CAPA-IVM по сравнению со СТАНДАРТНЫМ IVM

Подготовка пациентов

В исследование допускаются пациентки с ПКОМ: (1) женщины с нормальной продолжительностью менструального цикла (≤35 дней) и (2) женщины с олигоменореей (менструации с интервалом >35 дней с 4–9 менструациями в год) или тотальная аменорея. Пациентки наблюдались до конца беременности.

Первый визит пациентки к врачу проводят на 2-й день менструального цикла. Во время этого визита был взят образец крови для оценки ФСГ (фолликулостимулирующего гормона), ЛГ (лютеинизирующего гормона), эстрадиола и прогестерона, и им сделали инъекцию гонадотропина 150 МЕ (международная единица) один раз в день во второй половине дня. Все пациенты возвращаются утром следующего дня (3-й день цикла) для ультразвукового исследования, а окончательная доза гонадотропина была введена во второй половине дня (14:00). Когда все фолликулы были <8 мм в диаметре, была дана еще одна доза гонадотропина, и пациенты пришли на следующий день для УЗИ, анализов крови и последней дозы гонадотропина во второй половине дня (14:00). Максимальное количество инъекций гонадотропина — три, забор ооцитов планируется через 42–46 часов после последней инъекции гонадотропина у всех пациенток. УЗИ и анализы крови для определения уровней ФСГ, ЛГ, эстрадиола и прогестерона проводятся в день OPU (забора ооцитов). Во время OPU размер фолликула измеряется перед пункцией. Сначала прокалываются более крупные фолликулы (≥6 мм), затем игла промывается, затем прокалываются более мелкие фолликулы (<6 мм). Таким образом, каждая пробирка содержит КОК (комплекс кумулюс-ооцит) определенного размера (<6 или ≥6 мм).

Культура ооцитов

Ооциты от пациентов в группе CAPA-IVM собирают и обрабатывают в присутствии CNP (натрийуретического пептида C-типа) в качестве мейотического ингибитора. В группе CAPA-IVM КОК высевали в 4-луночный планшет (Nunc, Дания) по 10 КОК на лунку с использованием среды CAPA (среда Medicult IVM; Origio, Дания) с добавлением 1 мМЕ/мл рФСГ, 5 нг/мл. инсулин, 10 нМ эстрадиола, 10 мг/мл сывороточного альбумина человека [SAGE, Дания] и 25 нМ (наномоль) CNP под маслом в течение 24 часов при 37°C, 6% углекислого газа в воздухе). Через 24 часа КОК промывают и переносят в среду IVM (Origio, Дания), содержащую 5 нг/мл инсулина, 10 нМ эстрадиола, 100 нг/мл рекомбинантного амфирегулина человека и 100 мМЕ/мл рФСГ (рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона), и инкубируют. в масле в течение 30 ч при 37°С, 6% углекислого газа на воздухе.

В стандартной группе IVM (контроль) КОК высевали в 4-луночный планшет по 10 КОК/лунка с использованием среды IVM с добавлением 75 мМЕ/мл рекомбинантного ФСГ (Merck, Швейцария), 100 мМЕ/мл ХГЧ (MSD, США). , 0,01 мг/мл гормона роста (Merck, Швейцария) и 10 мг/мл сывороточного альбумина человека (SAGE, Дания). КОК инкубируют в течение 30 часов при тех же физических и атмосферных условиях, что и в группе CAPA-IVM.

Оплодотворение и культивирование эмбрионов

После ИВМ созревшие ооциты оплодотворяют с помощью интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИКСИ) и культивируют в инкубаторе при 37°С, 5% углекислого газа, 5% кислорода. Контроль оплодотворения проводят через 16-18 часов после ИКСИ. Эмбрионы культивируют до 3-го дня в Global Total LP (Life Global, Канада) в группах по 2-3 эмбриона на 30 мкл микрокапли. Эмбрионы, отвечающие критериям замораживания, витрифицируют (Cryotech, Япония) как эмбрионы дробления на 3-й день. Эмбрионы крайне низкого качества (Стамбульский консенсус по оценке качества эмбрионов), определяемые как фрагментация >30%, <6 клеток и многоядерность, не замораживаются.

Подготовка эндометрия и перенос эмбрионов

Перенос свежих эмбрионов не проводится. Пациентки получают пероральный эстрадиол по 2 мг 4 раза в день со 2-го дня менструального цикла. После периода лечения эстрадиолом не менее 10 дней и при толщине эндометрия ≥8 мм прогестерон вводят интравагинально по 200 мг 4 раза в день. Перенос эмбрионов планируется через 3 дня после начала приема прогестерона. Сывороточный бета-ХГЧ исследуют через 14 дней после переноса эмбрионов. Если женщина забеременела, уровень бета-хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) >5 мМЕ/мл, введение прогестерона сохраняется в той же дозе, по крайней мере, до 11 недель беременности. УЗИ для определения жизнеспособности беременности проводят на 7 неделе беременности.

Безопасность процедуры ВРТ (вспомогательной репродуктивной технологии) при СПКЯ

Безопасность контролируется при каждом посещении клиники или, если возникают какие-либо побочные эффекты, путем опроса и осмотра пациента, при этом нежелательные явления и серьезные нежелательные явления регистрируются в формах истории болезни. Нежелательные явления определяются как любые непредвиденные медицинские явления (симптомы или признаки, аномальные лабораторные данные или заболевания), которые возникают или ухудшаются во время исследования по сравнению с первоначальным посещением исследования. Возможные нежелательные явления, включая внематочную беременность, выкидыш, реакции, связанные с лекарственными препаратами, такие как передозировка, чувствительность и токсичность, а также любые неблагоприятные исходы, связанные со сбором яйцеклеток. Серьезные нежелательные явления определяются как любое неожиданное медицинское событие, которое привело к смерти, угрожало жизни, потребовало госпитализации в стационар или продлению существующей госпитализации, или привело к стойкой или значительной инвалидности или потере трудоспособности. Врожденная аномалия или врожденный дефект считаются серьезными побочными эффектами.

статистический анализ

Ключевой целью этого исследования является определение осуществимости, приемлемости и вариабельности результатов, чтобы помочь в планировании более крупного исследования эффективности с адекватной мощностью. Запланированный размер выборки составляет 80 пациентов (по 40 в группе), что должно позволить сделать относительно точные выводы относительно возможных результатов. Учитывая, что CAPA-IVM впервые клинически используется в нашем центре, целью этого пилотного исследования является оценка частоты живорождения и соответствующих 95% доверительных интервалов (ДИ) для нового вмешательства в клинической практике. Непараметрические статистические методы, такие как сумма рангов Уилкоксона, применяются к непрерывным или порядковым результатам. Для оценки 95% доверительных интервалов (ДИ) для разницы между двумя медианами применяются методы начальной загрузки и связанные с ними методы повторной выборки. Частота исходов оценивается для каждой группы лечения, а разница между группами анализируется с использованием относительного риска (ОР), 95% ДИ ОР и точного критерия Фишера. Анализ подгрупп проводится на основе размера фолликулов (<6 против ≥6 мм). Данные представлены как средние значения со стандартным отклонением (SD), медианы и межквартильные размахи (IQR) или пропорции. Все анализы выполняются с помощью R (версия 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Вена, Австрия). Статистическая значимость определяется как p<0,05.