CAPA-IVM Vs. STANDARD IVM

Potilaiden valmistelu

PCOM-potilaat voivat ilmoittautua tutkimukseen: (1) naiset, joilla on normaali kuukautiskierto (≤35 päivää) ja (2) naiset, joilla on oligomenorrea (kuukautiset yli 35 päivän välein ja 4-9 jaksoa vuodessa) tai täydellinen amenorrea. Potilaita seurattiin raskauden loppuun asti.

Potilaiden ensimmäinen klinikkakäynti on kuukautiskierron toisena päivänä. Tällä käynnillä otettiin verinäyte FSH:n (Follicle Stimulating Hormone), LH:n (luteinisoivan hormonin), estradiolin ja progesteronin arvioimiseksi, ja he saavat gonadotropiiniruiskeen 150 IU (kansainvälinen yksikkö) kerran päivässä iltapäivällä. Kaikki potilaat palaavat seuraavan päivän aamuna (syklipäivä 3) ultraäänitutkimukseen ja lopullinen gonadotropiiniannos annettiin iltapäivällä (14.00). Kun kaikki follikkelit olivat halkaisijaltaan alle 8 mm, annettiin toinen annos gonadotropiinia, ja potilaat palasivat seuraavana päivänä ultraäänitutkimukseen, verikokeisiin ja viimeinen gonadotropiiniannos iltapäivällä (14.00). Gonadotropiiniinjektioiden enimmäismäärä on kolme, ja munasolujen talteenotto on suunniteltu 42-46 tunnin kuluttua viimeisen gonadotropiiniinjektion jälkeen kaikille potilaille. Ultraääni- ja verikokeet FSH-, LH-, estradioli- ja progesteronitasojen määrittämiseksi tehdään OPU-päivänä (Oocyte Pick-up). OPU:n aikana follikkelien koko mitataan ennen puhkaisua. Suuremmat follikkelit (≥6 mm) puhkaistaan ​​ensin, sitten neula huuhtelee ja sitten pienemmät follikkelit (<6 mm) puhkaistaan. Siksi jokainen putki sisältää tietynkokoisia COC:itä (Cumulus-Oocyte Complex) (<6 tai ≥6 mm).

Munasoluviljely

CAPA-IVM-ryhmän potilaiden munasolut kerätään ja prosessoidaan CNP:n (C-tyypin natriureettinen peptidi) läsnä ollessa meioottisena estäjänä. CAPA-IVM-ryhmässä COC:t maljataan 4-kuoppaiselle maljalle (Nunc, Tanska) 10 COC:ta/kuoppa käyttämällä CAPA-elatusainetta (Medicult IVM medium; Origio, Tanska), jota on täydennetty 1 mIU/ml rFSH:lla, 5 ng/ml insuliinia, 10 nM estradiolia, 10 mg/ml ihmisen seerumin albumiinia [SAGE, Tanska] ja 25 nM (nanoMol) CNP:tä öljyn alla 24 tunnin ajan 37 °C:ssa, 6 % hiilidioksidia ilmassa). 24 tunnin kuluttua COC:t pestään ja siirretään IVM-elatusaineeseen (Origio, Tanska), joka sisältää 5 ng/ml insuliinia, 10 nM estradiolia, 100 ng/ml ihmisen rekombinanttiamfireguliinia ja 100 mIU/ml rFSH:ta (rekombinantti follikkelia stimuloiva hormoni). öljyn alla 30 tuntia 37 °C:ssa, 6 % hiilidioksidia ilmassa.

Normaalissa IVM-ryhmässä (kontrolli) COC:t maljattiin 4-kuoppaiselle maljalle 10 COC:ta/kuoppa käyttämällä IVM-elatusainetta, jota oli täydennetty 75 mIU/ml rekombinantilla FSH:lla (Merck, Sveitsi), 100 mIU/ml hCG:tä (MSD, USA) 0,01 mg/ml kasvuhormonia (Merck, Sveitsi) ja 10 mg/ml ihmisen seerumialbumiinia (SAGE, Tanska). COC:ita inkuboidaan 30 tuntia käyttäen samoja fysikaalisia ja ilmakehän olosuhteita kuin CAPA-IVM-ryhmää.

Hedelmöitys ja alkioviljely

IVM:n jälkeen kypsyneet munasolut hedelmöitetään käyttämällä intrasytoplasmista siittiöinjektiota (ICSI) ja viljellään inkubaattorissa 37 °C:ssa, 5 % hiilidioksidissa, 5 % happessa. Lannoitustarkastus tehdään 16-18 tuntia ICSI:n jälkeen. Alkioita viljellään päivään 3 asti Global Total LP:ssä (Life Global, Kanada) ryhmissä, joissa on 2-3 alkiota 30 µl:n mikropisaroita kohti. Alkiot, jotka täyttävät pakastuskriteerit, lasitettiin (Cryotech, Japani) pilkkoutumispäivän 3 alkioksi. Äärimmäisen huonolaatuisia alkioita (Istanbulin konsensus alkionlaadun arvioinnista), jotka on määritelty fragmentoituneeksi >30 %, <6 soluksi ja monitumaiseksi, ei jäädytetä.

