CAPA-IVM im Vergleich zu STANDARD-IVM

Patientenvorbereitung

Patienten mit PCOM dürfen an der Studie teilnehmen: (1) Frauen mit normaler Menstruationszykluslänge (≤ 35 Tage) und (2) Frauen mit Oligomenorrhoe (Menstruation tritt in Intervallen von > 35 Tagen mit 4-9 Perioden/Jahr auf) oder totale Amenorrhoe. Die Patientinnen wurden bis zum Ende der Schwangerschaft nachbeobachtet.

Patientinnen haben ihren ersten Arztbesuch am Tag 2 des Menstruationszyklus. Bei diesem Besuch wurde eine Blutprobe zur Bestimmung von FSH (Follikel-stimulierendes Hormon), LH (Luteinisierendes Hormon), Östradiol und Progesteron entnommen, und sie erhielten ihre Gonadotropin-Injektion von 150 IE (internationale Einheit) einmal täglich am Nachmittag. Alle Patienten kommen am Morgen des nächsten Tages (Zyklustag 3) zum Ultraschall zurück und die letzte Gonadotropindosis wurde am Nachmittag (14 Uhr) verabreicht. Als alle Follikel einen Durchmesser von < 8 mm aufwiesen, wurde eine weitere Gonadotropindosis verabreicht, und die Patienten kehrten am nächsten Tag für Ultraschall und Blutuntersuchungen zurück und erhielten am Nachmittag (14:00 Uhr) ihre letzte Gonadotropindosis. Die maximale Anzahl von Gonadotropin-Injektionen beträgt drei, und die Oozytenentnahme ist bei allen Patientinnen 42–46 Stunden nach der letzten Gonadotropin-Injektion geplant. Am Tag der OPU (Oocyte Pick-up) werden Ultraschall- und Blutuntersuchungen zur Bestimmung der FSH-, LH-, Östradiol- und Progesteronspiegel durchgeführt. Während der OPU wird die Follikelgröße vor der Punktion gemessen. Größere Follikel (≥6 mm) werden zuerst punktiert, dann wird die Nadel gespült, dann werden kleinere Follikel (<6 mm) punktiert. Daher enthält jedes Röhrchen COCs (Cumulus-Oocyte Complex) einer bestimmten Größe (<6 oder ≥6 mm).

Oozytenkultur

Eizellen von Patientinnen der CAPA-IVM-Gruppe werden gesammelt und in Gegenwart von CNP (natriuretisches Peptid vom C-Typ) als Meiose-Inhibitor verarbeitet. In der CAPA-IVM-Gruppe werden COCs in einer Schale mit 4 Vertiefungen (Nunc, Dänemark) mit 10 COCs/Vertiefung unter Verwendung von CAPA-Medium (Medicult IVM-Medium; Origio, Dänemark), ergänzt mit 1 mIU/ml rFSH, 5 ng/ml, ausplattiert Insulin, 10 nM Östradiol, 10 mg/ml Humanserumalbumin [SAGE, Dänemark] und 25 nM (nanoMol) CNP unter Öl für 24 Stunden bei 37 °C, 6 % Kohlendioxid in Luft). Nach 24 Stunden werden die COCs gewaschen und in IVM-Medium (Origio, Dänemark) überführt, das 5 ng/ml Insulin, 10 nM Estradiol, 100 ng/ml humanes rekombinantes Amphiregulin und 100 mIU/ml rFSH (rekombinantes follikelstimulierendes Hormon) enthält, und inkubiert unter Öl für 30 h bei 37 °C, 6 % Kohlendioxid in Luft.

In der Standard-IVM-Gruppe (Kontrolle) wurden COCs in einer 4-Well-Schale mit 10 COCs/Well unter Verwendung von IVM-Medium, ergänzt mit 75 mIU/ml rekombinantem FSH (Merck, Schweiz), 100 mIU/ml hCG (MSD, USA) ausplattiert. B. 0,01 mg/ml Wachstumshormon (Merck, Schweiz) und 10 mg/ml Humanserumalbumin (SAGE, Dänemark). COCs werden 30 Stunden lang unter Verwendung der gleichen physikalischen und atmosphärischen Bedingungen wie die CAPA-IVM-Gruppe inkubiert.

Befruchtung und Embryokultur

Nach IVM werden reife Eizellen mittels intrazytoplasmatischer Spermieninjektion (ICSI) befruchtet und in einem Inkubator bei 37 °C, 5 % Kohlendioxid, 5 % Sauerstoff kultiviert. Die Befruchtungskontrolle wird 16-18 Stunden nach ICSI durchgeführt. Embryonen werden bis Tag 3 in Global Total LP (Life Global, Kanada) in Gruppen von 2–3 Embryonen pro 30 &mgr;l Mikrotröpfchen kultiviert. Embryonen, die die Einfrierkriterien erfüllen, wurden als Tag-3-Embryonen vitrifiziert (Cryotech, Japan). Embryonen von extrem schlechter Qualität (Istanbuler Konsens zur Beurteilung der Embryoqualität), definiert als Fragmentierung > 30 %, < 6 Zellen und Mehrkernigkeit, werden nicht eingefroren.

