Kan D-vitamin reducere hjertemuskelskader efter bypass-operation?

Tilmeldingen startede i juni 2018 og blev afsluttet i december 2018. Inklusionskriterierne var som følger: patienterne henvist til elektiv og isoleret koronararterie bypassgraft (CABG) ved brug af Cardiopulmonary Bypass (CPB) med D-vitaminmangel (defineret som 25-hydroxyvitamin D [25(OH) D] < 20 ng/ml ) og normal nyrefunktion (kreatinin <1,5 mg/dL). Eksklusionskriterierne var: nyligt myokardieinfarkt, akut CABG, ikke-isoleret koronarkirurgi, genoperation, malign sygdom, tilstedeværelse af akutte eller kroniske inflammatoriske sygdomme, historie med D-vitaminbehandling inden for de foregående 6 måneder eller manglende vilje til at deltage.

Intervention Efter informeret samtykke blev kvalificerede undersøgelsesdeltagere tilfældigt tildelt (ved at bruge en computergenereret tilfældig kode) i et 1:1-forhold til at modtage enten placebo eller i alt 450.000 internationale enheder (IE) vitamin D3 (tre 50.000 IE vitamin D3 tablet dagligt i 3 dage) før operation. Placebogruppen modtog tre inaktive medicintabletter dagligt på samme tidspunkt. Med undtagelse af farmaceuterne var alle efterforskere, patienter og det medicinske team blindet for gruppetildelingen.

Koronararterie-bypass blev udført i de skyldige læsioner for begge grupper af et kirurgisk team. Standardprotokollen for generel anæstesi, kirurgisk og CPB-behandling blev udført for alle patienter og er allerede blevet beskrevet i detaljer [16].

Resultatmål Det primære resultat var graden af ​​hjerteapoptose ved måling af caspase 2, 3 og 7 aktivitet fra højre atrieprøve med immunhistokemi farvning og serumniveauet af anti-inflammatorisk interleukin-10 (IL-10) og insulinlignende vækst faktor (IGF-1) og N-terminal pro v-type hjernenatriuretisk peptid (nt-pro BNP). Biopsien fra højre atriel vedhæng blev taget i slutningen af ​​operationen efter fjernelse af venøs kanyle på en ikke-traumatisk måde, opbevaret i formalin og i mindre end 24 timer parafiniseret. Blodprøver blev indsamlet ved baseline (T1), før anæstesi-induktion (T2), ved slutningen af ​​operationen efter protamin-reversering (T3) og den første postoperative dag (T4) for at måle serumniveauet af IGF-1, IL-10 og pro BNP. Blodprøverne blev centrifugeret ved 2500 rpm i 15 minutter inden for en time efter blodprøvetagning, og serumet blev opbevaret ved -20°C, indtil det blev analyseret.

Enzym-linked immunosorbent assay Koncentrationen af ​​IL-10 blev målt med et kvantitativt ELISA-kit. Koncentrationen af ​​IGF-1 blev målt med et kvantitativt ELISA-kit.

Serum D-vitamin blev påvist ved hjælp af højtydende væskekromatografimetoden. Pro BNP-målingen blev udført ved hjælp af et kommercielt tilgængeligt to-site kemiluminescerende immunometrisk assay.

Immunhistokemiske undersøgelser Immunhistokemisk farvning blev udført på 5 mikrometer tykke snit. Objektglassene blev inkuberet ved 37°C i 24 timer og afparaffiniseret i forvarmet xylen og rehydreret gennem faldende alkoholkvaliteter, vasket i destilleret vand. Varmeinduceret antigenudvinding blev udført i mikrobølgeovn med citratbuffer (pH 6,0) for anti-caspase-7 og ethylendiamintetraeddikesyre; bufret opløsning (Tris-EDTA) (pH=8) til anti-caspase-2 og 3. endoperoxidaseblokering blev udført ved at tilsætte hydrogenperoxid på sektionerne. Proteinblokken blev derefter tilsat i 5 minutter, objektglassene blev vasket i Tris-bufret saltvand (TBS). Det primære antistof som anti-caspase-2 antistof, kanin monoklonalt, anti-caspase-3 antistof, kanin monoklonalt, anti-caspase-7 antistof og muse monoklonalt (klon 7-1-11, abcam) antistof blev tilføjet og opbevaret i 30 minutter, vasket i TBS. Mus og kanin Specifik peberrodsperoxidase/diaminobenzidin (HRP/DAB) immunhistokemi (IHC) detektionsmikropolymerkit blev brugt og inkuberet i 15 minutter og derefter vasket med tris-bufret saltvand (TBS). Diaminobenzidin (DAB)-chromogen blev tilsat og holdt i 5 minutter. Objektglas vasket i destilleret vand og modfarvet med hæmatoxylin. Sektioner indeholdende lymfeknudevæv blev anvendt som positiv kontrol. Negativ kontrol inkluderede primært antistof erstattet med phosphatbufret saltvand (PBS). Immunfarvede sektioner blev gennemgået for cytoplasmatisk ekspression af anti-caspase-2, anti-caspase-3 og anti-caspase-7. Antallet af immunreaktive celler pr. High Power Field (HPF) (X 400) blev talt. Til dette formål blev mindst 10 HPF vurderet, og gennemsnittet af positive celler blev registreret.

Prøvestørrelse og statistiske metoder Bestemmelsen af ​​patientantallet (30 patienter pr. gruppe) var baseret på tidligere forsøg, der undersøgte caspaseaktiviteten i CABG-indstillingen.

Kategoriske variabler blev rapporteret som tal og procenter, hvorimod middel ± standardafvigelse blev udtrykt for kontinuerte variable. Gentagne mål for variansanalyse og multiple sammenligninger ved hjælp af Bonferroni-korrektion (type I fejlkorrektion) blev anvendt til at evaluere ændringen af ​​målte inflammatoriske markører mellem grupperne over tid. Kolmogorov-Smirnov-testen for normalitet blev udført. Kontinuerlige variabler og kategoriske variable blev sammenlignet mellem grupper, der brugte henholdsvis Students t-test (eller Mann-Whitney-test for dem, der mødte unormal fordeling) og Chi-kvadrat. Alle de statistiske analyser blev udført ved hjælp af SPSS version 23 (SPSS, Chicago, IL, USA). A p-værdier <0,05 blev anset for at være signifikante.