CAPA-IVM rispetto a STANDARD IVM

Preparazione dei pazienti

Le pazienti con PCOM possono arruolarsi nello studio: (1) donne con cicli mestruali di durata normale (≤35 giorni) e (2) donne con oligomenorrea (mestruazioni che si verificano a intervalli >35 giorni con 4-9 periodi/anno) o amenorrea totale. Le pazienti sono state seguite fino alla fine della gravidanza.

I pazienti hanno la loro prima visita clinica il giorno 2 del ciclo mestruale. Durante questa visita è stato prelevato un campione di sangue per la valutazione di FSH (ormone follicolo stimolante), LH (ormone luteinizzante), estradiolo e progesterone, e hanno avuto la loro iniezione di gonadotropina 150 UI (unità internazionale) una volta al giorno nel pomeriggio. Tutti i pazienti tornano la mattina del giorno successivo (giorno 3 del ciclo) per l'ecografia e l'ultima dose di gonadotropina è stata somministrata nel pomeriggio (14:00). Quando tutti i follicoli avevano un diametro inferiore a 8 mm, è stata somministrata un'altra dose di gonadotropina e i pazienti sono tornati il ​​giorno successivo per ecografia, esami del sangue e hanno ricevuto la loro dose finale di gonadotropina quel pomeriggio (14:00). Il numero massimo di iniezioni di gonadotropine è tre e il recupero degli ovociti è programmato 42-46 ore dopo l'ultima iniezione di gonadotropine in tutti i pazienti. Il giorno dell'OPU (Oocyte Pick-up) vengono eseguiti esami ecografici e del sangue per determinare i livelli di FSH, LH, estradiolo e progesterone. Durante l'OPU, la dimensione del follicolo viene misurata prima della puntura. I follicoli più grandi (≥6 mm) vengono perforati per primi, quindi l'ago si lava, quindi i follicoli più piccoli (<6 mm) vengono perforati. Pertanto, ogni provetta contiene COC (complesso cumulo-ovocita) di una dimensione specifica (<6 o ≥6 mm).

Coltura di ovociti

Gli ovociti dei pazienti nel gruppo CAPA-IVM vengono raccolti e processati in presenza di CNP (peptide natriuretico di tipo C) come inibitore meiotico. Nel gruppo CAPA-IVM, i COC vengono piastrati in una piastra a 4 pozzetti (Nunc, Danimarca) a 10 COC/pozzetto utilizzando il terreno CAPA (medicult IVM medium; Origio, Danimarca) integrato con 1 mIU/mL di rFSH, 5 ng/mL insulina, 10 nM di estradiolo, 10 mg/mL di albumina sierica umana [SAGE, Danimarca] e 25 nM (nanoMol) CNP sotto olio per 24 ore a 37°C, 6% di anidride carbonica nell'aria). Dopo 24 ore, i COC vengono lavati e trasferiti in terreno IVM (Origio, Danimarca) contenente 5 ng/mL di insulina, 10 nM di estradiolo, 100 ng/mL di anfiregulina umana ricombinante e 100 mIU/mL di rFSH (ormone follicolo stimolante ricombinante) e incubati sott'olio per 30 h a 37°C, 6% di anidride carbonica in aria.

Nel gruppo IVM standard (controllo), i COC sono stati piastrati in una piastra a 4 pozzetti a 10 COC/pozzetto utilizzando terreno IVM integrato con 75 mIU/mL di FSH ricombinante (Merck, Svizzera), 100 mIU/mL di hCG (MSD, USA) , 0,01 mg/mL di ormone della crescita (Merck, Svizzera) e 10 mg/mL di albumina sierica umana (SAGE, Danimarca). I COC vengono incubati per 30 ore utilizzando le stesse condizioni fisiche e atmosferiche del gruppo CAPA-IVM.

