A vitamina D pode reduzir os danos ao músculo cardíaco após a cirurgia de bypass?

As inscrições começaram em junho de 2018 e foram concluídas em dezembro de 2018. Os critérios de inclusão foram os seguintes: os pacientes encaminhados para cirurgia de revascularização miocárdica eletiva e isolada (CEC) com deficiência de vitamina D (definida como 25-hidroxivitamina D [25(OH) D] < 20 ng/mL ) e função renal normal (creatinina <1,5mg/dL). Os critérios de exclusão foram: infarto do miocárdio recente, revascularização miocárdica urgente, cirurgia coronária não isolada, refazer cirurgia, doença maligna, presença de doenças inflamatórias agudas ou crônicas, história de tratamento com vitamina D nos últimos 6 meses ou falta de vontade de participar.

Intervenção Após o consentimento informado, os participantes elegíveis do estudo foram designados aleatoriamente (usando um código aleatório gerado por computador) em uma proporção de 1:1 para receber placebo ou um total de 450.000 unidades internacionais (UI) de vitamina D3 (três 50.000 UI de vitamina D3 comprimido diariamente por 3 dias) antes da operação. O grupo placebo recebeu três comprimidos de medicação inativa diariamente no mesmo ponto de tempo. Com exceção dos farmacêuticos, todos os investigadores, pacientes e equipe médica desconheciam a alocação dos grupos.

O bypass da artéria coronária foi feito nas lesões culpadas para ambos os grupos por uma equipe cirúrgica. O protocolo padrão para anestesia geral, manejo cirúrgico e CEC foi realizado para todos os pacientes e já foi descrito em detalhes [16].

Medidas de desfecho O desfecho primário foi o grau de apoptose cardíaca pela medição da atividade das caspases 2, 3 e 7 da amostra do átrio direito com coloração imuno-histoquímica e o nível sérico de antiinflamatório interleucina-10 (IL-10) e crescimento semelhante à insulina fator (IGF-1) e Peptídeo Natriurético Cerebral tipo V N-terminal (nt-pro BNP). A biópsia do apêndice atrial direito foi realizada no final da cirurgia após a retirada da cânula venosa de forma atraumática, mantida em formol e em menos de 24h parafinada. Amostras de sangue foram coletadas no início (T1), antes da indução da anestesia (T2), no final da cirurgia após a reversão da protamina (T3) e no primeiro dia pós-operatório (T4) para medir o nível sérico de IGF-1, IL-10 e pro BNP. As amostras de sangue foram centrifugadas a 2500 rpm por 15 minutos dentro de uma hora após a coleta de sangue, e o soro foi armazenado a -20°C até ser analisado.

Ensaio imunossorvente ligado a enzima A concentração de IL-10 foi medida por um kit de ELISA quantitativo. A concentração do IGF-1 foi medida por um kit de ELISA quantitativo.

A vitamina D sérica foi detectada pelo método de cromatografia líquida de alta eficiência. A medição do pro BNP foi feita usando um ensaio imunométrico quimioluminescente de dois locais disponível comercialmente.

Estudos de imuno-histoquímica A coloração imuno-histoquímica foi realizada em cortes de 5 micrômetros de espessura. As lâminas foram incubadas a 37°C por 24 horas e desparafinadas em xilol pré-aquecido e reidratadas em graus decrescentes de álcool, lavadas em água destilada. A recuperação antigênica induzida por calor foi realizada em forno de micro-ondas com tampão citrato (pH 6,0) para anti-caspase-7 e Ácido Etilenodiamino Tetraacético; solução tamponada (Tris-EDTA) (pH=8) para anti-caspase-2 e 3. O bloqueio da endoperoxidase foi feito pela adição de peróxido de hidrogênio nos cortes. O bloco de proteína foi então adicionado por 5 minutos, as lâminas foram lavadas em solução salina tamponada com Tris (TBS). . O anticorpo primário como anticorpo anti-caspase-2, anticorpo monoclonal de coelho, anticorpo anti-caspase-3, anticorpo monoclonal de coelho, anticorpo anti-caspase-7 e anticorpo monoclonal de camundongo (clone 7-1-11, abcam) foram adicionados e mantidos por 30 minutos, lavado em TBS. Peroxidase de rábano específico de camundongo e coelho/Diaminobenzidina (HRP/DAB) imuno-histoquímica (IHC) Detecção O kit de micropolímeros foi usado e incubado por 15 minutos, em seguida, lavado com solução salina tamponada com tris (TBS). O cromógeno diaminobenzidina (DAB) foi adicionado e mantido por 5 minutos. Lâminas lavadas em água destilada e contracoradas com hematoxilina. Seções contendo tecido linfonodal foram usadas como controle positivo. O controle negativo incluiu anticorpo primário substituído por solução salina tamponada com fosfato (PBS). As seções imunocoradas foram revisadas quanto à expressão citoplasmática de anti-caspase-2, anti-caspase-3 e anti-caspase-7. O número de células imunorreativas por campo de alta potência (HPF) (X 400) foi contado. Para este propósito, pelo menos 10 HPF foram avaliados e a média de células positivas foi registrada.

Tamanho da amostra e métodos estatísticos A determinação do número de pacientes (30 pacientes por grupo) foi baseada em estudos anteriores que investigaram a atividade da caspase no ambiente de CABG.

Variáveis ​​categóricas foram relatadas como números e porcentagens, enquanto média±desvio padrão foi expressa para variáveis ​​contínuas. Medidas repetidas de análise de variância e comparações múltiplas usando a correção de Bonferroni (correção de erro tipo I) foram aplicadas para avaliar a mudança dos marcadores inflamatórios medidos entre os grupos ao longo do tempo. O teste de Kolmogorov-Smirnov para normalidade foi realizado. Variáveis ​​contínuas e variáveis ​​categóricas foram comparadas entre os grupos usando o teste t de Student (ou teste de Mann-Whitney para aqueles com distribuição anormal) e Qui-quadrado, respectivamente. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando SPSS versão 23 (SPSS, Chicago, IL, EUA). Valores de p < 0,05 foram considerados significativos.