CAPA-IVM 대 표준 IVM

환자 준비

PCOM 환자는 연구에 등록할 수 있습니다: (1) 정상적인 월경 주기 길이(≤35일)를 가진 여성, 및 (2) 희발월경(연간 4-9 주기로 >35일 간격으로 발생하는 월경)이 있는 여성 또는 총 무월경. 임신 말기까지 환자를 추적 관찰했습니다.

환자는 생리 주기 2일째에 첫 진료소를 방문합니다. 이번 방문에서 FSH(난포 자극 호르몬), LH(황체 형성 호르몬), 에스트라디올 및 프로게스테론 평가를 위해 혈액 샘플을 채취했으며 오후에 하루에 한 번 150IU(국제 단위)의 성선 자극 호르몬 주사를 맞았습니다. 모든 환자는 다음날 아침(주기 3일) 초음파 검사를 받고 오후(오후 2시)에 성선 자극 호르몬의 최종 투여량을 받았습니다. 모든 난포의 직경이 8mm 미만일 때, 고나도트로핀을 한 번 더 투여하고, 환자는 다음날 초음파, 혈액 검사를 위해 다시 돌아와 그날 오후(오후 2시) 최종 용량의 고나도트로핀을 투여받습니다. 성선 자극 호르몬 주사의 최대 횟수는 3회이며, 모든 환자에서 마지막 성선 자극 호르몬 주사 후 42-46시간에 난자 채취가 예정되어 있습니다. FSH, LH, 에스트라디올 및 프로게스테론 수치를 결정하기 위한 초음파 및 혈액 검사는 OPU(난자 채취) 당일에 수행됩니다. OPU 동안 난포 크기는 천자 전에 측정됩니다. 더 큰 모낭(≥6mm)을 먼저 천자한 다음 바늘이 플러시한 다음 더 작은 모낭(<6mm)을 천자합니다. 따라서 각 튜브에는 특정 크기(<6 또는 ≥6mm)의 COC(적운-난자 복합체)가 포함되어 있습니다.

난자 배양

CAPA-IVM 그룹 환자의 난모세포를 채취하여 감수분열 억제제인 ​​CNP(C-type Natriuretic Peptide)를 처리합니다. CAPA-IVM 그룹에서 COC는 1mIU/mL rFSH, 5ng/mL가 보충된 CAPA 배지(Medicult IVM 배지; Origio, 덴마크)를 사용하여 10 COC/웰로 4웰 접시(Nunc, 덴마크)에 플레이팅됩니다. 인슐린, 10nM 에스트라디올, 10mg/mL 인간 혈청 알부민[SAGE, 덴마크] 및 25nM(nanoMol) CNP를 오일 하에 37°C, 공기 중 6% 이산화탄소에서 24시간 동안. 24시간 후, COC를 세척하고 5 ng/mL 인슐린, 10 nM 에스트라디올, 100 ng/mL 인간 재조합 암피레귤린 및 100 mIU/mL rFSH(재조합 여포 자극 호르몬)를 함유하는 IVM 배지(Origio, Denmark)로 옮기고 배양합니다. 37°C, 공기 중 6% 이산화탄소에서 30시간 동안 오일 아래.

표준 IVM 그룹(대조군)에서 COC는 75 mIU/mL 재조합 FSH(Merck, 스위스), 100 mIU/mL hCG(MSD, USA)가 보충된 IVM 배지를 사용하여 10 COC/웰로 4웰 접시에 플레이팅되었습니다. , 0.01mg/mL 성장 호르몬(Merck, 스위스) 및 10mg/mL 인간 혈청 알부민(SAGE, 덴마크). COC는 CAPA-IVM 그룹과 동일한 물리적 및 대기 조건을 사용하여 30시간 동안 배양됩니다.

