CAPA-IVM versus STANDARD IVM

Pasientens forberedelse

Pasienter med PCOM har tillatelse til å delta i studien: (1) kvinner med normal menstruasjonssykluslengde (≤35 dager), og (2) kvinner med oligomenoré (menstruasjon forekommer med intervaller >35 dager med 4-9 perioder/år) eller total amenoré. Pasientene ble fulgt opp til slutten av svangerskapet.

Pasientene har sitt første klinikkbesøk på dag 2 i menstruasjonssyklusen. Ved dette besøket ble det tatt en blodprøve for vurdering av FSH (follikkelstimulerende hormon), LH (luteiniserende hormon), østradiol og progesteron, og de får sin gonadotropininjeksjon 150 IE (internasjonal enhet) en gang daglig på ettermiddagen. Alle pasienter kommer tilbake om morgenen neste dag (syklusdag 3) for ultralyd, og siste dose gonadotropin ble gitt om ettermiddagen (14.00). Da alle folliklene var <8 mm i diameter, ble det gitt en ny dose gonadotropin, og pasientene kom tilbake dagen etter for ultralyd, blodprøver og fikk sin siste dose gonadotropin samme ettermiddag (14.00). Maksimalt antall gonadotropininjeksjoner er tre, og uthenting av oocytter er planlagt 42-46 timer etter siste gonadotropininjeksjon hos alle pasienter. Ultralyd og blodprøver for å bestemme FSH-, LH-, østradiol- og progesteronnivåer utføres på dagen for OPU (Oocyte Pick-up). Under OPU måles follikkelstørrelsen før punktering. Større follikler (≥6 mm) punkteres først, deretter spyler nålen, deretter punkteres mindre follikler (<6 mm). Derfor inneholder hvert rør p-piller (Cumulus-Oocyte Complex) av en bestemt størrelse (<6 eller ≥6 mm).

Oocyttkultur

Oocytter fra pasienter i CAPA-IVM-gruppen samles og behandles i nærvær av CNP (C-type Natriuretic Peptide) som meiotisk inhibitor. I CAPA-IVM-gruppen blir p-piller belagt i en 4-brønns skål (Nunc, Danmark) ved 10 p-piller/brønn ved bruk av CAPA-medium (Medicult IVM-medium; Origio, Danmark) supplert med 1 mIU/mL rFSH, 5 ng/mL insulin, 10 nM østradiol, 10 mg/ml humant serumalbumin [SAGE, Danmark] og 25 nM (nanoMol) CNP under olje i 24 timer ved 37 °C, 6 % karbondioksid i luft). Etter 24 timer vaskes p-piller og overføres til IVM-medium (Origio, Danmark) som inneholder 5 ng/ml insulin, 10 nM østradiol, 100 ng/ml humant rekombinant amfiregulin og 100 mIU/mL rFSH (rekombinant follikkelstimulerende hormon), og under olje i 30 timer ved 37°C, 6 % karbondioksid i luft.

I standard IVM-gruppen (kontroll) ble p-piller belagt i en 4-brønners skål med 10 p-piller/brønn ved bruk av IVM-medium supplert med 75 mIU/mL rekombinant FSH (Merck, Sveits), 100 mIU/mL hCG (MSD, USA) 0,01 mg/ml veksthormon (Merck, Sveits) og 10 mg/ml humant serumalbumin (SAGE, Danmark). P-piller inkuberes i 30 timer ved å bruke de samme fysiske og atmosfæriske forholdene som CAPA-IVM-gruppen.

