Může vitamín D snížit poškození srdečního svalu po operaci bypassu?

Registrace začala v červnu 2018 a byla dokončena v prosinci 2018. Kritéria pro zařazení byla následující: pacienti doporučení pro elektivní a izolovaný bypass koronární artérie (CABG) s použitím kardiopulmonálního bypassu (CPB) s nedostatkem vitaminu D (definovaného jako 25-hydroxyvitamin D [25(OH) D] < 20 ng/ml ) a normální funkci ledvin (kreatinin <1,5 mg/dl). Kritéria pro vyloučení byla: nedávný infarkt myokardu, urgentní CABG, neizolovaná koronární operace, opakovaná operace, maligní onemocnění, přítomnost akutních nebo chronických zánětlivých onemocnění, anamnéza léčby vitaminem D během předchozích 6 měsíců nebo neochota se zúčastnit.

Intervence Po informovaném souhlasu byli způsobilí účastníci studie náhodně rozděleni (pomocí počítačem generovaného náhodného kódu) v poměru 1:1, aby dostali buď placebo, nebo celkem 450 000 mezinárodních jednotek (IU) vitaminu D3 (tři 50 000 IU vitaminu D3 tabletu denně po dobu 3 dnů) před operací. Skupina s placebem dostávala tři tablety neaktivní medikace denně ve stejnou dobu. S výjimkou lékárníků byli všichni vyšetřovatelé, pacienti a lékařský tým zaslepeni před rozdělením skupin.

U lézí viníka pro obě skupiny byl proveden bypass koronární tepny jedním chirurgickým týmem. U všech pacientů byl proveden standardní protokol pro celkovou anestezii, chirurgický zákrok a léčbu CPB a byl již podrobně popsán [16].

Měření výsledku Primárním výsledkem byl stupeň srdeční apoptózy měřením aktivity kaspázy 2, 3 a 7 ze vzorku z pravé síně s imunohistochemickým barvením a sérová hladina protizánětlivého interleukinu-10 (IL-10) a růstu podobného inzulínu faktor (IGF-1) a N-terminální pro v-typ mozkový natriuretický peptid (nt-pro BNP). Biopsie z ouška pravé síně byla odebrána na konci operace po odstranění žilní kanyly netraumatickým způsobem, ponechána ve formalínu a za méně než 24 hodin parafinizována. Vzorky krve byly odebírány na začátku (T1), před indukcí anestezie (T2), na konci operace po reverzi protaminu (T3) a první pooperační den (T4) k měření sérové ​​hladiny IGF-1, IL-10 a pro BNP. Vzorky krve byly centrifugovány při 2500 otáčkách za minutu po dobu 15 minut během jedné hodiny po odběru krve a sérum bylo skladováno při -20 °C až do testování.

Enzymově vázaný imunosorbentní test Koncentrace IL-10 byla měřena pomocí kvantitativní ELISA soupravy. Koncentrace IGF-1 byla měřena pomocí kvantitativní ELISA soupravy.

Sérový vitamin D byl detekován metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Měření pro BNP bylo provedeno pomocí komerčně dostupného dvoumístného chemiluminiscenčního imunometrického testu.

Imunohistochemické studie Imunohistochemické barvení bylo provedeno na řezech o tloušťce 5 mikrometrů. Sklíčka byla inkubována při 37 °C po dobu 24 hodin a zbavena parafinu v předehřátém xylenu a rehydratována alkoholem sestupným stupněm kvality, promyta v destilované vodě. Tepelně indukované získávání antigenu bylo provedeno v mikrovlnné troubě s citrátovým pufrem (pH 6,0) pro anti-kaspázu-7 a kyselinu ethylendiamintetraoctovou; pufrovaný roztok (Tris-EDTA) (pH=8) pro anti-kaspázu-2 a 3. blokování endoperoxidázy bylo provedeno přidáním peroxidu vodíku na řezy. Poté byl na 5 minut přidán proteinový blok, sklíčka byla promyta v Tris-pufrovaném fyziologickém roztoku (TBS). Primární protilátka jako protilátka proti kaspáze-2, králičí monoklonální protilátka, protilátka proti kaspáze-3, králičí monoklonální protilátka, protilátka proti kaspáze-7 a myší monoklonální protilátka (klon 7-1-11, abcam) byly přidány a uchovány. po dobu 30 minut, promyta v TBS. Byla použita specifická detekční mikropolymerní souprava pro myši a králíka křenová peroxidáza/diaminobenzidin (HRP/DAB) (IHC), inkubována po dobu 15 minut a poté promyta tris-pufrovaným fyziologickým roztokem (TBS). Byl přidán diaminobenzidinový (DAB) chromogen a udržován po dobu 5 minut. Sklíčka se promyla v destilované vodě a kontrastně se obarvila hematoxylinem. Řezy obsahující tkáň lymfatických uzlin byly použity jako pozitivní kontrola. Negativní kontrola zahrnovala primární protilátku nahrazenou fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem (PBS). Imunobarvené řezy byly přezkoumány na cytoplazmatickou expresi anti-kaspázy-2, anti-kaspázy-3 a anti-kaspázy-7. Byl spočítán počet imunitně reaktivních buněk na High Power Field (HPF) (X 400). Za tímto účelem bylo hodnoceno alespoň 10 HPF a byl zaznamenán průměr pozitivních buněk.

Velikost vzorku a statistické metody Stanovení počtu pacientů (30 pacientů na skupinu) bylo založeno na předchozích studiích zkoumajících aktivitu kaspázy v podmínkách CABG.

Kategorické proměnné byly uvedeny jako čísla a procenta, zatímco průměr ± standardní odchylka byla vyjádřena pro spojité proměnné. Opakovaná měření analýzy rozptylu a vícenásobná srovnání pomocí Bonferroniho korekce (korekce chyby typu I) byla použita pro hodnocení změny naměřených zánětlivých markerů mezi skupinami v čase. Byl proveden Kolmogorov-Smirnovův test normality. Spojité proměnné a kategorické proměnné byly porovnány mezi skupinami pomocí Studentova t testu (nebo Mann-Whitneyho testu pro ty, kteří splňují abnormální distribuci) a chí-kvadrát, v daném pořadí. Všechny statistické analýzy byly provedeny pomocí SPSS verze 23 (SPSS, Chicago, IL, USA). Hodnoty p <0,05 byly považovány za významné.