Kan vitamine D schade aan de hartspier verminderen na een bypassoperatie?

Inschrijving begon in juni 2018 en werd afgerond in december 2018. De inclusiecriteria waren als volgt: de patiënten verwezen voor electieve en geïsoleerde coronaire bypass-transplantaten (CABG) met behulp van cardiopulmonale bypass (CPB) met vitamine D-deficiëntie (gedefinieerd als 25-hydroxyvitamine D [25(OH) D] < 20 ng/ml ) en normale nierfunctie (creatinine <1,5 mg/dL). De uitsluitingscriteria waren: recent myocardinfarct, urgente CABG, niet-geïsoleerde coronaire chirurgie, heroperatie, kwaadaardige ziekte, aanwezigheid van acute of chronische ontstekingsziekten, voorgeschiedenis van vitamine D-behandeling in de afgelopen 6 maanden, of onwil om deel te nemen.

Interventie Na geïnformeerde toestemming werden in aanmerking komende studiedeelnemers willekeurig toegewezen (met behulp van een computergegenereerde willekeurige code) in een verhouding van 1:1 om ofwel een placebo ofwel een totaal van 450.000 internationale eenheden (IE) vitamine D3 (drie 50.000 IE vitamine D3) te krijgen. tablet per dag gedurende 3 dagen) voor de operatie. De placebogroep kreeg dagelijks drie inactieve medicatietabletten op hetzelfde tijdstip. Met uitzondering van de apothekers waren alle onderzoekers, patiënten en het medische team blind voor de groepsindeling.

Bij beide groepen werd door één chirurgisch team een ​​bypass van de kransslagader uitgevoerd in de laesies van de boosdoener. Het standaardprotocol voor algehele anesthesie, chirurgische behandeling en CPB-behandeling is voor alle patiënten uitgevoerd en is al in detail beschreven [16].

Uitkomstmaten De primaire uitkomstmaat was de mate van apoptose van het hart door meting van caspase 2, 3 en 7 activiteit van rechter atriummonster met immunohistochemische kleuring, en het serumgehalte van ontstekingsremmend interleukine-10 (IL-10) en insulineachtige groei. factor (IGF-1), en N-terminaal pro v-type Brain Natriuretic Peptide (nt-pro BNP). De biopsie van het rechter atrium aneurysma werd genomen aan het einde van de operatie na verwijdering van de veneuze canule op een niet-traumatische manier, bewaard in formaline en in minder dan 24 uur geparaffineerd. Bloedmonsters werden verzameld bij de basislijn (T1), vóór anesthesie-inductie (T2), aan het einde van de operatie na protamine-omkering (T3) en de eerste postoperatieve dag (T4) om het serumniveau van IGF-1, IL-10 te meten en voor BNP. De bloedmonsters werden gecentrifugeerd bij 2500 rpm gedurende 15 minuten binnen een uur na bloedafname, en het serum werd bewaard bij -20°C totdat het werd getest.

Enzym-linked immunosorbent assay De concentratie van IL-10 werd gemeten met een kwantitatieve ELISA-kit. De concentratie van de IGF-1 werd gemeten met een kwantitatieve ELISA-kit.

Serum vitamine D werd gedetecteerd met behulp van de high performance liquid chromatography-methode. De pro-BNP-meting werd uitgevoerd met behulp van een in de handel verkrijgbare chemiluminescente immunometrische test op twee plaatsen.

Immunohistochemie-onderzoeken Immunohistochemische kleuring werd uitgevoerd op secties met een dikte van 5 micrometer. De objectglaasjes werden 24 uur bij 37°C geïncubeerd en van paraffine ontdaan in voorverwarmd xyleen en opnieuw gehydrateerd door middel van afnemende alcoholgraden, gewassen in gedestilleerd water. Door warmte geïnduceerde antigeenterugwinning werd gedaan door een magnetron met citraatbuffer (pH 6,0) voor anti-caspase-7 en ethyleendiaminetetraazijnzuur; gebufferde oplossing (Tris-EDTA) (pH=8) voor anti-caspase-2 en 3. endoperoxidase-blokkering werd gedaan door waterstofperoxide op de coupes toe te voegen. Het eiwitblok werd vervolgens gedurende 5 minuten toegevoegd, objectglaasjes werden gewassen in Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS). Het primaire antilichaam als anti-caspase-2-antilichaam, monoklonaal konijn, anti-caspase-3-antilichaam, monoklonaal konijn, anti-caspase-7-antilichaam en monoklonaal muisantilichaam (kloon 7-1-11, abcam) werden toegevoegd en bewaard gedurende 30 minuten, gewassen in TBS. Muis en konijn Specifieke mierikswortelperoxidase/diaminobenzidine (HRP/DAB) immunohistochemie (IHC) Detectie Micropolymeerkit werd gebruikt en gedurende 15 minuten geïncubeerd en daarna gewassen met tris-gebufferde zoutoplossing (TBS). Diaminobenzidine (DAB) chromogeen werd toegevoegd en gedurende 5 minuten bewaard. Objectglaasjes gewassen in gedestilleerd water en tegengekleurd met hematoxyline. Secties met lymfeklierweefsel werden gebruikt als positieve controle. Negatieve controle omvatte primair antilichaam vervangen door fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). Immunogekleurde secties werden beoordeeld op cytoplasmatische expressie van anti-caspase-2, anti-caspase-3 en anti-caspase-7. Het aantal immuunreactieve cellen per High Power Field (HPF) (X 400) werd geteld. Hiervoor werden ten minste 10 HPF beoordeeld en werd het gemiddelde aantal positieve cellen genoteerd.

Steekproefomvang en statistische methoden De bepaling van het aantal patiënten (30 patiënten per groep) was gebaseerd op eerdere onderzoeken waarin de caspase-activiteit in de CABG-setting werd onderzocht.

Categorische variabelen werden gerapporteerd als getallen en percentages, terwijl gemiddelde ± standaarddeviatie werd uitgedrukt voor continue variabelen. Herhaalde metingen van variantieanalyse en meervoudige vergelijkingen met behulp van de Bonferroni-correctie (type I-foutcorrectie) werden toegepast voor het evalueren van de verandering van gemeten ontstekingsmarkers tussen de groepen in de loop van de tijd. De Kolmogorov-Smirnov-test voor normaliteit werd uitgevoerd. Continue variabelen en categorische variabelen werden tussen groepen vergeleken met behulp van respectievelijk de Student's t-test (of Mann-Whitney-test voor diegenen die aan een abnormale verdeling voldoen) en Chi-kwadraat. Alle statistische analyses zijn uitgevoerd met behulp van SPSS versie 23 (SPSS, Chicago, IL, VS). Een p-waarde <0,05 werd als significant beschouwd.