CAPA-IVM versus STANDARD IVM

A betegek felkészítése

PCOM-ban szenvedő betegek jelentkezhetnek a vizsgálatba: (1) normál menstruációs ciklusú nők (≤35 nap), és (2) oligomenorrhoeában szenvedő nők (a menstruáció 35 napnál hosszabb időközönként, évente 4-9 időszakkal) vagy teljes amenorrhoea. A betegeket a terhesség végéig követték.

A betegek a menstruációs ciklus 2. napján látogatják meg először a klinikát. Ezen a látogatáson vérmintát vettek az FSH (tüszőstimuláló hormon), LH (luteinizáló hormon), ösztradiol és progeszteron értékelésére, és naponta egyszer délután kapnak gonadotropin injekciót 150 NE (nemzetközi egység). Minden beteg a következő napon (a ciklus 3. napja) reggel tér vissza ultrahangra, és délután (14:00) adták be a gonadotropin végső adagját. Amikor az összes tüsző átmérője 8 mm-nél kisebb volt, újabb adag gonadotropint adtak be, és a betegek másnap visszatértek ultrahangra, vérvizsgálatra, és aznap délután (2 órakor) megkapták a gonadotropin utolsó adagját. A gonadotropin injekciók maximális száma három, és a petesejtek kinyerését az utolsó gonadotropin injekció beadása után 42-46 órával minden betegnél tervezik. Az FSH, LH, ösztradiol és progeszteron szint meghatározására ultrahang- és vérvizsgálatokat az OPU (Oocyte Pick-up) napján végeznek. Az OPU során a szúrás előtt megmérik a tüszőméretet. Először a nagyobb tüszőket (≥6 mm) szúrják ki, majd a tű kipirul, majd a kisebb tüszőket (<6 mm) szúrják ki. Ezért minden tubus meghatározott méretű (<6 vagy ≥6 mm) COC-okat (Cumulus-Oocyte Complex) tartalmaz.

Petesejtek tenyésztése

A CAPA-IVM csoportba tartozó betegek petesejtjeit összegyűjtik és CNP (C-típusú Natriuretikus peptid) mint meiotikus inhibitor jelenlétében feldolgozzák. A CAPA-IVM csoportban a COC-okat egy 4-lyukú edénybe (Nunc, Dánia) helyezik 10 COC/lyuk mennyiségben CAPA táptalaj (Medicult IVM táptalaj; Origio, Dánia) felhasználásával, kiegészítve 1 mIU/ml rFSH-val, 5 ng/ml. inzulin, 10 nM ösztradiol, 10 mg/ml humán szérumalbumin [SAGE, Dánia] és 25 nM (nanoMol) CNP olaj alatt, 24 órán át 37°C-on, 6% szén-dioxid levegőben). 24 óra elteltével a COC-okat megmossuk, és 5 ng/ml inzulint, 10 nM ösztradiolt, 100 ng/ml humán rekombináns amfiregulint és 100 mIU/ml rFSH-t (rekombináns tüszőstimuláló hormont) tartalmazó IVM táptalajba (Origio, Dánia) visszük át. olaj alatt 30 órán át 37 °C-on, 6% szén-dioxid levegőben.

A standard IVM csoportban (kontroll) a COC-okat egy 4-lyukú edénybe szélesztettük 10 COC/lyuk arányban 75 mIU/ml rekombináns FSH-val (Merck, Svájc), 100 mIU/ml hCG-vel (MSD, USA) kiegészített IVM táptalaj alkalmazásával. 0,01 mg/ml növekedési hormon (Merck, Svájc) és 10 mg/ml humán szérumalbumin (SAGE, Dánia). A COC-okat 30 órán át inkubáljuk, ugyanolyan fizikai és légköri körülmények között, mint a CAPA-IVM csoportot.

Megtermékenyítés és embriótenyésztés

Az IVM után az érett petesejteket intracitoplazmatikus spermiuminjekcióval (ICSI) megtermékenyítjük, és inkubátorban tenyésztjük 37 °C-on, 5% szén-dioxid és 5% oxigén mellett. A megtermékenyítés ellenőrzése az ICSI után 16-18 órával történik. Az embriókat a 3. napig Global Total LP-ben (Life Global, Kanada) tenyésztjük 30 µl mikrocseppenként 2-3 embriót tartalmazó csoportokban. A fagyasztási kritériumoknak megfelelő embriókat üvegesítettük (Cryotech, Japán), mint a 3. napi hasítási embriókat. A rendkívül rossz minőségű embriókat (Isztambuli konszenzus az embrióminőség értékeléséről) úgy határozták meg, hogy a fragmentáció >30%, <6 sejt, és több magvú.