Befruktning og embryokultur

Etter IVM blir modne oocytter befruktet ved bruk av intracytoplasmatisk spermieinjeksjon (ICSI) og dyrket i en inkubator ved 37 °C, 5 % karbondioksid, 5 % oksygen. Befruktningskontroll utføres 16-18 timer etter ICSI. Embryoer dyrkes til dag 3 i Global Total LP (Life Global, Canada) i grupper på 2-3 embryoer per 30 µL mikrodråpe. Embryoer som oppfyller frysekriteriene ble forglasset (Cryotech, Japan) som spaltende dag 3-embryoer. Embryoer av ekstremt dårlig kvalitet (Istanbul konsensus om embryokvalitetsvurdering) definert som fragmentering >30 %, <6 celler og multinukleering fryses ikke.

Endometriepriming og embryooverføring

Ingen ferske embryooverføringer utføres. Pasienter får oral østradiol 2 mg 4 ganger daglig fra dag 2 i menstruasjonssyklusen. Etter en østradiolbehandlingsperiode på minst 10 dager og når endometrietykkelsen var ≥8 mm, gis progesteron 200 mg intravaginalt 4 ganger daglig. Embryooverføring er planlagt 3 dager etter oppstart av progesteron. Serum beta hCG testes 14 dager etter embryooverføring. Hvis en kvinne blir gravid, beta-humant koriongonadotropin (hCG) >5 mIU/ml, opprettholdes progesteronadministrasjonen i samme dose til minst 11 uker av svangerskapet. En ultralydsskanning for å bestemme levedyktigheten av graviditet utføres ved 7 ukers svangerskap.

Sikkerhet ved ART-prosedyren (Assisted Reproductive Technology) i PCOS

Sikkerheten overvåkes ved hvert klinikkbesøk eller, hvis noen bivirkninger oppsto, ved å avhøre og undersøke pasienten, med bivirkninger og alvorlige bivirkninger registrert på saksrapportskjemaer. Bivirkninger er definert som enhver uventet medisinsk hendelse (symptomer eller tegn, unormale laboratoriefunn eller sykdommer) som dukker opp eller forverres under forsøket, i forhold til det første prøvebesøket. Mulige bivirkninger inkludert ektopisk graviditet, spontanabort, medisinrelaterte reaksjoner som overdose, sensitivitet og toksisitet, og eventuelle uønskede utfall relatert til eggsamling. Alvorlige uønskede hendelser er definert som enhver uventet medisinsk hendelse som resulterte i død, livstruende, nødvendig sykehusinnleggelse eller forlengelse av eksisterende sykehusinnleggelse, eller resulterte i vedvarende eller betydelig funksjonshemming eller uførhet. Medfødt anomali eller fødselsdefekt anses å være alvorlige bivirkninger.

Statistisk analyse

Et hovedmål med denne studien er å bestemme gjennomførbarhet, akseptabilitet og resultatvariabilitet for å hjelpe til med å planlegge en større, tilstrekkelig drevet effektforsøk. Den planlagte prøvestørrelsen er 80 pasienter (40 per gruppe), noe som bør tillate relativt presise konklusjoner angående gjennomførbarhetsresultater. Gitt at dette er første gang CAPA-IVM har blitt brukt klinisk ved vårt senter, er målet med denne pilotstudien å estimere levende fødselsraten og tilhørende 95 % konfidensintervaller (CI) for den nye intervensjonen i klinisk praksis. Ikke-parametriske statistiske metoder som Wilcoxon rangsum brukes på kontinuerlige eller ordinære utfall. For å estimere 95 % konfidensintervall (CI) for forskjellen mellom to medianer, brukes bootstrapping og relaterte resamplingmetoder. Forekomsten av utfall er estimert for hver behandlingsgruppe, og forskjellen mellom gruppene ble analysert ved bruk av relativ risiko (RR), 95 % KI av RR og Fisher eksakt test. En undergruppeanalyse utføres basert på follikkelstørrelse (<6 versus ≥6 mm). Data presenteres som gjennomsnittsverdier med standardavvik (SD), medianer og interkvartile områder (IQRs), eller proporsjoner. Alle analyser er utført ved bruk av R (versjon 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Wien, Østerrike). Statistisk signifikans er definert som p<0,05.