CAPA-IVM versus IVM STANDARD

Préparation des patients

Les patientes atteintes de PCOM sont autorisées à s'inscrire à l'étude : (1) femmes dont le cycle menstruel est d'une durée normale (≤ 35 jours) et (2) femmes atteintes d'oligoménorrhée (menstruations survenant à des intervalles > 35 jours avec 4 à 9 périodes/an) ou aménorrhée totale. Les patientes ont été suivies jusqu'à la fin de la grossesse.

Les patientes ont leur première visite à la clinique le jour 2 du cycle menstruel. Lors de cette visite, un échantillon de sang a été prélevé pour l'évaluation de la FSH (hormone folliculo-stimulante), de la LH (hormone lutéinisante), de l'estradiol et de la progestérone, et ils ont leur injection de gonadotrophine 150 UI (unité internationale) une fois par jour dans l'après-midi. Tous les patients reviennent le matin du lendemain (jour du cycle 3) pour une échographie et la dernière dose de gonadotrophine a été administrée dans l'après-midi (14h). Lorsque tous les follicules avaient un diamètre inférieur à 8 mm, une autre dose de gonadotrophine a été administrée et les patients sont revenus le lendemain pour une échographie, des analyses de sang et ont reçu leur dernière dose de gonadotrophine cet après-midi (14 h). Le nombre maximum d'injections de gonadotrophine est de trois et le prélèvement d'ovocytes est programmé 42 à 46 heures après la dernière injection de gonadotrophine chez toutes les patientes. Des échographies et analyses de sang pour déterminer les taux de FSH, LH, estradiol et progestérone sont réalisées le jour de l'OPU (Oocyte Pick-up). Pendant l'OPU, la taille du follicule est mesurée avant la ponction. Les follicules plus gros (≥ 6 mm) sont ponctionnés en premier, puis l'aiguille rince, puis les follicules plus petits (< 6 mm) sont ponctionnés. Par conséquent, chaque tube contient des COC (Cumulus-Oocyte Complex) d'une taille spécifique (<6 ou ≥6 mm).

Culture d'ovocytes

Les ovocytes des patientes du groupe CAPA-IVM sont collectés et traités en présence de CNP (C-type Natriuretic Peptide) comme inhibiteur méiotique. Dans le groupe CAPA-IVM, les COC sont étalés dans une boîte à 4 puits (Nunc, Danemark) à raison de 10 COC/puits en utilisant le milieu CAPA (Medicult IVM medium ; Origio, Danemark) additionné de 1 mUI/mL de rFSH, 5 ng/mL insuline, 10 nM d'estradiol, 10 mg/mL d'albumine sérique humaine [SAGE, Danemark] et 25 nM (nanoMol) CNP sous huile pendant 24 heures à 37 °C, 6 % de dioxyde de carbone dans l'air). Après 24 heures, les COC sont lavés et transférés dans du milieu IVM (Origio, Danemark) contenant 5 ng/mL d'insuline, 10 nM d'estradiol, 100 ng/mL d'amphiréguline recombinante humaine et 100 mUI/mL de rFSH (recombinant Follicle Stimulating Hormone), et incubés sous huile pendant 30 h à 37°C, 6% de dioxyde de carbone dans l'air.

Dans le groupe IVM standard (témoin), les COC ont été étalés dans une boîte à 4 puits à 10 COC/puits en utilisant un milieu IVM additionné de 75 mUI/mL de FSH recombinante (Merck, Suisse), 100 mUI/mL d'hCG (MSD, USA) , 0,01 mg/mL d'hormone de croissance (Merck, Suisse) et 10 mg/mL d'albumine sérique humaine (SAGE, Danemark). Les COC sont incubés pendant 30 heures dans les mêmes conditions physiques et atmosphériques que le groupe CAPA-IVM.

