CAPA-IVM frente a MIV ESTÁNDAR

Preparación de pacientes

Los pacientes con PCOM pueden inscribirse en el estudio: (1) mujeres con ciclos menstruales de duración normal (≤35 días) y (2) mujeres con oligomenorrea (menstruación que ocurre a intervalos >35 días con 4-9 períodos/año) o amenorrea total. Las pacientes fueron seguidas hasta el final del embarazo.

Los pacientes tienen su primera visita a la clínica el día 2 del ciclo menstrual. En esta visita se toma muestra de sangre para valoración de FSH (Hormona Folículo Estimulante), LH (Hormona Luteinizante), estradiol y progesterona, y se les inyecta gonadotropina 150 UI (unidad internacional) una vez al día por la tarde. Todos los pacientes regresan en la mañana del día siguiente (día 3 del ciclo) para la ecografía y la dosis final de gonadotropina se administra en la tarde (14:00). Cuando todos los folículos tenían menos de 8 mm de diámetro, se administró otra dosis de gonadotropina y los pacientes regresaron al día siguiente para realizarse una ecografía, análisis de sangre y recibir su dosis final de gonadotropina esa tarde (2 p. m.). El número máximo de inyecciones de gonadotropina son tres, y la extracción de ovocitos se programa a las 42-46 horas de la última inyección de gonadotropina en todas las pacientes. El día de la OPU (Oocyte Pick-up) se realizan ecografías y análisis de sangre para determinar los niveles de FSH, LH, estradiol y progesterona. Durante la OPU, el tamaño del folículo se mide antes de la punción. Los folículos más grandes (≥ 6 mm) se perforan primero, luego se limpia la aguja y luego se perforan los folículos más pequeños (< 6 mm). Por lo tanto, cada tubo contiene AOC (Cumulus-Oocyte Complex) de un tamaño específico (<6 o ≥6 mm).

cultivo de ovocitos

Los ovocitos de pacientes del grupo CAPA-IVM se recolectan y procesan en presencia de CNP (péptido natriurético tipo C) como inhibidor meiótico. En el grupo CAPA-IVM, los AOC se sembraron en una placa de 4 pocillos (Nunc, Dinamarca) a razón de 10 AOC/pocillo usando medio CAPA (Medicult IVM medium; Origio, Dinamarca) suplementado con 1 mUI/ml de rFSH, 5 ng/ml insulina, estradiol 10 nM, albúmina sérica humana 10 mg/ml [SAGE, Dinamarca] y CNP 25 nM (nanoMol) en aceite durante 24 horas a 37 °C, dióxido de carbono al 6 % en el aire). Después de 24 horas, los AOC se lavan y se transfieren a medio IVM (Origio, Dinamarca) que contiene 5 ng/ml de insulina, 10 nM de estradiol, 100 ng/ml de anfiregulina humana recombinante y 100 mUI/ml de rFSH (hormona estimulante del folículo recombinante) y se incuban bajo aceite durante 30 h a 37°C, 6% de dióxido de carbono en el aire.

En el grupo IVM estándar (control), los COC se sembraron en una placa de 4 pocillos a 10 COC/pocillo utilizando medio IVM suplementado con 75 mUI/ml de FSH recombinante (Merck, Suiza), 100 mUI/ml de hCG (MSD, EE. UU.) , 0,01 mg/ml de hormona del crecimiento (Merck, Suiza) y 10 mg/ml de albúmina sérica humana (SAGE, Dinamarca). Los AOC se incuban durante 30 horas en las mismas condiciones físicas y atmosféricas que el grupo CAPA-IVM.

Fertilización y cultivo de embriones

Después de la IVM, los ovocitos maduros se fertilizan mediante inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) y se cultivan en una incubadora a 37 °C, 5 % de dióxido de carbono, 5 % de oxígeno. El control de fertilización se realiza a las 16-18 horas después de la ICSI. Los embriones se cultivan hasta el día 3 en Global Total LP (Life Global, Canadá) en grupos de 2-3 embriones por microgotas de 30 µL. Los embriones que cumplían con los criterios de congelación se vitrificaron (Cryotech, Japón) como embriones del tercer día de escisión. Los embriones de muy mala calidad (consenso de Estambul sobre la evaluación de la calidad del embrión) definidos como fragmentación >30 %, <6 células y multinucleación no se congelan.

Cebado endometrial y transferencia de embriones

No se realizan transferencias de embriones en fresco. Los pacientes reciben estradiol oral 2 mg 4 veces al día desde el día 2 de su ciclo menstrual. Después de un período de tratamiento con estradiol de al menos 10 días y cuando el grosor del endometrio era ≥8 mm, se administran 200 mg de progesterona por vía intravaginal 4 veces al día. La transferencia de embriones se programa 3 días después de iniciar la progesterona. La beta hCG sérica se analiza 14 días después de la transferencia del embrión. Si una mujer queda embarazada, gonadotropina coriónica humana beta (hCG) >5 mIU/mL, la administración de progesterona se mantiene en la misma dosis hasta al menos 11 semanas de embarazo. A las 7 semanas de gestación se realiza una ecografía para determinar la viabilidad del embarazo.

Seguridad del procedimiento ART (Tecnología de reproducción asistida) en PCOS

La seguridad se monitorea en cada visita a la clínica o, si ocurriera algún efecto secundario, interrogando y examinando al paciente, con eventos adversos y eventos adversos graves registrados en formularios de informes de casos. Los eventos adversos se definen como cualquier evento médico inesperado (síntomas o signos, hallazgos de laboratorio anormales o enfermedades) que surgen o empeoran durante el ensayo, en relación con la visita inicial del ensayo. Posibles eventos adversos que incluyen embarazo ectópico, aborto espontáneo, reacciones relacionadas con medicamentos como sobredosis, sensibilidad y toxicidad, y cualquier resultado adverso relacionado con la recolección de óvulos. Los eventos adversos graves se definen como cualquier evento médico inesperado que resultó en la muerte, que puso en peligro la vida, que requirió la hospitalización del paciente o la prolongación de la hospitalización existente, o que resultó en una discapacidad o incapacitación persistente o significativa. Las anomalías congénitas o defectos de nacimiento se consideran eventos adversos graves.

análisis estadístico

Un objetivo clave de este estudio es determinar la viabilidad, la aceptabilidad y la variabilidad de los resultados para ayudar a planificar un ensayo de eficacia más grande y con el poder estadístico adecuado. El tamaño de muestra planificado es de 80 pacientes (40 por grupo), lo que debería permitir conclusiones relativamente precisas con respecto a los resultados de viabilidad. Dado que es la primera vez que CAPA-IVM se utiliza clínicamente en nuestro centro, el objetivo de este estudio piloto es estimar la tasa de nacidos vivos y los intervalos de confianza (IC) del 95% asociados para la nueva intervención en la práctica clínica. Los métodos estadísticos no paramétricos, como la suma de rangos de Wilcoxon, se aplican a resultados continuos u ordinales. Para estimar los intervalos de confianza (IC) del 95 % para la diferencia entre dos medianas, se aplican métodos de muestreo inicial y remuestreo relacionados. La incidencia de los resultados se estima para cada grupo de tratamiento, y la diferencia entre los grupos se analizó mediante el riesgo relativo (RR), el IC del 95% del RR y la prueba exacta de Fisher. Se realiza un análisis de subgrupos basado en el tamaño folicular (<6 versus ≥6 mm). Los datos se presentan como valores medios con desviación estándar (SD), medianas y rangos intercuartílicos (IQR) o proporciones. Todos los análisis se realizan utilizando R (Versión 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Viena, Austria). La significación estadística se define como p<0,05.