CAPA-IVM versus STANDARD IVM

Patienternes forberedelse

Patienter med PCOM får lov til at deltage i undersøgelsen: (1) kvinder med normal menstruationscykluslængde (≤35 dage) og (2) kvinder med oligomenoré (menstruation forekommer med intervaller >35 dage med 4-9 perioder/år) eller total amenoré. Patienterne blev fulgt op indtil slutningen af ​​graviditeten.

Patienterne har deres første klinikbesøg på dag 2 i menstruationscyklussen. Ved dette besøg blev der taget en blodprøve til vurdering af FSH (follikelstimulerende hormon), LH (luteiniserende hormon), østradiol og progesteron, og de får deres gonadotropininjektion 150 IE (international enhed) en gang dagligt om eftermiddagen. Alle patienter vender tilbage om morgenen den næste dag (cyklusdag 3) til ultralyd, og den sidste dosis gonadotropin blev givet om eftermiddagen (14.00). Da alle follikler var <8 mm i diameter, blev der givet endnu en dosis gonadotropin, og patienterne vendte tilbage næste dag til ultralyd, blodprøver og fik deres sidste dosis gonadotropin samme eftermiddag (14.00). Det maksimale antal gonadotropininjektioner er tre, og oocytudtagning er planlagt til 42-46 timer efter den sidste gonadotropininjektion hos alle patienter. Ultralyd og blodprøver for at bestemme FSH-, LH-, østradiol- og progesteronniveauer udføres på dagen for OPU (Oocyte Pick-up). Under OPU måles follikelstørrelsen før punktering. Større follikler (≥6 mm) punkteres først, derefter skyller nålen, derefter punkteres mindre follikler (<6 mm). Derfor indeholder hvert rør COC'er (Cumulus-Oocyte Complex) af en specifik størrelse (<6 eller ≥6 mm).

Oocytkultur

Oocytter fra patienter i CAPA-IVM-gruppen opsamles og behandles i nærvær af CNP (C-type Natriuretic Peptide) som meiotisk inhibitor. I CAPA-IVM-gruppen udplades COC'er i en 4-brønds skål (Nunc, Danmark) ved 10 COC'er/brønd under anvendelse af CAPA-medium (Medicult IVM-medium; Origio, Danmark) suppleret med 1 mIU/mL rFSH, 5 ng/mL insulin, 10 nM østradiol, 10 mg/ml humant serumalbumin [SAGE, Danmark] og 25 nM (nanoMol) CNP under olie i 24 timer ved 37°C, 6 % kuldioxid i luft). Efter 24 timer vaskes p-piller og overføres til IVM-medium (Origio, Danmark) indeholdende 5 ng/ml insulin, 10 nM østradiol, 100 ng/ml humant rekombinant amphiregulin og 100 mIU/mL rFSH (rekombinant follikelstimulerende hormon), og under olie i 30 timer ved 37°C, 6% kuldioxid i luft.

I standard IVM-gruppen (kontrol) blev COC'er udpladet i en skål med 4 brønde ved 10 COC'er/brønd ved anvendelse af IVM-medium suppleret med 75 mIU/mL rekombinant FSH (Merck, Schweiz), 100 mIU/mL hCG (MSD, USA) 0,01 mg/ml væksthormon (Merck, Schweiz) og 10 mg/ml humant serumalbumin (SAGE, Danmark). COC'er inkuberes i 30 timer under anvendelse af de samme fysiske og atmosfæriske forhold som CAPA-IVM-gruppen.

Befrugtning og embryokultur

Efter IVM befrugtes modnede oocytter ved hjælp af intracytoplasmatisk spermainjektion (ICSI) og dyrkes i en inkubator ved 37°C, 5% kuldioxid, 5% oxygen. Befrugtningskontrol udføres 16-18 timer efter ICSI. Embryoner dyrkes til dag 3 i Global Total LP (Life Global, Canada) i grupper på 2-3 embryoner pr. 30 µL mikrodråbe. Embryoer, der opfylder frysekriterierne, blev forglasset (Cryotech, Japan) som spaltningsdag 3-embryoner. Embryoer af ekstremt dårlig kvalitet (Istanbul konsensus om embryokvalitetsvurdering) defineret som fragmentering >30 %, <6 celler og multinukleering fryses ikke.

