救命救急患者の急性ストレス反応に関連するテロメア長

テロメア長分析は、2 つの血液サンプルから決定されました。最初のサンプルは入院後最初の 72 時間に採取され、2 番目のサンプルは 5 日未満または 14 日以上経過した後に採取されました。 5 日目より前に退院した患者については、退院日に繰り返しサンプルを採取して分析しました。 血液サンプルの処理は次のとおりです。5 ml の血液を採取し、RBC 溶解液 (Biological Industries、Beit Haemek、Israel) を使用して赤血球 (RBC) を溶解しました。 ゲノム DNA の分離は、哺乳類の血液用の DNA 分離キット (Roche、マンハイム、ドイツ) を使用して実行されました。 簡単に説明すると、DNA を塩析法で分離し、洗浄し、イソプロパノールで沈殿させました。 DNA をポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) グレードの水に再懸濁しました。 DNA 濃度は、NanoDrop デバイス (Thermo Fisher、米国) を使用して測定しました。

Cawthon (2009) [20] の方法に若干の変更を加えて、DNA サンプルのテロメア長を分析しました。 各 DNA サンプルは、テロメア長分析用と参照遺伝子分析 (ヒト ヘモグロビン) 用の 2 セットのプライマーで分析されました。 プライマーを PCR グレードの水で 100 µM に希釈し、次に 10 µM に希釈しました。 DNA サンプルは、PCR グレードの水で 2.5 ng/μl に希釈しました。 プライマー配列を以下に示します。

電話: TGTTAGGTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTAACA 電話: ACACTAAGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTAGTGT hbgd:_GCCCGGCCCGCCGCGCCCGTCCCGCCGGAGGAGAAGTCTGCCGTT hbgu: GGCGGCGGGCGGCGCGGGCTGGGCGGCTTCATCCACGTTCACCTTG

反応 PCR は次のように処理されました。

50°C で 2 分間、95°C で 5 分間、94°C で 15 秒間、49°C で 15 秒間の単一サイクル。 40 サイクル: 94°C で 15 秒間、62°C で 10 秒間、および最終段階: 74°C で 15 秒間。 すべての反応は、Step One デバイス (ABI、米国) を使用して実行されました。