维生素 D 可以减少搭桥手术后的心肌损伤吗？

招生于2018年6月开始，2018年12月完成。 纳入标准如下：使用心肺旁路术 (CPB) 进行择期和孤立的冠状动脉旁路移植术 (CABG) 且维生素 D 缺乏（定义为 25-羟基维生素 D [25(OH) D] < 20 ng/mL）的患者) 和正常肾功能（肌酐 <1.5mg/dL）。 排除标准为：近期心肌梗死、紧急 CABG、非隔离冠状动脉手术、重做手术、恶性疾病、存在急性或慢性炎症性疾病、前 6 个月内维生素 D 治疗史或不愿参与。

干预 在知情同意后，符合条件的研究参与者被随机分配（通过使用计算机生成的随机代码）以 1:1 的比例接受安慰剂或总共 450,000 国际单位 (IU) 维生素 D3（三个 50,000 IU 维生素 D3每天片剂 3 天）在手术前。 安慰剂组每天在同一时间点接受三片非活性药物片剂。 除药剂师外，所有研究者、患者和医疗团队均不知道分组情况。

由一个外科团队在两组的罪魁祸首病变中进行了冠状动脉搭桥手术。 对所有患者进行了全身麻醉、手术和 CPB 管理的标准方案，并且已经进行了详细描述 [16]。

结果测量 主要结果是通过免疫组织化学染色测量右心房标本半胱天冬酶 2、3 和 7 活性以及抗炎白细胞介素 10 (IL-10) 和胰岛素样生长的血清水平来确定心脏凋亡程度因子 (IGF-1) 和 N 末端 pro v 型脑利钠肽 (nt-pro BNP)。 来自右心耳的活组织检查是在手术结束时以非创伤性方式移除静脉插管后进行的，保存在福尔马林中并在不到 24 小时内石蜡化。 在基线时间（T1）、麻醉诱导前（T2）、手术结束时鱼精蛋白逆转后（T3）和术后第一天（T4）采集血样，测定血清IGF-1、IL-10水平和亲BNP。 采血后1小时内将血样以2500rpm离心15分钟，血清-20℃保存备用。

酶联免疫吸附试验 IL-10 的浓度通过定量 ELISA 试剂盒测量。 IGF-1的浓度通过定量ELISA试剂盒测量。

血清维生素D的检测采用高效液相色谱法。 使用市售的双位点化学发光免疫测定法进行 pro BNP 测量。

免疫组织化学研究 免疫组织化学染色在 5 微米厚的切片上进行。 将载玻片在 37°C 下孵育 24 小时，并在预热的二甲苯中脱石蜡，并通过降级酒精再水化，在蒸馏水中洗涤。 热诱导抗原修复通过微波炉完成，柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）用于抗 caspase-7 和乙二胺四乙酸；用于抗 caspase-2 和 3 的缓冲溶液 (Tris-EDTA) (pH = 8)。通过在切片上添加过氧化氢来阻断内过氧化物酶。 然后加入蛋白质块 5 分钟，用 Tris 缓冲盐水 (TBS) 清洗载玻片。 一抗为抗caspase-2抗体、兔单抗、抗caspase-3抗体、兔单抗、抗caspase-7抗体、鼠单抗（clone 7-1-11,abcam） 30 分钟，用 TBS 洗涤。 使用小鼠和兔特异性辣根过氧化物酶/二氨基联苯胺 (HRP/DAB) 免疫组织化学 (IHC) 检测微聚合物试剂盒孵育 15 分钟，然后用三缓冲盐水 (TBS) 清洗。 添加二氨基联苯胺 (DAB) 色原并保持 5 分钟。 载玻片在蒸馏水中洗涤并用苏木精复染。 含有淋巴结组织的切片用作阳性对照。 阴性对照包括用磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 代替的一抗。 检查免疫染色切片的抗 caspase-2、抗 caspase-3 和抗 caspase-7 的细胞质表达。 计算每个高倍场 (HPF) (X 400) 的免疫反应细胞数。 为此，至少对 10 个 HPF 进行了评估，并记录了阳性细胞的平均值。

样本量和统计方法 患者数量（每组 30 名患者）的确定是基于之前调查 CABG 环境中 caspase 活性的试验。

分类变量报告为数字和百分比，而平均值±标准偏差表示为连续变量。 方差分析的重复测量和使用 Bonferroni 校正（I 型错误校正）的多重比较被用于评估组间测量的炎症标志物随时间的变化。 进行了 Kolmogorov-Smirnov 正态性检验。 连续变量和分类变量分别使用学生 t 检验（或符合异常分布的 Mann-Whitney 检验）和卡方进行比较。 所有统计分析均使用 SPSS 23 版（SPSS，芝加哥，伊利诺伊州，美国）进行。 p值<0.05被认为是显着的。