Endometriepriming og embryooverførsel

Der udføres ingen friske embryooverførsler. Patienter får oral østradiol 2 mg 4 gange dagligt fra dag 2 i deres menstruationscyklus. Efter en østradiolbehandlingsperiode på mindst 10 dage, og når endometrietykkelsen var ≥8 mm, indgives progesteron 200 mg intravaginalt 4 gange dagligt. Embryooverførsel er planlagt 3 dage efter start af progesteron. Serum beta hCG testes 14 dage efter embryooverførsel. Hvis en kvinde bliver gravid, beta-humant choriongonadotropin (hCG) >5 mIU/ml, opretholdes progesteronadministrationen i samme dosis indtil mindst 11 uger af graviditeten. En ultralydsscanning for at bestemme levedygtigheden af ​​graviditeten udføres ved 7 ugers graviditet.

Sikkerhed ved ART-proceduren (Assisted Reproductive Technology) i PCOS

Sikkerheden overvåges ved hvert klinikbesøg eller, hvis der er opstået bivirkninger, ved at udspørge og undersøge patienten, med bivirkninger og alvorlige bivirkninger registreret på case-rapportskemaer. Bivirkninger defineres som enhver uventet medicinsk hændelse (symptomer eller tegn, unormale laboratoriefund eller sygdomme), der dukker op eller forværres under forsøget i forhold til det indledende forsøgsbesøg. Mulige bivirkninger, herunder graviditet uden for livmoderen, abort, medicinrelaterede reaktioner såsom overdosering, følsomhed og toksicitet og eventuelle uønskede resultater relateret til ægudtagning. Alvorlige uønskede hændelser defineres som enhver uventet medicinsk hændelse, der resulterede i død, livstruende, påkrævet hospitalsindlæggelse eller forlængelse af eksisterende hospitalsindlæggelse eller resulterede i vedvarende eller betydelig invaliditet eller invaliditet. Medfødt anomali eller fødselsdefekt anses for at være alvorlige bivirkninger.

Statistisk analyse

Et nøglemål med denne undersøgelse er at bestemme gennemførlighed, acceptabilitet og udfaldsvariabilitet for at hjælpe med at planlægge et større, tilstrækkeligt drevet effektforsøg. Den planlagte stikprøvestørrelse er 80 patienter (40 pr. gruppe), hvilket skulle tillade relativt præcise konklusioner vedrørende feasibility-resultater. Da det er første gang, at CAPA-IVM er blevet brugt klinisk i vores center, er formålet med denne pilotundersøgelse at estimere den levende fødselsrate og tilhørende 95 % konfidensintervaller (CI) for den nye intervention i klinisk praksis. Ikke-parametriske statistiske metoder såsom Wilcoxon rangsum anvendes på kontinuerlige eller ordinære resultater. For at estimere 95 % konfidensintervaller (CI) for forskellen mellem to medianer, anvendes bootstrapping og relaterede resamplingmetoder. Forekomsten af ​​resultater estimeres for hver behandlingsgruppe, og forskellen mellem grupperne blev analyseret ved hjælp af relativ risiko (RR), 95 % CI af RR og Fisher eksakt test. En undergruppeanalyse udføres baseret på follikulær størrelse (<6 versus ≥6 mm). Data præsenteres som middelværdier med standardafvigelse (SD), medianer og interkvartilintervaller (IQR'er) eller proportioner. Alle analyser udføres ved hjælp af R (version 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Wien, Østrig). Statistisk signifikans er defineret som p<0,05.