수정 및 배아 배양

IVM 후, 성숙한 난모세포를 세포질 내 정자 주입법(ICSI)을 사용하여 수정하고 37°C, 5% 이산화탄소, 5% 산소의 배양기에서 배양합니다. 수정 확인은 ICSI 후 16-18시간에 수행됩니다. 배아는 30µL 미세 방울당 2-3개의 배아 그룹으로 Global Total LP(Life Global, Canada)에서 3일째까지 배양됩니다. 동결 기준을 충족하는 배아는 3일째 배아를 절단하여 유리화(Cryotech, Japan)하였다. 단편화 >30%, <6개 세포 및 다중 핵 형성으로 정의되는 극도로 열악한 품질의 배아(배아 품질 평가에 대한 이스탄불 합의)는 동결되지 않습니다.

자궁내막 프라이밍 및 배아 이식

신선한 배아 이식은 수행되지 않습니다. 환자는 월경 주기 2일째부터 경구용 에스트라디올 2 mg을 매일 4회 복용합니다. 최소 10일의 에스트라디올 치료 기간 후 자궁내막 두께가 ≥8mm인 경우 프로게스테론 200mg을 1일 4회 질내 투여합니다. 배아 이식은 프로게스테론 시작 후 3일에 예정되어 있습니다. 혈청 베타 hCG는 배아 이식 후 14일에 검사합니다. 여성이 임신한 경우 베타 인간 융모막 성선 자극 호르몬(hCG) >5 mIU/mL, 프로게스테론 투여는 임신 11주 이상까지 동일한 용량으로 유지됩니다. 임신 생존 가능성을 결정하기 위한 초음파 검사는 임신 7주차에 시행됩니다.

PCOS에서 ART(보조 생식 기술) 절차의 안전성

각 진료소 방문 시 또는 부작용이 발생한 경우 환자에게 질문하고 검사하여 부작용 및 심각한 부작용을 사례 보고서 양식에 기록하여 안전성을 모니터링합니다. 부작용은 초기 시험 방문과 관련하여 시험 중에 나타나거나 악화되는 예상치 못한 의학적 발생(증상 또는 징후, 비정상적인 실험실 소견 또는 질병)으로 정의됩니다. 자궁외 임신, 유산, 과다복용과 같은 약물 관련 반응, 감수성 및 독성, 난자 수집과 관련된 부작용을 포함한 가능한 부작용. 심각한 부작용은 사망, 생명을 위협하거나 입원 환자 입원 또는 기존 입원 기간 연장을 초래하거나 지속적이거나 상당한 장애 또는 무력화를 초래하는 예상치 못한 의학적 사건으로 정의됩니다. 선천적 기형 또는 선천적 결함은 심각한 부작용으로 간주됩니다.

통계 분석

이 연구의 핵심 목표는 타당성, 수용 가능성 및 결과 가변성을 결정하여 더 크고 적절하게 검증된 효능 시험을 계획하는 데 도움을 주는 것입니다. 계획된 샘플 크기는 80명의 환자(그룹당 40명)이며, 타당성 결과에 대해 상대적으로 정확한 결론을 내릴 수 있어야 합니다. CAPA-IVM이 우리 센터에서 임상적으로 사용된 것은 이번이 처음이라는 점을 감안할 때, 이 파일럿 연구의 목적은 임상 실습에서 새로운 중재에 대한 정상 출생률 및 관련 95% 신뢰 구간(CI)을 추정하는 것입니다. Wilcoxon 순위 합계와 같은 비모수 통계 방법은 연속 또는 순서 결과에 적용됩니다. 두 중앙값 간의 차이에 대한 95% 신뢰 구간(CI)을 추정하기 위해 부트스트래핑 및 관련 리샘플링 방법이 적용됩니다. 각 치료군에 대한 결과 발생률을 추정하고, 상대 위험도(RR), 95% CI of RR 및 Fisher exact test를 사용하여 그룹 간 차이를 분석했습니다. 소그룹 분석은 난포 크기(<6 대 ≥6 mm)를 기준으로 수행됩니다. 데이터는 표준 편차(SD), 중앙값 및 사분위수 범위(IQR) 또는 비율의 평균값으로 표시됩니다. 모든 분석은 R(버전 3.0.1; R Foundation for Statistical Computing, 비엔나, 오스트리아). 통계적 유의성은 p<0.05로 정의됩니다.