ビタミンDはバイパス手術後の心筋損傷を軽減できますか?

登録は 2018 年 6 月に開始され、2018 年 12 月に完了しました。 選択基準は次のとおりです: ビタミン D 欠乏症 (25-ヒドロキシビタミン D [25(OH) D] < 20 ng/mL と定義) を伴う心肺バイパス (CPB) を使用して、選択的および孤立した冠動脈バイパス移植 (CABG) に紹介された患者）および正常な腎機能（クレアチニン<1.5mg/dL）。 除外基準は、最近の心筋梗塞、緊急の CABG、非分離冠動脈手術、やり直し手術、悪性疾患、急性または慢性の炎症性疾患の存在、過去 6 か月以内のビタミン D 治療歴、または参加への不本意でした。

介入 インフォームド コンセントに続いて、適格な研究参加者は、プラセボまたは合計 450,000 国際単位 (IU) のビタミン D3 (3 つの 50,000 IU のビタミン D3操作前に 3 日間毎日錠剤を服用してください。 プラセボ群は、同じ時点で毎日 3 錠の不活性薬を投与されました。 薬剤師を除いて、すべての研究者、患者、および医療チームは、グループの割り当てについて知らされていませんでした。

冠状動脈バイパスは、両方のグループの犯人病変で 1 つの外科チームによって行われました。 全身麻酔、手術およびCPB管理の標準プロトコルは、すべての患者に対して実施され、すでに詳細に説明されています[16]。

結果の測定 主要な結果は、免疫組織化学染色による右心房標本からのカスパーゼ 2、3、および 7 活性の測定による心臓アポトーシスの程度、ならびに抗炎症性インターロイキン-10 (IL-10) およびインスリン様増殖の血清レベルでした。因子 (IGF-1)、および N 末端 pro v 型脳ナトリウム利尿ペプチド (nt-pro BNP)。 右心耳からの生検は、非外傷性の方法で静脈カニューレを除去した後、手術の最後に採取され、ホルマリンに保持され、24 時間以内にパラフィン化されました。 IGF-1、IL-10の血清レベルを測定するために、ベースライン(T1)、麻酔導入前(T2)、プロタミン逆転後の手術終了時(T3)、および術後1日目(T4)に血液サンプルを採取しました。そしてプロBNP。 採血後１時間以内に血液サンプルを２５００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、血清をアッセイまで－２０℃で保存した。

酵素結合免疫吸着アッセイ IL-10の濃度は、定量的ELISAキットによって測定されました。 IGF-1の濃度は、定量的ELISAキットによって測定されました。

高速液体クロマトグラフィー法を用いて血清ビタミンDを検出した。 プロ BNP 測定は、市販の 2 サイト化学発光免疫測定法を使用して行われました。

免疫組織化学研究 免疫組織化学染色は、厚さ 5 マイクロメートルの切片で実施しました。 スライドを 37°C で 24 時間インキュベートし、予熱したキシレンで脱パラフィンし、降順のアルコールで再水和し、蒸留水で洗浄しました。 抗カスパーゼ-7およびエチレンジアミン四酢酸用のクエン酸緩衝液（pH 6.0）を使用して、電子レンジで熱による抗原回復を行いました。抗カスパーゼ-2および3用の緩衝溶液(Tris-EDTA)(pH=8)。切片に過酸化水素を添加することにより、エンドペルオキシダーゼのブロッキングを行った。 次いでタンパク質ブロックを５分間添加し、スライドをトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）で洗浄した。 .一次抗体として、抗カスパーゼ-2抗体、ウサギモノクローナル、抗カスパーゼ-3抗体、ウサギモノクローナル、抗カスパーゼ-7抗体、マウスモノクローナル(clone 7-1-11、abcam)抗体を添加し保管した。 30分間、TBSで洗浄。 マウスおよびウサギ特異的ホースラディッシュ ペルオキシダーゼ/ジアミノベンジジン (HRP/DAB) 免疫組織化学 (IHC) 検出マイクロポリマー キットを使用し、15 分間インキュベートした後、トリス緩衝生理食塩水 (TBS) で洗浄しました。 ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）色原体を添加し、５分間保持した。 スライドを蒸留水で洗浄し、ヘマトキシリンで対比染色した。 リンパ節組織を含む切片を陽性対照として使用しました。 陰性対照には、リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) に置き換えた一次抗体が含まれていました。 抗カスパーゼ-2、抗カスパーゼ-3、および抗カスパーゼ-7の細胞質発現について、免疫染色切片を検討した。 ハイパワーフィールド（HPF）（X 400）あたりの免疫反応性細胞の数をカウントしました。 この目的のために、少なくとも10個のHPFが評価され、陽性細胞の平均が記録されました。

サンプルサイズと統計的方法 患者数 (1 グループあたり 30 人の患者) の決定は、CABG 設定でのカスパーゼ活性を調査した以前の試験に基づいていました。

カテゴリ変数は数値とパーセンテージとして報告されましたが、連続変数については平均±標準偏差が表されました。 経時的なグループ間で測定された炎症マーカーの変化を評価するために、ボンフェローニ補正（タイプIエラー補正）を使用した分散分析と多重比較の反復測定が適用されました。 正規性のコルモゴロフ-スミルノフ検定が実行されました。 連続変数とカテゴリ変数は、スチューデントの t 検定 (または異常な分布を満たす場合はマンホイットニー検定) とカイ 2 乗をそれぞれ使用して、グループ間で比較されました。 すべての統計分析は、SPSS バージョン 23 (SPSS、シカゴ、イリノイ州、米国) を使用して実行されました。 p 値 <0.05 は有意であると見なされました。