重症监护患者端粒长度与急性应激反应的关系

端粒长度分析是从 2 个血液样本中确定的，第一个样本在住院后的前 72 小时内抽取，第二个样本在住院后不到 5 或 > 14 天后抽取。 对于第 5 天之前出院的患者，在出院当天再次抽取样本并进行分析。 血样处理如下：采集 5 ml 血液并使用 RBC 裂解液（Biological Industries, Beit Haemek, Israel）裂解红细胞 (RBC)。 使用哺乳动物血液 DNA 分离试剂盒（Roche，Mannheim，Germany）分离基因组 DNA。 简而言之，通过盐析程序分离 DNA，洗涤并用异丙醇沉淀。 将 DNA 重新悬浮在聚合酶链反应 (PCR) 级水中。 使用 NanoDrop 装置（Thermo Fisher，美国）测量 DNA 浓度。

根据 Cawthon (2009) [20] 的方法稍作修改，分析 DNA 样本的端粒长度。 每个 DNA 样本都通过下面详述的两组引物进行分析，一组用于端粒长度分析，另一组用于参考基因分析（人类血红蛋白）。 引物在 PCR 级水中稀释至 100µM，然后再稀释至 10µM。 DNA 样本在 PCR 级水中稀释至 2.5 ng/µl。 引物序列如下所示：

电话：TGTTAGGTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTAACA 电话：ACACTAAGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTAGTGT 电话：_GCCCGGCCCGCCGCGCCCGTCCCGCCGGAGGAGAAGTCTGCCGTT 电话：GGCGGCGGGCGGCGCGGGCTGGGCGGCTTCATCCACGTTCACCTTG

反应 PCR 处理如下：

50℃2分钟，95℃5分钟，94℃15秒，49℃15秒单循环； 40 个循环：94°C 15 秒，62°C 10 秒，最后阶段：74°C 15 秒。 所有反应均使用 Step One 设备（ABI，美国）进行。