Endometrium-Priming und Embryotransfer

Es werden keine Transfers frischer Embryonen durchgeführt. Die Patientinnen erhalten ab dem 2. Tag ihres Menstruationszyklus 4-mal täglich 2 mg Östradiol oral. Nach einer Estradiol-Behandlungsdauer von mindestens 10 Tagen und bei einer Endometriumdicke von ≥ 8 mm werden 200 mg Progesteron 4-mal täglich intravaginal verabreicht. Der Embryotransfer ist 3 Tage nach Beginn der Progesterontherapie geplant. Serum-beta-hCG wird 14 Tage nach dem Embryotransfer getestet. Wenn eine Frau schwanger wird, wird die Verabreichung von humanem Beta-Choriongonadotropin (hCG) > 5 mI.E./ml, Progesteron bis mindestens 11 Schwangerschaftswochen in derselben Dosis beibehalten. Eine Ultraschalluntersuchung zur Bestimmung der Lebensfähigkeit einer Schwangerschaft wird in der 7. Schwangerschaftswoche durchgeführt.

Sicherheit des ART-Verfahrens (Assisted Reproductive Technology) bei PCOS

Die Sicherheit wird bei jedem Klinikbesuch oder, falls Nebenwirkungen aufgetreten sind, durch Befragung und Untersuchung des Patienten überwacht, wobei unerwünschte Ereignisse und schwerwiegende unerwünschte Ereignisse auf Fallberichtsformularen aufgezeichnet werden. Unerwünschte Ereignisse sind definiert als unerwartete medizinische Vorkommnisse (Symptome oder Anzeichen, anormale Laborbefunde oder Krankheiten), die während der Studie im Vergleich zum ersten Studienbesuch auftreten oder sich verschlimmern. Mögliche unerwünschte Ereignisse, einschließlich Eileiterschwangerschaft, Fehlgeburt, medikamentenbedingte Reaktionen wie Überdosierung, Empfindlichkeit und Toxizität sowie alle unerwünschten Folgen im Zusammenhang mit der Eizellentnahme. Schwerwiegende unerwünschte Ereignisse sind definiert als jedes unerwartete medizinische Ereignis, das zu einem tödlichen, lebensbedrohlichen, erforderlichen stationären Krankenhausaufenthalt oder einer Verlängerung eines bestehenden Krankenhausaufenthalts oder zu einer anhaltenden oder erheblichen Behinderung oder Arbeitsunfähigkeit führte. Angeborene Anomalien oder Geburtsfehler gelten als schwerwiegende unerwünschte Ereignisse.

statistische Analyse

Ein Hauptziel dieser Studie ist es, Machbarkeit, Akzeptanz und Ergebnisvariabilität zu bestimmen, um bei der Planung einer größeren Wirksamkeitsstudie mit angemessener Power zu helfen. Die geplante Stichprobengröße beträgt 80 Patienten (40 pro Gruppe), was relativ genaue Rückschlüsse auf Machbarkeitsergebnisse zulassen sollte. Da dies das erste Mal ist, dass CAPA-IVM in unserem Zentrum klinisch eingesetzt wurde, besteht das Ziel dieser Pilotstudie darin, die Lebendgeburtenrate und die damit verbundenen 95 %-Konfidenzintervalle (KI) für die neue Intervention in der klinischen Praxis abzuschätzen. Nichtparametrische statistische Methoden wie die Wilcoxon-Rangsumme werden auf stetige oder ordinale Ergebnisse angewendet. Um 95 %-Konfidenzintervalle (KI) für die Differenz zwischen zwei Medianen zu schätzen, werden Bootstrapping und verwandte Resampling-Methoden angewendet. Die Inzidenz der Ergebnisse wird für jede Behandlungsgruppe geschätzt, und der Unterschied zwischen den Gruppen wurde unter Verwendung des relativen Risikos (RR), des 95 %-KI von RR und des exakten Fisher-Tests analysiert. Basierend auf der Follikelgröße (<6 versus ≥6 mm) wird eine Subgruppenanalyse durchgeführt. Die Daten werden als Mittelwerte mit Standardabweichung (SD), Medianen und Interquartilsbereichen (IQRs) oder Anteilen dargestellt. Alle Analysen werden mit R (Version 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Wien, Österreich). Statistische Signifikanz ist definiert als p < 0,05.