CAPA-IVM versus STANDARD IVM

Příprava pacientů

Do studie se mohou zapsat pacientky s PCOM: (1) ženy s normální délkou menstruačního cyklu (≤ 35 dnů) a (2) ženy s oligomenoreou (menstruace se vyskytuje v intervalech > 35 dnů se 4-9 menstruacemi/rok) nebo celková amenorea. Pacientky byly sledovány až do konce těhotenství.

Pacientky absolvují první návštěvu kliniky 2. den menstruačního cyklu. Při této návštěvě byl odebrán vzorek krve na stanovení FSH (folikuly stimulující hormon), LH (luteinizační hormon), estradiol a progesteron a jednou denně odpoledne jim byla aplikována injekce gonadotropinu 150 IU (mezinárodní jednotka). Všichni pacienti se vracejí ráno následujícího dne (3. den cyklu) na ultrazvuk a poslední dávka gonadotropinu byla podána odpoledne (14:00). Když byly všechny folikuly v průměru < 8 mm, byla podána další dávka gonadotropinu a pacienti se vrátili další den na ultrazvuk, krevní testy a dostali poslední dávku gonadotropinu odpoledne (14:00). Maximální počet injekcí gonadotropinu jsou tři a odběr oocytů je naplánován na 42–46 hodin po poslední injekci gonadotropinu u všech pacientek. Ultrazvukové a krevní testy ke stanovení FSH, LH, estradiolu a progesteronu se provádějí v den OPU (Oocyte Pick-up). Během OPU se před punkcí měří velikost folikulu. Nejprve se propíchnou větší folikuly (≥ 6 mm), poté se jehla propláchne a poté se propíchnou menší folikuly (< 6 mm). Proto každá zkumavka obsahuje COC (Cumulus-Oocyte Complex) specifické velikosti (<6 nebo ≥6 mm).

Kultivace oocytů

Oocyty od pacientek ve skupině CAPA-IVM se odebírají a zpracovávají v přítomnosti CNP (C-type Natriuretic Peptide) jako meiotického inhibitoru. Ve skupině CAPA-IVM jsou COC umístěny na 4jamkovou misku (Nunc, Dánsko) v množství 10 COC/jamku s použitím média CAPA (Medicult IVM medium; Origio, Dánsko) doplněného 1 mIU/ml rFSH, 5 ng/ml inzulín, 10 nM estradiol, 10 mg/ml lidský sérový albumin [SAGE, Dánsko] a 25 nM (nanoMol) CNP pod olejem po dobu 24 hodin při 37 °C, 6 % oxidu uhličitého ve vzduchu). Po 24 hodinách se COC promyjí a přenesou do média IVM (Origio, Dánsko) obsahujícího 5 ng/ml inzulínu, 10 nM estradiolu, 100 ng/ml lidského rekombinantního amfiregulinu a 100 mIU/ml rFSH (rekombinantní folikuly stimulující hormon a hormon). pod olejem po dobu 30 h při 37 °C, 6 % oxidu uhličitého ve vzduchu.

Ve standardní IVM skupině (kontrola) byly COC umístěny na 4jamkovou misku v množství 10 COC/jamku s použitím IVM média doplněného 75 mIU/ml rekombinantního FSH (Merck, Švýcarsko), 100 mIU/ml hCG (MSD, USA) 0,01 mg/ml růstového hormonu (Merck, Švýcarsko) a 10 mg/ml lidského sérového albuminu (SAGE, Dánsko). COC se inkubují po dobu 30 hodin za použití stejných fyzikálních a atmosférických podmínek jako skupina CAPA-IVM.

Hnojení a kultivace embryí

Po IVM jsou zralé oocyty oplodněny pomocí intracytoplazmatické injekce spermií (ICSI) a kultivovány v inkubátoru při 37 °C, 5 % oxidu uhličitého, 5 % kyslíku. Kontrola hnojení se provádí 16-18 hodin po ICSI. Embrya se kultivují do 3. dne v Global Total LP (Life Global, Kanada) ve skupinách po 2-3 embryích na 30 ul mikrokapičky. Embrya, která splňují kritéria zmrazování, byla vitrifikována (Cryotech, Japonsko) jako embrya 3. dne štěpení. Embrya extrémně nízké kvality (Istanbulský konsensus o hodnocení kvality embryí) definovaná jako fragmentace >30 %, <6 buněk a mnohojaderná nejsou zmrazena.