Endometriumin esikäsittely ja alkionsiirto

Tuoreiden alkioiden siirtoja ei tehdä. Potilaat saavat suun kautta 2 mg estradiolia 4 kertaa päivässä kuukautiskiertonsa 2. päivästä alkaen. Vähintään 10 päivän estradiolihoitojakson jälkeen ja kun kohdun limakalvon paksuus oli ≥ 8 mm, 200 mg progesteronia annetaan vaginaalisesti 4 kertaa päivässä. Alkionsiirto suunnitellaan 3 päivää progesteronin aloittamisen jälkeen. Seerumin beeta-hCG testataan 14 päivää alkionsiirron jälkeen. Jos nainen tulee raskaaksi, ihmisen beeta-kooriongonadotropiini (hCG) >5 mIU/ml, progesteronin antoa jatketaan samalla annoksella vähintään 11 ​​raskausviikkoon asti. Ultraäänitutkimus raskauden elinkelpoisuuden määrittämiseksi tehdään 7 raskausviikolla.

ART (Assisted Reproductive Technology) -menettelyn turvallisuus PCOS:ssä

Turvallisuutta seurataan jokaisella klinikkakäynnillä tai, jos sivuvaikutuksia ilmenee, potilasta kuulustelemalla ja tutkimalla. Haittatapahtumat ja vakavat haittatapahtumat kirjataan tapausraporttilomakkeisiin. Haittatapahtumat määritellään odottamattomiksi lääketieteellisiksi ilmiöiksi (oireet tai merkit, poikkeavat laboratoriolöydökset tai sairaudet), jotka ilmenevät tai pahenevat tutkimuksen aikana, verrattuna alkuperäiseen tutkimuskäyntiin. Mahdolliset haittatapahtumat, mukaan lukien kohdunulkoinen raskaus, keskenmeno, lääkitykseen liittyvät reaktiot, kuten yliannostus, herkkyys ja toksisuus, ja kaikki munankeräukseen liittyvät haittavaikutukset. Vakavilla haittatapahtumilla tarkoitetaan kaikkia odottamattomia lääketieteellisiä tapahtumia, jotka ovat johtaneet kuolemaan, hengenvaaraan, vaatineet sairaalahoitoa tai pidentää olemassa olevaa sairaalahoitoa tai johtivat pysyvään tai merkittävään vammaan tai toimintakyvyttömyyteen. Synnynnäistä epämuodostusta tai epämuodostusta pidetään vakavina haittatapahtumina.

Tilastollinen analyysi

Tämän tutkimuksen päätavoite on määrittää toteutettavuus, hyväksyttävyys ja tulosten vaihtelevuus, jotta voidaan suunnitella suurempi, riittävän tehokas tehokkuustutkimus. Suunniteltu otoskoko on 80 potilasta (40 per ryhmä), minkä pitäisi mahdollistaa suhteellisen tarkat johtopäätökset toteutettavuustuloksista. Koska tämä on ensimmäinen kerta, kun CAPA-IVM:ää on käytetty kliinisesti keskuksessamme, tämän pilottitutkimuksen tavoitteena on arvioida elävänä syntyvyyttä ja siihen liittyviä 95 %:n luottamusväliä (CI) uudelle interventiolle kliinisessä käytännössä. Ei-parametrisia tilastollisia menetelmiä, kuten Wilcoxonin arvosummaa, sovelletaan jatkuviin tai järjestystuloksiin. Kahden mediaanin välisen eron 95 %:n luottamusvälin (CI) arvioimiseksi käytetään bootstrappingia ja siihen liittyviä uudelleennäytteenottomenetelmiä. Tulosten ilmaantuvuus arvioidaan kullekin hoitoryhmälle, ja ryhmien välinen ero analysoitiin käyttämällä suhteellista riskiä (RR), RR:n 95 % luottamusväliä ja Fisherin tarkkaa testiä. Alaryhmäanalyysi suoritetaan follikkelien koon perusteella (<6 vs. ≥6 mm). Tiedot esitetään keskiarvoina, joissa on standardipoikkeama (SD), mediaanit ja kvartiilivälit (IQR) tai suhteet. Kaikki analyysit suoritetaan käyttämällä R:tä (versio 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, Wien, Itävalta). Tilastollinen merkitsevyys määritellään p<0,05:ksi.