CAPA-IVM versus IVM PADRÃO

preparação dos pacientes

Pacientes com PCOM podem se inscrever no estudo: (1) mulheres com ciclos menstruais normais (≤35 dias) e (2) mulheres com oligomenorréia (menstruação ocorrendo em intervalos >35 dias com 4-9 períodos/ano) ou amenorréia total. As pacientes foram acompanhadas até o final da gestação.

As pacientes têm sua primeira visita clínica no dia 2 do ciclo menstrual. Nesta visita foi coletada amostra de sangue para avaliação de FSH (Hormônio Folículo Estimulante), LH (Hormônio Luteinizante), estradiol e progesterona, e receberam injeção de gonadotrofina 150 UI (unidade internacional) uma vez ao dia no período da tarde. Todos os pacientes retornam na manhã do dia seguinte (dia 3 do ciclo) para ultrassom e a dose final de gonadotrofina foi administrada à tarde (14h). Quando todos os folículos estavam com menos de 8 mm de diâmetro, outra dose de gonadotrofina foi administrada e os pacientes retornaram no dia seguinte para ultrassom, exames de sangue e dose final de gonadotrofina à tarde (14h). O número máximo de injeções de gonadotrofina é três, e a coleta de ovócitos é programada para 42-46 horas após a última injeção de gonadotrofina em todas as pacientes. Ultrassonografia e exames de sangue para dosagem de FSH, LH, estradiol e progesterona são realizados no dia da OPU (Oocyte Pick-up). Durante a OPU, o tamanho do folículo é medido antes da punção. Folículos maiores (≥6 mm) são puncionados primeiro, depois a agulha irriga e então folículos menores (<6 mm) são puncionados. Portanto, cada tubo contém COCs (Complexo Cumulus-Oócito) de tamanho específico (<6 ou ≥6 mm).

Cultura de ovócitos

Oócitos de pacientes do grupo CAPA-IVM são coletados e processados ​​na presença de CNP (Peptídeo Natriurético tipo C) como inibidor da meiose. No grupo CAPA-IVM, COCs são semeados em uma placa de 4 poços (Nunc, Dinamarca) a 10 COCs/poço usando meio CAPA (Medicult IVM medium; Origio, Dinamarca) suplementado com 1 mIU/mL rFSH, 5 ng/mL insulina, 10 nM de estradiol, 10 mg/mL de albumina de soro humano [SAGE, Dinamarca] e 25 nM (nanoMol) CNP sob óleo por 24 horas a 37°C, 6% de dióxido de carbono no ar). Após 24 horas, os COCs são lavados e transferidos para meio IVM (Origio, Dinamarca) contendo 5 ng/mL de insulina, 10 nM de estradiol, 100 ng/mL de anfirregulina recombinante humana e 100 mIU/mL de rFSH (hormônio folículo estimulante recombinante) e incubados sob óleo por 30 h a 37°C, 6% de dióxido de carbono no ar.

No grupo IVM padrão (controle), COCs foram semeados em uma placa de 4 poços a 10 COCs/poço usando meio IVM suplementado com 75 mIU/mL FSH recombinante (Merck, Suíça), 100 mIU/mL hCG (MSD, EUA) , 0,01 mg/mL de hormônio do crescimento (Merck, Suíça) e 10 mg/mL de albumina sérica humana (SAGE, Dinamarca). Os COCs são incubados por 30 horas nas mesmas condições físicas e atmosféricas do grupo CAPA-IVM.

Fertilização e cultura de embriões

Após IVM, os oócitos maduros são fertilizados usando injeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) e cultivados em uma incubadora a 37°C, 5% de dióxido de carbono, 5% de oxigênio. A verificação da fertilização é realizada 16-18 horas após a ICSI. Os embriões são cultivados até o dia 3 em Global Total LP (Life Global, Canadá) em grupos de 2-3 embriões por microgotícula de 30 µL. Os embriões que preenchem os critérios de congelamento foram vitrificados (Cryotech, Japão) como embriões de 3 dias de clivagem. Embriões de qualidade extremamente baixa (consenso de Istambul sobre avaliação da qualidade do embrião) definidos como fragmentação >30%, <6 células e multinucleação não são congelados.

Priming endometrial e transferência de embriões

Nenhuma transferência de embrião fresco é realizada. As pacientes recebem estradiol oral 2 mg 4 vezes ao dia a partir do dia 2 do ciclo menstrual. Após um período de tratamento com estradiol de pelo menos 10 dias e quando a espessura do endométrio for ≥8 mm, administra-se 200 mg de progesterona por via intravaginal 4 vezes ao dia. A transferência de embriões é agendada 3 dias após o início da progesterona. O beta hCG sérico é testado 14 dias após a transferência do embrião. Se uma mulher engravidar, beta gonadotrofina coriônica humana (hCG) > 5 mIU/mL, a administração de progesterona é mantida na mesma dose até pelo menos 11 semanas de gravidez. Uma ultrassonografia para determinar a viabilidade da gravidez é realizada com 7 semanas de gestação.

Segurança do procedimento de ART (Tecnologia de Reprodução Assistida) na SOP

A segurança é monitorada a cada visita clínica ou, se ocorrer algum efeito colateral, questionando e examinando o paciente, com eventos adversos e eventos adversos graves registrados em formulários de relato de caso. Eventos adversos são definidos como qualquer ocorrência médica inesperada (sintomas ou sinais, achados laboratoriais anormais ou doenças) que surgem ou pioram durante o estudo, em relação à consulta inicial do estudo. Possíveis eventos adversos, incluindo gravidez ectópica, aborto espontâneo, reações relacionadas a medicamentos, como overdose, sensibilidade e toxicidade, e quaisquer resultados adversos relacionados à coleta de óvulos. Eventos adversos graves são definidos como qualquer ocorrência médica inesperada que resultou em morte, risco de vida, hospitalização necessária ou prolongamento de hospitalização existente, ou resultou em incapacidade ou incapacidade persistente ou significativa. Anomalia congênita ou defeito congênito são considerados eventos adversos graves.

Análise estatística

Um dos principais objetivos deste estudo é determinar a viabilidade, aceitabilidade e variabilidade dos resultados para auxiliar no planejamento de um estudo de eficácia maior e com potência adequada. O tamanho da amostra planejado é de 80 pacientes (40 por grupo), o que deve permitir conclusões relativamente precisas sobre os resultados de viabilidade. Dado que esta é a primeira vez que o CAPA-IVM foi usado clinicamente em nosso centro, o objetivo deste estudo piloto é estimar a taxa de nascidos vivos e intervalos de confiança (IC) de 95% associados para a nova intervenção na prática clínica. Métodos estatísticos não paramétricos, como a soma de classificação de Wilcoxon, são aplicados a resultados contínuos ou ordinais. Para estimar intervalos de confiança (CI) de 95% para a diferença entre duas medianas, são aplicados métodos de reamostragem e reamostragem relacionados. A incidência de resultados é estimada para cada grupo de tratamento, e a diferença entre os grupos foi analisada usando risco relativo (RR), 95% CI de RR e teste exato de Fisher. Uma análise de subgrupo é realizada com base no tamanho folicular (<6 versus ≥6 mm). Os dados são apresentados como valores médios com desvio padrão (DP), medianas e intervalos interquartis (IQRs) ou proporções. Todas as análises são realizadas usando R (Versão 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Viena, Áustria). A significância estatística é definida como p<0,05.