスリン、10 nM エストラジオール、10 mg/mL ヒト血清アルブミン [SAGE、デンマーク] および 25 nM (nanoMol) CNP をオイル下、37°C​​、空気中 6% 二酸化炭素で 24 時間)。 24 時間後、COC を洗浄し、5 ng/mL インスリン、10 nM エストラジオール、100 ng/mL ヒト組換えアンフィレグリン、および 100 mIU/mL rFSH (組換え卵胞刺激ホルモン) を含む IVM 培地 (Origio、デンマーク) に移し、インキュベートします。油中、37°C​​、空気中 6% 二酸化炭素で 30 時間。

標準 IVM グループ (コントロール) では、75 mIU/mL 組換え FSH (Merck、スイス)、100 mIU/mL hCG (MSD、米国) を添加した IVM 培地を使用して、COC を 10 COC/ウェルで 4 ウェルディッシュにプレーティングしました。 、0.01 mg/mL 成長ホルモン (Merck、スイス) および 10 mg/mL ヒト血清アルブミン (SAGE、デンマーク)。 CAPA-IVMグループと同じ物理的および大気条件を使用して、COCを30時間インキュベートします。

受精と胚培養

IVM の後、成熟した卵母細胞を細胞質内精子注入法 (ICSI) を使用して受精させ、37°C​​、5% 二酸化炭素、5% 酸素のインキュベーターで培養します。 ICSI後16～18時間で受精確認を行います。 胚は、Global Total LP (Life Global、カナダ) で 30 μL の微小液滴あたり 2 ～ 3 個の胚のグループで 3 日目に培養されます。 凍結基準を満たす胚は、3日目の切断胚としてガラス化されました（Cryotech、日本）。 断片化が 30% を超え、細胞数が 6 未満で、多核形成と定義される非常に品質の低い胚 (胚の品質評価に関するイスタンブールのコンセンサス) は凍結されません。

子宮内膜プライミングと胚移植

新鮮胚移植は行っておりません。 患者は、月経周期の 2 日目からエストラジオール 2 mg を 1 日 4 回経口投与されます。 少なくとも 10 日間のエストラジオール治療期間の後、子宮内膜の厚さが 8 mm 以上の場合、プロゲステロン 200 mg を 1 日 4 回膣内投与します。 胚移植は、プロゲステロンを開始してから 3 日後に予定されています。 血清ベータ hCG は、胚移植の 14 日後にテストされます。 女性が妊娠し、β ヒト絨毛性ゴナドトロピン (hCG) が 5 mIU/mL を超える場合、プロゲステロンの投与は少なくとも妊娠 11 週まで同じ用量で維持されます。 妊娠の可能性を判断するための超音波スキャンは、妊娠 7 週で行われます。

PCOSにおけるART（生殖補助医療）処置の安全性

安全性は、各診療所の訪問時に監視されます。副作用が発生した場合は、患者に質問して検査し、有害事象と重篤な有害事象を症例報告書に記録します。 有害事象は、最初の試験訪問と比較して、試験中に出現または悪化する予期しない医学的出来事（症状または徴候、異常な検査所見または疾患）として定義されます。 子宮外妊娠、流産、過剰摂取、過敏症、毒性などの投薬関連反応、および採卵に関連するあらゆる有害な結果を含む可能性のある有害事象。 重篤な有害事象は、死亡、生命を脅かす、必要な入院または既存の入院の延長、または永続的または重大な障害または無能力をもたらす予期しない医学的出来事として定義されます。 先天性異常または先天性欠損症は、重大な有害事象と見なされます。

統計分析

この研究の主な目標は、実行可能性、受容性、および結果の変動性を判断して、より大規模で十分な出力の有効性試験を計画するのに役立てることです。 計画されたサンプルサイズは 80 人の患者 (グループあたり 40 人) であり、実現可能性の結果に関して比較的正確な結論が得られるはずです。 CAPA-IVM が当センターで臨床的に使用されたのはこれが初めてであることを考えると、このパイロット研究の目的は、臨床診療における新しい介入の出生率と関連する 95% 信頼区間 (CI) を推定することです。 Wilcoxon 順位和などのノンパラメトリック統計手法は、連続または順序結果に適用されます。 2 つの中央値の差の 95% 信頼区間 (CI) を推定するために、ブートストラップおよび関連するリサンプリング法が適用されます。 アウトカムの発生率は治療群ごとに推定され、群間の差は相対リスク (RR)、RR の 95% CI、およびフィッシャーの正確確率検定を使用して分析されました。 サブグループ分析は、卵胞サイズ (<6 対 ≥6 mm) に基づいて行われます。 データは、標準偏差 (SD)、中央値と四分位範囲 (IQR)、または比率を含む平均値として表示されます。 すべての分析は R (バージョン 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing、ウィーン、オーストリア)。 統計的有意性は、p<0.05 として定義されます。