La vitamine D peut-elle réduire les dommages au muscle cardiaque après un pontage?

Les inscriptions ont commencé en juin 2018 et se sont terminées en décembre 2018. Les critères d'inclusion étaient les suivants : les patients référés pour un pontage coronarien (PAC) électif et isolé par pontage cardiopulmonaire (PCB) avec une carence en vitamine D (définie comme 25-hydroxyvitamine D [25(OH) D] < 20 ng/mL ) et une fonction rénale normale (créatinine <1,5 mg/dL). Les critères d'exclusion étaient : un infarctus du myocarde récent, un PAC urgent, une chirurgie coronarienne non isolée, une nouvelle intervention chirurgicale, une maladie maligne, la présence de maladies inflammatoires aiguës ou chroniques, des antécédents de traitement à la vitamine D au cours des 6 mois précédents ou le refus de participer.

Intervention Après consentement éclairé, les participants éligibles à l'étude ont été répartis au hasard (en utilisant un code aléatoire généré par ordinateur) dans un rapport 1:1 pour recevoir soit un placebo, soit un total de 450 000 unités internationales (UI) de vitamine D3 (trois doses de 50 000 UI de vitamine D3 comprimé tous les jours pendant 3 jours) avant l'opération. Le groupe placebo a reçu trois comprimés de médicament inactif par jour au même moment. À l'exception des pharmaciens, tous les investigateurs, les patients et l'équipe médicale ont été aveuglés à l'attribution du groupe.

Un pontage coronarien a été réalisé dans les lésions coupables pour les deux groupes par une seule équipe chirurgicale. Le protocole standard d'anesthésie générale, de prise en charge chirurgicale et de CPB a été réalisé pour tous les patients et a déjà été décrit en détail [16].

Mesures des résultats Le critère de jugement principal était le degré d'apoptose cardiaque par la mesure de l'activité des caspases 2, 3 et 7 à partir d'un échantillon auriculaire droit avec coloration immunohistochimique, et le taux sérique d'interleukine-10 anti-inflammatoire (IL-10) et de croissance analogue à l'insuline. (IGF-1) et le peptide natriurétique cérébral de type pro v N-terminal (nt-pro BNP). La biopsie de l'appendice auriculaire droit a été réalisée en fin d'intervention après retrait de la canule veineuse de manière non traumatique, conservée dans du formol et en moins de 24h parafinisée. Des échantillons de sang ont été prélevés au départ (T1), avant l'induction de l'anesthésie (T2), à la fin de la chirurgie après l'inversion de la protamine (T3) et le premier jour postopératoire (T4) pour mesurer le taux sérique d'IGF-1, IL-10 et pro BNP. Les échantillons de sang ont été centrifugés à 2500 tr/min pendant 15 minutes dans l'heure suivant le prélèvement sanguin, et le sérum a été stocké à -20°C jusqu'au dosage.

Dosage immuno-enzymatique La concentration d'IL-10 a été mesurée par un kit ELISA quantitatif. La concentration de l'IGF-1 a été mesurée par un kit ELISA quantitatif.

La vitamine D sérique a été détectée en utilisant la méthode de chromatographie liquide à haute performance. La mesure du pro BNP a été effectuée à l'aide d'un test immunométrique chimiluminescent à deux sites disponible dans le commerce .

Etudes immunohistochimiques La coloration immunohistochimique a été réalisée sur des coupes de 5 micromètres d'épaisseur. Les lames ont été incubées à 37°C pendant 24 heures et déparaffinées dans du xylène préchauffé et réhydratées par des degrés décroissants d'alcool, lavées dans de l'eau distillée. La récupération d'antigène induite par la chaleur a été effectuée au four à micro-ondes avec un tampon citrate (pH 6,0) pour l'anti-caspase-7 et l'acide éthylènediamine tétraacétique; solution tamponnée (Tris-EDTA) (pH = 8) pour les anti-caspase-2 et 3. Le blocage de l'endoperoxydase a été effectué en ajoutant du peroxyde d'hydrogène sur les coupes. Le bloc protéique a ensuite été ajouté pendant 5 minutes, les lames ont été lavées dans du Tris-Buffered Saline (TBS). .L'anticorps primaire comme anticorps anti-caspase-2, monoclonal de lapin, anticorps anti-caspase-3, monoclonal de lapin, anticorps anti-caspase-7 et anticorps monoclonal de souris (clone 7-1-11, abcam) ont été ajoutés et conservés pendant 30 minutes, lavé au TBS. Un kit de micropolymère de détection immunohistochimique (IHC) spécifique à la peroxydase de raifort / diaminobenzidine (HRP / DAB) pour souris et lapin a été utilisé et incubé pendant 15 minutes, puis lavé avec une solution saline tamponnée au tris (TBS). Le chromogène diaminobenzidine (DAB) a été ajouté et maintenu pendant 5 minutes. Lames lavées à l'eau distillée et contre-colorées à l'hématoxyline. Des sections contenant du tissu de ganglion lymphatique ont été utilisées comme contrôle positif. Le contrôle négatif comprenait un anticorps primaire remplacé par une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). Les sections immunocolorées ont été examinées pour l'expression cytoplasmique de l'anti-caspase-2, de l'anti-caspase-3 et de l'anti-caspase-7. Le nombre de cellules immuno-réactives par champ de haute puissance (HPF) (X 400) a été compté. A cette fin, au moins 10 HPF ont été évalués et la moyenne des cellules positives a été enregistrée.

Taille de l'échantillon et méthodes statistiques La détermination du nombre de patients (30 patients par groupe) était basée sur des essais antérieurs portant sur l'activité de la caspase dans le cadre d'un PAC .

Les variables catégorielles ont été rapportées sous forme de nombres et de pourcentages, tandis que la moyenne ± écart-type a été exprimée pour les variables continues. Des mesures répétées d'analyse de variance et de comparaisons multiples utilisant la correction de Bonferroni (correction d'erreur de type I) ont été appliquées pour évaluer le changement des marqueurs inflammatoires mesurés entre les groupes au fil du temps. Le test de normalité de Kolmogorov-Smirnov a été réalisé. Les variables continues et les variables catégorielles ont été comparées entre les groupes à l'aide du test t de Student (ou du test de Mann-Whitney pour ceux qui répondent à une distribution anormale) et du chi carré, respectivement. Toutes les analyses statistiques ont été réalisées à l'aide de SPSS version 23 (SPSS, Chicago, IL, USA). Une valeur de p <0,05 était considérée comme significative.