CAPA-IVM versus STANDAARD IVM

Voorbereiding van patiënten

Patiënten met PCOM mogen deelnemen aan het onderzoek: (1) vrouwen met een normale lengte van de menstruatiecyclus (≤35 dagen), en (2) vrouwen met oligomenorroe (menstruatie die optreedt met tussenpozen >35 dagen met 4-9 menstruaties/jaar) of totale amenorroe. Patiënten werden gevolgd tot het einde van de zwangerschap.

Patiënten hebben hun eerste bezoek aan de kliniek op dag 2 van de menstruele cyclus. Bij dit bezoek werd een bloedmonster genomen voor beoordeling van FSH (follikelstimulerend hormoon), LH (luteïniserend hormoon), oestradiol en progesteron, en ze krijgen hun gonadotropine-injectie 150 IE (internationale eenheid) eenmaal per dag in de middag. Alle patiënten komen in de ochtend van de volgende dag (cyclusdag 3) terug voor echografie en de laatste dosis gonadotropine werd in de middag (14.00 uur) gegeven. Toen alle follikels een diameter van <8 mm hadden, werd nog een dosis gonadotropine gegeven en de patiënten kwamen de volgende dag terug voor echografie, bloedonderzoek en kregen die middag (14.00 uur) hun laatste dosis gonadotropine. Het maximale aantal gonadotropine-injecties is drie en het ophalen van de eicel is gepland op 42-46 uur na de laatste gonadotropine-injectie bij alle patiënten. Echografie en bloedonderzoek om de FSH-, LH-, oestradiol- en progesteronspiegels te bepalen, worden uitgevoerd op de dag van OPU (Oocyte Pick-up). Tijdens OPU wordt de follikelgrootte gemeten vóór punctie. Grotere follikels (≥6 mm) worden eerst aangeprikt, daarna wordt de naald doorgespoeld en vervolgens worden kleinere follikels (<6 mm) aangeprikt. Daarom bevat elk buisje COC's (Cumulus-Oocyte Complex) van een bepaalde grootte (<6 of ≥6 mm).

Eicel cultuur

Eicellen van patiënten in de CAPA-IVM-groep worden verzameld en verwerkt in aanwezigheid van CNP (C-type Natriuretic Peptide) als meiotische remmer. In de CAPA-IVM-groep worden COC's uitgeplaat in een schaal met 4 putjes (Nunc, Denemarken) met 10 COC's/putje met behulp van CAPA-medium (Medicult IVM-medium; Origio, Denemarken) aangevuld met 1 mIU/ml rFSH, 5 ng/ml insuline, 10 nM oestradiol, 10 mg/ml humaan serumalbumine [SAGE, Denemarken] en 25 nM (nanoMol) CNP onder olie gedurende 24 uur bij 37°C, 6% koolstofdioxide in lucht). Na 24 uur worden COC's gewassen en overgebracht naar IVM-medium (Origio, Denemarken) met 5 ng/ml insuline, 10 nM estradiol, 100 ng/ml humaan recombinant amphireguline en 100 mIU/ml rFSH (recombinant follikelstimulerend hormoon), en geïncubeerd. onder olie gedurende 30 uur bij 37°C, 6% koolstofdioxide in lucht.

In de standaard IVM-groep (controle) werden COC's uitgeplaat in een schaal met 4 putjes bij 10 COC's / putje met behulp van IVM-medium aangevuld met 75 mIU / ml recombinant FSH (Merck, Zwitserland), 100 mIU / ml hCG (MSD, VS) , 0,01 mg/ml groeihormoon (Merck, Zwitserland) en 10 mg/ml humaan serumalbumine (SAGE, Denemarken). COC's worden 30 uur geïncubeerd onder dezelfde fysieke en atmosferische omstandigheden als de CAPA-IVM-groep.

Bevruchting en embryokweek

Na IVM worden gerijpte oöcyten bevrucht met behulp van intracytoplasmatische sperma-injectie (ICSI) en gekweekt in een incubator bij 37°C, 5% koolstofdioxide, 5% zuurstof. Bevruchtingscontrole vindt plaats 16-18 uur na ICSI. Embryo's worden gekweekt tot dag 3 in Global Total LP (Life Global, Canada) in groepen van 2-3 embryo's per 30 µL microdruppel. Embryo's die voldoen aan de invriescriteria werden verglaasd (Cryotech, Japan) als klievende embryo's van dag 3. Embryo's van extreem slechte kwaliteit (consensus van Istanbul over beoordeling van embryokwaliteit), gedefinieerd als fragmentatie >30%, <6 cellen en meerkernige vorming, worden niet ingevroren.