Fecondazione e coltura dell'embrione

Dopo l'IVM, gli ovociti maturi vengono fecondati mediante iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI) e coltivati ​​in un incubatore a 37°C, 5% di anidride carbonica, 5% di ossigeno. Il controllo della fecondazione viene eseguito a 16-18 ore dall'ICSI. Gli embrioni vengono coltivati ​​fino al giorno 3 in Global Total LP (Life Global, Canada) in gruppi di 2-3 embrioni per microgoccia da 30 µL. Gli embrioni che soddisfano i criteri di congelamento sono stati vetrificati (Cryotech, Giappone) come embrioni del terzo giorno di scissione. Gli embrioni di qualità estremamente scadente (consenso di Istanbul sulla valutazione della qualità dell'embrione) definiti come frammentazione >30%, <6 cellule e multinucleazione non vengono congelati.

Priming endometriale e trasferimento embrionale

Non vengono eseguiti trasferimenti di embrioni freschi. I pazienti ricevono estradiolo orale 2 mg 4 volte al giorno dal giorno 2 del loro ciclo mestruale. Dopo un periodo di trattamento con estradiolo di almeno 10 giorni e quando lo spessore endometriale era ≥8 mm, il progesterone 200 mg viene somministrato per via intravaginale 4 volte al giorno. Il trasferimento dell'embrione è programmato 3 giorni dopo l'inizio del progesterone. Il siero beta hCG viene testato 14 giorni dopo il trasferimento dell'embrione. Se una donna rimane incinta, beta gonadotropina corionica umana (hCG) >5 mIU/mL, la somministrazione di progesterone viene mantenuta alla stessa dose fino ad almeno 11 settimane di gravidanza. Un'ecografia per determinare la vitalità della gravidanza viene eseguita a 7 settimane di gestazione.

Sicurezza della procedura ART (tecnologia di riproduzione assistita) nella PCOS

La sicurezza viene monitorata ad ogni visita clinica o, se si sono verificati effetti collaterali, interrogando ed esaminando il paziente, con eventi avversi e eventi avversi gravi registrati sui moduli di segnalazione dei casi. Gli eventi avversi sono definiti come qualsiasi evento medico imprevisto (sintomi o segni, risultati di laboratorio anomali o malattie) che emergono o peggiorano durante lo studio, rispetto alla visita iniziale dello studio. Possibili eventi avversi tra cui gravidanza ectopica, aborto spontaneo, reazioni correlate ai farmaci come sovradosaggio, sensibilità e tossicità e qualsiasi esito avverso correlato alla raccolta delle uova. Gli eventi avversi gravi sono definiti come qualsiasi evento medico imprevisto che abbia provocato morte, pericolo di vita, ricovero ospedaliero richiesto o prolungamento del ricovero esistente, o provocato disabilità o incapacità persistente o significativa. Un'anomalia congenita o un difetto congenito sono considerati eventi avversi gravi.

analisi statistica

Un obiettivo chiave di questo studio è determinare la fattibilità, l'accettabilità e la variabilità dei risultati per aiutare a pianificare uno studio di efficacia più ampio e adeguatamente potenziato. La dimensione del campione pianificata è di 80 pazienti (40 per gruppo), il che dovrebbe consentire conclusioni relativamente precise riguardo ai risultati di fattibilità. Dato che questa è la prima volta che CAPA-IVM è stato utilizzato clinicamente presso il nostro centro, l'obiettivo di questo studio pilota è stimare il tasso di nati vivi e gli intervalli di confidenza al 95% associati (CI) per il nuovo intervento nella pratica clinica. Metodi statistici non parametrici come la somma dei ranghi di Wilcoxon vengono applicati a risultati continui o ordinali. Per stimare gli intervalli di confidenza (IC) al 95% per la differenza tra due mediane, viene applicato il bootstrapping e i relativi metodi di ricampionamento. L'incidenza degli esiti è stimata per ciascun gruppo di trattamento e la differenza tra i gruppi è stata analizzata utilizzando il rischio relativo (RR), il 95% CI di RR e il test esatto di Fisher. Viene eseguita un'analisi per sottogruppi basata sulla dimensione follicolare (<6 contro ≥6 mm). I dati sono presentati come valori medi con deviazione standard (DS), mediane e intervalli interquartili (IQR) o proporzioni. Tutte le analisi vengono eseguite utilizzando R (versione 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria). La significatività statistica è definita come p<0,05.