Voiko D-vitamiini vähentää sydänlihasvaurioita ohitusleikkauksen jälkeen?

Ilmoittautuminen alkoi kesäkuussa 2018 ja päättyi joulukuussa 2018. Osallistumiskriteerit olivat seuraavat: potilaat lähetettiin elektiiviseen ja eristettyyn sepelvaltimon ohitussiirteeseen (CABG) käyttäen Cardiopulmonary Bypass (CPB) D-vitamiinin puutetta (määritelty 25-hydroksi-D-vitamiiniksi [25(OH) D] < 20 ng/ml ) ja normaali munuaisten toiminta (kreatiniini < 1,5 mg/dl). Poissulkemiskriteerit olivat: äskettäinen sydäninfarkti, kiireellinen CABG, eristämätön sepelvaltimon leikkaus, uusintaleikkaus, pahanlaatuinen sairaus, akuuttien tai kroonisten tulehdussairauksien esiintyminen, D-vitamiinihoito edellisen 6 kuukauden aikana tai haluttomuus osallistua.

Interventio Tietoisen suostumuksen jälkeen kelvolliset tutkimuksen osallistujat jaettiin satunnaisesti (käyttäen tietokoneella tuotettua satunnaiskoodia) suhteessa 1:1 saamaan joko lumelääkettä tai yhteensä 450 000 kansainvälistä yksikköä (IU) D3-vitamiinia (kolme 50 000 IU D3-vitamiinia). tabletti päivittäin 3 päivän ajan) ennen leikkausta. Lumeryhmä sai kolme inaktiivista lääketablettia päivittäin samaan aikaan. Apteekkeja lukuun ottamatta kaikki tutkijat, potilaat ja lääkintäryhmä olivat sokeutuneet ryhmäjakoon.

Sepelvaltimoiden ohitus tehtiin molemmille ryhmille yksi kirurginen ryhmä. Yleisanestesian, kirurgisen ja CPB-hoidon standardiprotokolla suoritettiin kaikille potilaille, ja ne on jo kuvattu yksityiskohtaisesti [16].

Tulosmittaukset Ensisijainen tulos oli sydämen apoptoosin aste mittaamalla kaspaasi 2, 3 ja 7 aktiivisuus oikean eteisen näytteestä immunohistokemiallisella värjäyksellä sekä seerumin anti-inflammatorisen interleukiini-10 (IL-10) ja insuliinin kaltaisen kasvun taso. tekijä (IGF-1) ja N-terminaalinen pro v-tyypin Brain Natriuretic Peptide (nt-pro BNP). Biopsia oikean eteisen lisäosasta otettiin leikkauksen lopussa laskimokanyylin poiston jälkeen ei-traumaattisesti, pidettiin formaliinissa ja parafinisoitiin alle 24 tunnissa. Verinäytteet otettiin lähtötilanteessa (T1), ennen anestesian induktiota (T2), leikkauksen lopussa protamiinin palautumisen jälkeen (T3) ja ensimmäisenä leikkauksen jälkeisenä päivänä (T4) seerumin IGF-1- ja IL-10-tason mittaamiseksi. ja pro BNP. Verinäytteitä sentrifugoitiin nopeudella 2500 rpm 15 minuuttia yhden tunnin sisällä verinäytteen ottamisen jälkeen, ja seerumia säilytettiin -20 °C:ssa määritykseen asti.

Entsyymi-immunosorbenttimääritys IL-10:n konsentraatio mitattiin kvantitatiivisella ELISA-kitillä. IGF-1:n pitoisuus mitattiin kvantitatiivisella ELISA-sarjalla.

Seerumin D-vitamiini havaittiin käyttämällä korkean erotuskyvyn nestekromatografiamenetelmää. Pro BNP -mittaus tehtiin käyttämällä kaupallisesti saatavilla olevaa kahden paikan kemiluminesenssi-immunometristä määritystä.

Immunohistokemialliset tutkimukset Immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin 5 mikrometrin paksuisille leikkeille. Objektilaseja inkuboitiin 37 °C:ssa 24 tuntia ja niistä poistettiin parafiini esilämmitetyssä ksyleenissä ja hydratoitiin uudelleen laskevien alkoholilaatujen läpi, pestiin tislatulla vedellä. Lämmön aiheuttama antigeenin haku tehtiin mikroaaltouunissa sitraattipuskurilla (pH 6,0) anti-kaspaasi-7:lle ja etyleenidiamiinitetraetikkahapolle; puskuroitu liuos (Tris-EDTA) (pH=8) anti-kaspaasi-2:n ja 3. endoperoksidaasin estoon tehtiin lisäämällä leikkeille vetyperoksidia. Proteiiniblokki lisättiin sitten 5 minuutiksi, objektilasit pestiin Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa (TBS). .Primäärinen vasta-aine anti-kaspaasi-2-vasta-aineena, kanin monoklonaalinen, anti-kaspaasi-3-vasta-aine, kanin monoklonaalinen, anti-kaspaasi-7-vasta-aine ja hiiren monoklonaalinen (klooni 7-1-11, abcam) vasta-aine lisättiin ja säilytettiin 30 minuuttia, pestiin TBS:ssä. Käytettiin hiirelle ja kanille spesifistä piparjuuriperoksidaasin/diaminobentsidiinin (HRP/DAB) immunohistokemian (IHC) tunnistusmikropolymeerisarjaa ja inkuboitiin 15 minuuttia ja pestiin sitten tris-puskuroidulla suolaliuoksella (TBS). Diaminobentsidiinin (DAB) kromogeeni lisättiin ja pidettiin 5 minuuttia. Objektilasit pesty tislatulla vedellä ja vastavärjätty hematoksyliinilla. Positiivisena kontrollina käytettiin leikkeitä, jotka sisälsivät imusolmukekudosta. Negatiivinen kontrolli sisälsi primaarisen vasta-aineen, joka korvattiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS). Immunovärjätyt leikkeet tarkasteltiin anti-kaspaasi-2:n, anti-kaspaasi-3:n ja anti-kaspaasi-7:n sytoplasmisen ilmentymisen suhteen. Immuunireaktiivisten solujen lukumäärä High Power Field (HPF) -kenttää (X 400) kohti laskettiin. Tätä tarkoitusta varten arvioitiin vähintään 10 HPF:ää ja positiivisten solujen keskiarvo kirjattiin.

Otoskoko ja tilastolliset menetelmät Potilasmäärän määritys (30 potilasta ryhmää kohden) perustui aikaisempiin kokeisiin, joissa tutkittiin kaspaasiaktiivisuutta CABG-asetuksessa.

Kategoriset muuttujat ilmoitettiin numeroina ja prosentteina, kun taas jatkuvien muuttujien keskiarvo ± keskihajonta ilmaistiin. Toistuvia varianssianalyysimittauksia ja moninkertaisia ​​vertailuja käyttäen Bonferroni-korjausta (tyypin I virhekorjaus) sovellettiin arvioitaessa mitattujen tulehdusmarkkerien muutosta ryhmien välillä ajan kuluessa. Suoritettiin Kolmogorov-Smirnovin normaalitesti. Jatkuvia muuttujia ja kategorisia muuttujia verrattiin ryhmien välillä käyttäen Studentin t-testiä (tai Mann-Whitney-testiä niille, jotka kohtaavat epänormaalin jakauman) ja Chi-neliötä, vastaavasti. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttämällä SPSS-versiota 23 (SPSS, Chicago, IL, USA). A p-arvot <0,05 katsottiin merkitseviksi.