중환자의 급성 스트레스 반응과 관련된 텔로미어 길이

텔로미어 길이 분석은 2개의 혈액 샘플에서 결정되었으며, 첫 번째 샘플은 입원 후 처음 72시간 내에 채취되었고 두 번째 샘플은 < 5 또는 > 14일 후에 채취되었습니다. 5일 전에 퇴원한 환자의 경우 퇴원일에 반복 샘플을 채취하여 분석했습니다. 혈액 시료 처리는 다음과 같다: 5ml의 혈액을 수집하고 적혈구(RBC)를 RBC 용해 용액(Biological Industries, Beit Haemek, Israel)을 사용하여 용해시켰다. 게놈 DNA의 분리는 포유류 혈액용 DNA 분리 키트(Roche, Mannheim, Germany)를 사용하여 수행하였다. 간략하게, 염석 절차에 의해 DNA를 분리하고, 세척하고, 이소프로판올로 침전시켰다. DNA는 PCR(polymerase chain reaction) 등급의 물에 재현탁되었습니다. DNA 농도는 NanoDrop 장치(Thermo Fisher, USA)를 사용하여 측정하였다.

DNA 샘플은 Cawthon(2009)[20]의 방법에 따라 약간 수정하여 텔로미어 길이를 분석했습니다. 각 DNA 샘플은 텔로미어 길이 분석용 프라이머와 참조 유전자 분석용 프라이머(인간 헤모글로빈)의 두 세트로 분석되었습니다. 프라이머를 PCR 등급의 물에 100μM로 희석한 다음 10μM으로 희석했습니다. DNA 샘플을 PCR 등급 물에 2.5ng/µl로 희석했습니다. 프라이머 서열은 다음과 같습니다:

전화: TGTTAGGTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTAACA 전화: ACACTAAGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTAGTGT hbgd:_GCCCGGCCCGCCGCGCCCGTCCCGCCGGAGGAGAAGTCTGCCGTT hbgu: GGCGGCGGGCGGCGCGGGCTGGGCGGCTTCATCCACGTTCACCTTG

반응 PCR은 다음과 같이 처리되었습니다.

50°C에서 2분, 95°C에서 5분, 94°C에서 15초, 49°C에서 15초의 단일 주기; 40주기: 94°C에서 15초, 62°C에서 10초 및 최종 단계: 74°C에서 15초. 모든 반응은 Step One 장치(ABI, USA)를 사용하여 수행하였다.