Longueur des télomères en relation avec la réponse au stress aigu chez les patients en soins intensifs

L'analyse de la longueur des télomères a été déterminée à partir de 2 échantillons de sang, le premier échantillon prélevé dans les 72 premières heures après l'hospitalisation et le second après pas < 5 ou > 14 jours. Pour les patients sortis avant le jour 5, un échantillon répété a été prélevé et analysé le jour de la sortie. Le traitement de l'échantillon sanguin a été le suivant : 5 ml de sang ont été prélevés et les globules rouges (RBC) ont été lysés à l'aide de la solution de lyse RBC (Biological Industries, Beit Haemek, Israël). L'isolement de l'ADN génomique a été réalisé en utilisant le kit d'isolement d'ADN pour le sang de mammifère (Roche, Mannheim, Allemagne). En bref, l'ADN a été isolé par la procédure de relargage, lavé et précipité par de l'isopropanol. L'ADN a été remis en suspension dans de l'eau de qualité pour la réaction en chaîne par polymérase (PCR). La concentration d'ADN a été mesurée en utilisant le dispositif NanoDrop (Thermo Fisher, USA).

Les échantillons d'ADN ont été analysés pour la longueur des télomères selon la méthode de Cawthon (2009) [20] avec de légères modifications. Chaque échantillon d'ADN a été analysé par deux séries d'amorces détaillées ci-dessous, une pour l'analyse de la longueur des télomères et une pour une analyse de gène de référence (hémoglobine humaine). Les amorces ont été diluées à 100 uM dans de l'eau de qualité PCR, puis à 10 uM. Les échantillons d'ADN ont été dilués à 2,5 ng/µl dans de l'eau de qualité PCR. Les séquences d'amorces sont présentées ci-dessous :

telc : TGTTAGGTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTAACA telg : ACACTAAGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTAGTGT

La PCR de réaction a été traitée comme suit :

50°C pendant 2 min, 95°C pendant 5 min, un seul cycle de 94°C pendant 15 sec, 49°C pendant 15 sec ; 40 cycles de : 94°C pendant 15 sec, 62°C pendant 10 sec et une étape finale de : 74°C pendant 15 sec. Toutes les réactions ont été réalisées à l'aide de l'appareil Step One (ABI, USA).