¿Puede la vitamina D reducir el daño al músculo cardíaco después de una cirugía de bypass?

La inscripción comenzó en junio de 2018 y finalizó en diciembre de 2018. Los criterios de inclusión fueron los siguientes: los pacientes remitidos para Injerto de Bypass de Arteria Coronaria (CABG) electivo y aislado mediante Bypass Cardiopulmonar (CPB) con deficiencia de vitamina D (definida como 25-hidroxivitamina D [25(OH) D] < 20 ng/mL ) y función renal normal (creatinina <1,5 mg/dL). Los criterios de exclusión fueron: infarto de miocardio reciente, CABG urgente, cirugía coronaria no aislada, reintervención, enfermedad maligna, presencia de enfermedades inflamatorias agudas o crónicas, antecedentes de tratamiento con vitamina D en los últimos 6 meses o falta de voluntad para participar.

Intervención Después del consentimiento informado, los participantes elegibles del estudio fueron asignados aleatoriamente (mediante un código aleatorio generado por computadora) en una proporción de 1:1 para recibir placebo o un total de 450 000 unidades internacionales (UI) de vitamina D3 (tres 50 000 UI de vitamina D3). comprimido diario durante 3 días) antes de la operación. El grupo de placebo recibió tres tabletas de medicamentos inactivos diariamente en el mismo punto de tiempo. Con la excepción de los farmacéuticos, todos los investigadores, pacientes y el equipo médico desconocían la asignación de grupos.

El bypass de la arteria coronaria se realizó en las lesiones culpables para ambos grupos por un equipo quirúrgico. El protocolo estándar para el manejo de anestesia general, cirugía y CEC se realizó para todos los pacientes y ya se ha descrito en detalle [16].

Medidas de resultado El resultado primario fue el grado de apoptosis cardíaca mediante la medición de la actividad de las caspasas 2, 3 y 7 de una muestra de la aurícula derecha con tinción inmunohistoquímica, y el nivel sérico de interleucina-10 antiinflamatoria (IL-10) y crecimiento similar a la insulina. (IGF-1) y Péptido Natriurético Cerebral N-terminal pro tipo v (nt-pro BNP). La biopsia de la orejuela derecha se tomó al final de la cirugía después de la extracción de la cánula venosa de forma no traumática, se mantuvo en formalina y en menos de 24h se parafinizó. Se recolectaron muestras de sangre al inicio (T1), antes de la inducción de la anestesia (T2), al final de la cirugía después de la reversión de protamina (T3) y el primer día postoperatorio (T4) para medir el nivel sérico de IGF-1, IL-10 y pro BNP. Las muestras de sangre se centrifugaron a 2500 rpm durante 15 min dentro de una hora después de la toma de muestras de sangre, y el suero se almacenó a -20 °C hasta que se analizó.

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas La concentración de IL-10 se midió mediante un kit ELISA cuantitativo. La concentración de IGF-1 se midió mediante un kit ELISA cuantitativo.

La vitamina D sérica se detectó utilizando el método de cromatografía líquida de alta resolución. La medición de pro BNP se realizó utilizando un ensayo inmunométrico quimioluminiscente de dos sitios disponible comercialmente.

Estudios inmunohistoquímicos La tinción inmunohistoquímica se realizó en secciones de 5 micrómetros de espesor. Los portaobjetos se incubaron a 37°C durante 24 horas y se desparafinizaron en xileno precalentado y se rehidrataron mediante grados descendentes de alcohol, lavados en agua destilada. La recuperación del antígeno inducida por calor se realizó en un horno de microondas con tampón de citrato (pH 6,0) para anti-caspasa-7 y ácido etilendiaminotetraacético; solución tamponada (Tris-EDTA) (pH=8) para anti-caspasa-2 y 3. El bloqueo de endoperoxidasa se realizó mediante la adición de peróxido de hidrógeno en las secciones. A continuación, se añadió el bloque de proteínas durante 5 minutos, los portaobjetos se lavaron en solución salina tamponada con Tris (TBS). .El anticuerpo primario como anticuerpo anti-caspasa-2, monoclonal de conejo, anticuerpo anti-caspasa-3, monoclonal de conejo, anticuerpo anti-caspasa-7 y anticuerpo monoclonal de ratón (clon 7-1-11, abcam) se agregaron y mantuvieron durante 30 minutos, lavado en TBS. Se usaron kits de micropolímeros de detección de inmunohistoquímica (IHC) específicos de peroxidasa de rábano picante/diaminobencidina (HRP/DAB) de ratón y conejo, se incubaron durante 15 minutos y luego se lavaron con solución salina tamponada con tris (TBS). Se añadió cromógeno de diaminobencidina (DAB) y se mantuvo durante 5 minutos. Portaobjetos lavados en agua destilada y contrateñidos con hematoxilina. Se usaron secciones que contenían tejido de ganglios linfáticos como control positivo. El control negativo incluía el anticuerpo primario reemplazado con solución salina tamponada con fosfato (PBS). Las secciones inmunoteñidas se revisaron para determinar la expresión citoplásmica de anti-caspasa-2, anti-caspasa-3 y anti-caspasa-7. Se contó el número de células inmunorreactivas por campo de alta potencia (HPF) (X 400). Para ello se evaluaron al menos 10 HPF y se registró el promedio de células positivas.

Tamaño de la muestra y métodos estadísticos La determinación del número de pacientes (30 pacientes por grupo) se basó en ensayos previos que investigaron la actividad de la caspasa en el entorno de CABG.

Las variables categóricas se informaron como números y porcentajes, mientras que la media ± desviación estándar se expresó para las variables continuas. Se aplicaron medidas repetidas de análisis de varianza y comparaciones múltiples utilizando la corrección de Bonferroni (corrección de error de tipo I) para evaluar el cambio de los marcadores inflamatorios medidos entre los grupos a lo largo del tiempo. Se realizó la prueba de normalidad de Kolmogorov-Smirnov. Las variables continuas y las variables categóricas se compararon entre grupos mediante la prueba t de Student (o la prueba de Mann-Whitney para aquellos que cumplieron con una distribución anormal) y Chi-cuadrado, respectivamente. Todos los análisis estadísticos se realizaron con SPSS versión 23 (SPSS, Chicago, IL, EE. UU.). Se consideró significativo un valor de p <0,05.