Endometriumpriming en embryotransfer

Er worden geen verse embryotransfers uitgevoerd. Patiënten krijgen oraal oestradiol 2 mg 4 maal daags vanaf dag 2 van hun menstruele cyclus. Na een behandelingsperiode met oestradiol van ten minste 10 dagen en wanneer de dikte van het endometrium ≥ 8 mm was, wordt 200 mg progesteron 4 maal daags intravaginaal toegediend. Embryotransfer is gepland 3 dagen na het starten van progesteron. Serum beta hCG wordt 14 dagen na embryotransfer getest. Als een vrouw zwanger wordt, bèta-humaan choriongonadotrofine (hCG) > 5 mIU/ml, wordt de toediening van progesteron in dezelfde dosis gehandhaafd tot ten minste 11 weken zwangerschap. Een echografie om de levensvatbaarheid van de zwangerschap te bepalen wordt uitgevoerd bij een zwangerschapsduur van 7 weken.

Veiligheid van de ART-procedure (Assisted Reproductive Technology) bij PCOS

De veiligheid wordt gecontroleerd bij elk bezoek aan de kliniek of, als er bijwerkingen zijn opgetreden, door de patiënt te ondervragen en te onderzoeken, waarbij bijwerkingen en ernstige bijwerkingen worden geregistreerd op formulieren voor casusrapporten. Bijwerkingen worden gedefinieerd als elk onverwacht medisch voorval (symptomen of tekenen, abnormale laboratoriumbevindingen of ziekten) die tijdens het onderzoek opduiken of verergeren ten opzichte van het eerste bezoek aan het onderzoek. Mogelijke bijwerkingen, waaronder buitenbaarmoederlijke zwangerschap, miskraam, medicatiegerelateerde reacties zoals overdosering, gevoeligheid en toxiciteit, en eventuele nadelige gevolgen die verband houden met het verzamelen van eieren. Ernstige ongewenste voorvallen worden gedefinieerd als elk onverwacht medisch voorval dat resulteerde in de dood, levensbedreigende, vereiste intramurale ziekenhuisopname of verlenging van bestaande ziekenhuisopname, of resulteerde in aanhoudende of significante invaliditeit of arbeidsongeschiktheid. Aangeboren afwijkingen of geboorteafwijkingen worden beschouwd als ernstige bijwerkingen.

statistische analyse

Een belangrijk doel van deze studie is het bepalen van de haalbaarheid, aanvaardbaarheid en uitkomstvariabiliteit om te helpen bij het plannen van een grotere, voldoende krachtige werkzaamheidsstudie. De geplande steekproefomvang is 80 patiënten (40 per groep), wat relatief nauwkeurige conclusies met betrekking tot haalbaarheidsresultaten mogelijk zou moeten maken. Aangezien dit de eerste keer is dat CAPA-IVM klinisch wordt gebruikt in ons centrum, is het doel van deze pilotstudie het schatten van het aantal levendgeborenen en de bijbehorende 95% betrouwbaarheidsintervallen (BI) voor de nieuwe interventie in de klinische praktijk. Niet-parametrische statistische methoden zoals de rangsom van Wilcoxon worden toegepast op continue of ordinale uitkomsten. Om 95%-betrouwbaarheidsintervallen (BI) voor het verschil tussen twee medianen te schatten, wordt bootstrap en gerelateerde resampling-methoden toegepast. De incidentie van uitkomsten wordt geschat voor elke behandelingsgroep en het verschil tussen groepen werd geanalyseerd met behulp van relatief risico (RR), 95% BI van RR en Fisher exact-test. Er wordt een subgroepanalyse uitgevoerd op basis van de follikelgrootte (<6 versus ≥6 mm). Gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde waarden met standaarddeviatie (SD), medianen en interkwartielbereiken (IQR's) of proporties. Alle analyses worden uitgevoerd met behulp van R (versie 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Wenen, Oostenrijk). Statistische significantie wordt gedefinieerd als p<0,05.