Fécondation et culture d'embryons

Après IVM, les ovocytes matures sont fécondés par injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI) et cultivés dans un incubateur à 37°C, 5% de dioxyde de carbone, 5% d'oxygène. Le contrôle de la fécondation est effectué 16 à 18 heures après l'ICSI. Les embryons sont cultivés jusqu'au jour 3 dans Global Total LP (Life Global, Canada) en groupes de 2 à 3 embryons par microgouttelette de 30 µL. Les embryons qui remplissent les critères de congélation ont été vitrifiés (Cryotech, Japon) en tant qu'embryons clivés au jour 3. Les embryons de très mauvaise qualité (consensus d'Istanbul sur l'évaluation de la qualité des embryons) définis comme une fragmentation> 30%, <6 cellules et une multinucléation ne sont pas congelés.

Amorçage de l'endomètre et transfert d'embryons

Aucun transfert d'embryon frais n'est effectué. Les patientes reçoivent 2 mg d'estradiol par voie orale 4 fois par jour à partir du 2e jour de leur cycle menstruel. Après une période de traitement à l'œstradiol d'au moins 10 jours et lorsque l'épaisseur de l'endomètre était ≥ 8 mm, la progestérone 200 mg est administrée par voie intra-vaginale 4 fois par jour. Le transfert d'embryons est programmé 3 jours après le début de la progestérone. La bêta hCG sérique est testée 14 jours après le transfert d'embryon. Si une femme devient enceinte, bêta gonadotrophine chorionique humaine (hCG) > 5 mUI/mL, l'administration de progestérone est maintenue à la même dose jusqu'à au moins 11 semaines de grossesse. Une échographie pour déterminer la viabilité de la grossesse est réalisée à 7 semaines de gestation.

Sécurité de la procédure ART (technologie de reproduction assistée) dans le SOPK

La sécurité est surveillée à chaque visite à la clinique ou, si des effets secondaires se sont produits, en interrogeant et en examinant le patient, les événements indésirables et les événements indésirables graves étant enregistrés sur des formulaires de rapport de cas. Les événements indésirables sont définis comme tout événement médical inattendu (symptômes ou signes, résultats de laboratoire anormaux ou maladies) qui apparaît ou s'aggrave au cours de l'essai, par rapport à la visite d'essai initiale. Les événements indésirables possibles, y compris la grossesse extra-utérine, la fausse couche, les réactions liées aux médicaments telles que le surdosage, la sensibilité et la toxicité, et tout résultat indésirable lié à la collecte des ovules. Les événements indésirables graves sont définis comme tout événement médical inattendu qui a entraîné la mort, un danger de mort, une hospitalisation requise ou la prolongation d'une hospitalisation existante, ou qui a entraîné une incapacité ou une incapacité persistante ou importante. Les anomalies congénitales ou malformations congénitales sont considérées comme des événements indésirables graves.

analyses statistiques

Un objectif clé de cette étude est de déterminer la faisabilité, l'acceptabilité et la variabilité des résultats pour aider à planifier un essai d'efficacité plus vaste et suffisamment puissant. La taille de l'échantillon prévu est de 80 patients (40 par groupe), ce qui devrait permettre des conclusions relativement précises sur les résultats de faisabilité. Étant donné que c'est la première fois que CAPA-IVM est utilisé cliniquement dans notre centre, l'objectif de cette étude pilote est d'estimer le taux de naissances vivantes et les intervalles de confiance (IC) à 95 % associés pour la nouvelle intervention en pratique clinique. Des méthodes statistiques non paramétriques telles que la somme des rangs de Wilcoxon sont appliquées aux résultats continus ou ordinaux. Pour estimer les intervalles de confiance (IC) à 95 % pour la différence entre deux médianes, des méthodes de bootstrapping et de rééchantillonnage associées sont appliquées. L'incidence des résultats est estimée pour chaque groupe de traitement, et la différence entre les groupes a été analysée à l'aide du risque relatif (RR), de l'IC à 95 % du RR et du test exact de Fisher. Une analyse en sous-groupe est réalisée en fonction de la taille folliculaire (<6 versus ≥6 mm). Les données sont présentées sous forme de valeurs moyennes avec écart type (ET), médianes et intervalles interquartiles (IQR) ou proportions. Toutes les analyses sont effectuées à l'aide de R (version 3.0.1 ; R Foundation for Statistical Computing, Vienne, Autriche). La signification statistique est définie comme p<0,05.