Endometrium előkészítése és embriótranszfer

Friss embriótranszfer nem történik. A betegek menstruációs ciklusuk 2. napjától naponta négyszer 2 mg ösztradiolt kapnak szájon át. Legalább 10 napos ösztradiollal végzett kezelés után, ha az endometrium vastagsága ≥8 ​​mm volt, 200 mg progeszteront kell beadni intravaginálisan naponta 4 alkalommal. Az embriótranszfert 3 nappal a progeszteron megkezdése után tervezik. A szérum béta-hCG-t 14 nappal az embriótranszfer után tesztelik. Ha egy nő teherbe esik, béta humán chorion gonadotropin (hCG) >5 mIU/ml, a progeszteron adagolása a terhesség legalább 11 hetéig azonos dózisban történik. A terhesség életképességének meghatározására ultrahangos vizsgálatot végeznek a terhesség 7. hetében.

Az ART (Assisted Reproductive Technology) eljárás biztonsága PCOS-ben

A biztonságot minden klinikalátogatás alkalmával ellenőrzik, vagy ha bármilyen mellékhatás jelentkezett, a beteg kikérdezésével és vizsgálatával, a nemkívánatos eseményeket és a súlyos nemkívánatos eseményeket az esetjelentési űrlapokon rögzítve. Nemkívánatos eseménynek minősül minden olyan váratlan orvosi esemény (tünetek vagy jelek, kóros laboratóriumi leletek vagy betegségek), amelyek a vizsgálat során jelentkeznek vagy súlyosbodnak az első vizsgálati látogatáshoz képest. Lehetséges nemkívánatos események, beleértve a méhen kívüli terhességet, a vetélést, a gyógyszeres kezeléssel összefüggő reakciókat, mint például a túladagolást, az érzékenységet és a toxicitást, valamint a tojásgyűjtéssel kapcsolatos bármilyen nemkívánatos kimenetelt. Súlyos nemkívánatos eseménynek minősül minden olyan váratlan orvosi esemény, amely halált, életveszélyt okozott, fekvőbeteg-kórházi kezelést vagy a meglévő kórházi kezelés meghosszabbítását, vagy tartós vagy jelentős rokkantságot vagy cselekvőképtelenséget eredményezett. A veleszületett rendellenesség vagy születési rendellenesség súlyos nemkívánatos eseménynek minősül.

Statisztikai analízis

Ennek a tanulmánynak a fő célja a megvalósíthatóság, az elfogadhatóság és az eredmény variabilitásának meghatározása, hogy segítsenek egy nagyobb, megfelelő teljesítményű hatékonysági vizsgálat megtervezésében. A tervezett mintanagyság 80 beteg (csoportonként 40), ami viszonylag pontos következtetéseket tesz lehetővé a megvalósíthatósági eredmények tekintetében. Tekintettel arra, hogy központunkban ez az első alkalom, hogy a CAPA-IVM-et klinikailag alkalmazzák, ennek a kísérleti tanulmánynak az a célja, hogy megbecsüljük az élveszületési arányt és a kapcsolódó 95%-os konfidencia intervallumokat (CI) az új beavatkozáshoz a klinikai gyakorlatban. A nem paraméteres statisztikai módszereket, mint például a Wilcoxon-féle rangösszeg, a folytonos vagy ordinális eredményekre alkalmazzák. A két medián közötti különbség 95%-os konfidenciaintervallumának (CI) becsléséhez bootstrapping és kapcsolódó újramintavételi módszereket alkalmaznak. A kimenetelek előfordulását minden kezelési csoportra megbecsülték, és a csoportok közötti különbséget relatív kockázat (RR), 95%-os RR CI és Fisher-teszt segítségével elemezték. A tüszőméret (<6 versus ≥6 mm) alapján alcsoportanalízist végeznek. Az adatok átlagértékként jelennek meg standard deviációval (SD), mediánnal és interkvartilis tartományokkal (IQR) vagy arányokkal. Az összes elemzést az R használatával végezzük (3.0.1-es verzió; R Foundation for Statistical Computing, Bécs, Ausztria). A statisztikai szignifikancia meghatározása p<0,05.