Endometriální priming a embryotransfer

Neprovádějí se žádné přenosy čerstvých embryí. Pacientky dostávají perorálně 2 mg estradiolu 4krát denně od 2. dne svého menstruačního cyklu. Po období léčby estradiolem trvajícím alespoň 10 dní a při tloušťce endometria ≥ 8 mm se progesteron 200 mg podává intravaginálně 4krát denně. Transfer embrya je naplánován 3 dny po zahájení progesteronu. Sérový beta hCG se testuje 14 dní po embryotransferu. Pokud žena otěhotní, beta lidský choriový gonadotropin (hCG) > 5 mIU/ml, podávání progesteronu se udržuje ve stejné dávce alespoň do 11. týdne těhotenství. Ultrazvukové vyšetření k určení životaschopnosti těhotenství se provádí v 7. týdnu těhotenství.

Bezpečnost postupu ART (Technologie asistované reprodukce) v PCOS

Bezpečnost je sledována při každé návštěvě kliniky nebo, pokud se vyskytly nějaké vedlejší účinky, dotazováním a vyšetřením pacienta, přičemž nežádoucí příhody a závažné nežádoucí příhody se zaznamenávají do formulářů kazuistik. Nežádoucí příhody jsou definovány jako jakýkoli neočekávaný zdravotní výskyt (příznaky nebo známky, abnormální laboratorní nálezy nebo onemocnění), který se objeví nebo se zhorší během studie ve srovnání s první návštěvou studie. Možné nežádoucí účinky včetně mimoděložního těhotenství, potratu, reakcí souvisejících s léky, jako je předávkování, citlivost a toxicita, a jakékoli nepříznivé výsledky související s odběrem vajíček. Závažné nežádoucí příhody jsou definovány jako jakákoli neočekávaná zdravotní událost, která měla za následek smrt, ohrožení života, vyžadovala hospitalizaci na lůžku nebo prodloužení stávající hospitalizace nebo měla za následek přetrvávající nebo významnou invaliditu nebo nezpůsobilost. Vrozená anomálie nebo vrozená vada jsou považovány za závažné nežádoucí příhody.

Statistická analýza

Klíčovým cílem této studie je určit proveditelnost, přijatelnost a variabilitu výsledků, aby se napomohlo plánování větší, přiměřeně účinné studie účinnosti. Plánovaná velikost vzorku je 80 pacientů (40 na skupinu), což by mělo umožnit relativně přesné závěry ohledně výsledků proveditelnosti. Vzhledem k tomu, že je to poprvé, co byl CAPA-IVM v našem centru klinicky použit, cílem této pilotní studie je odhadnout míru porodnosti a související 95% intervaly spolehlivosti (CI) pro novou intervenci v klinické praxi. Neparametrické statistické metody, jako je Wilcoxonův rank součet, jsou aplikovány na spojité nebo ordinální výsledky. K odhadu 95% intervalů spolehlivosti (CI) pro rozdíl mezi dvěma mediány se používá bootstrapping a související metody převzorkování. Incidence výsledků se odhaduje pro každou léčebnou skupinu a rozdíl mezi skupinami byl analyzován pomocí relativního rizika (RR), 95% CI RR a Fisherova exaktního testu. Analýza podskupin se provádí na základě velikosti folikulů (<6 versus ≥6 mm). Data jsou prezentována jako průměrné hodnoty se směrodatnou odchylkou (SD), mediány a mezikvartilní rozsahy (IQR) nebo podíly. Všechny analýzy se provádějí pomocí R (verze 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Vídeň, Rakousko). Statistická významnost je definována jako p<0,05.