Kan D-vitamin minska hjärtmuskelskador efter bypass-operation?

Registreringen startade i juni 2018 och avslutades i december 2018. Inklusionskriterierna var följande: patienterna som remitterades för elektivt och isolerat koronarartärbypassgraft (CABG) med kardiopulmonell bypass (CPB) med vitamin D-brist (definierad som 25-hydroxivitamin D [25(OH) D] < 20 ng/ml ) och normal njurfunktion (kreatinin <1,5 mg/dL). Uteslutningskriterierna var: nyligen genomförd hjärtinfarkt, akut CABG, icke-isolerad kranskärlskirurgi, omoperation, malign sjukdom, förekomst av akuta eller kroniska inflammatoriska sjukdomar, anamnes på vitamin D-behandling inom de senaste 6 månaderna eller ovilja att delta.

Intervention Efter informerat samtycke tilldelades kvalificerade studiedeltagare slumpmässigt (genom att använda en datorgenererad slumpmässig kod) i förhållandet 1:1 för att få antingen placebo eller totalt 450 000 internationella enheter (IE) vitamin D3 (tre 50 000 IE vitamin D3 tablett dagligen i 3 dagar) före operation. Placebogruppen fick tre inaktiva medicintabletter dagligen vid samma tidpunkt. Med undantag för farmaceuter var alla utredare, patienter och det medicinska teamet blinda för grupptilldelningen.

Kranskärlsbypass gjordes i den skyldige lesionerna för båda grupperna av ett kirurgiskt team. Standardprotokollet för generell anestesi, kirurgi och CPB-hantering utfördes för alla patienter och har redan beskrivits i detalj [16].

Resultatmått Det primära resultatet var graden av hjärtapoptos genom mätning av kaspas 2, 3 och 7 aktivitet från höger förmaksprov med immunhistokemifärgning och serumnivån av antiinflammatoriskt interleukin-10 (IL-10) och insulinliknande tillväxt faktor (IGF-1), och N-terminal pro v-typ hjärnantriuretisk peptid (nt-pro BNP). Biopsi från höger förmaksbihang togs i slutet av operationen efter avlägsnande av venkanylen på ett icke-traumatiskt sätt, hölls i formalin och parafiniserades på mindre än 24 timmar. Blodprover togs vid baslinjen (T1), före anestesiinduktion (T2), i slutet av operationen efter protaminreversering (T3) och den första postoperativa dagen (T4) för att mäta serumnivån av IGF-1, IL-10 och pro BNP. Blodproverna centrifugerades vid 2500 rpm under 15 minuter inom en timme efter blodprovtagning, och serumet förvarades vid -20°C tills det analyserades.

Enzymkopplad immunosorbentanalys Koncentrationen av IL-10 mättes med ett kvantitativt ELISA-kit. Koncentrationen av IGF-1 mättes med ett kvantitativt ELISA-kit.

Serum-vitamin D detekterades med hjälp av högpresterande vätskekromatografimetoden. Pro BNP-mätningen gjordes med hjälp av en kommersiellt tillgänglig tvåställs kemiluminescerande immunometrisk analys.

Immunhistokemiska studier Immunhistokemisk färgning utfördes på 5 mikrometer tjocka sektioner. Objektglasen inkuberades vid 37°C under 24 timmar och avparaffinerades i förvärmd xylen och rehydrerades genom sjunkande alkoholkvaliteter, tvättades i destillerat vatten. Värmeinducerad antigenåtervinning gjordes i mikrovågsugn med citratbuffert (pH 6,0) för anti-kaspas-7 och etylendiamintetraättiksyra; buffrad lösning (Tris-EDTA) (pH=8) för anti-kaspas-2 och 3. endoperoxidasblockering gjordes genom att tillsätta väteperoxid på sektionerna. Proteinblocket tillsattes sedan under 5 minuter, objektglasen tvättades i Tris-buffrad saltlösning (TBS). Den primära antikroppen som anti-kaspas-2-antikropp, kanin monoklonal, anti-kaspas-3 antikropp, kanin monoklonal, anti-caspase-7 antikropp och mus monoklonal (klon 7-1-11, abcam) antikropp tillsattes och behölls under 30 minuter, tvättad i TBS. Mus- och kaninspecifik pepparrotsperoxidas/diaminobensidin (HRP/DAB) immunhistokemi (IHC)-detektionsmikropolymerkit användes och inkuberades i 15 minuter och tvättades sedan med trisbuffrad saltlösning (TBS). Diaminobensidin (DAB) kromogen tillsattes och hölls i 5 minuter. Objektglasen tvättades i destillerat vatten och motfärgade med hematoxylin. Sektioner innehållande lymfkörtelvävnad användes som positiv kontroll. Negativ kontroll inkluderade primär antikropp ersatt med fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Immunfärgade sektioner granskades för cytoplasmatiskt uttryck av anti-kaspas-2, anti-kaspas-3 och anti-kaspas-7. Antalet immunreaktiva celler per High Power Field (HPF) (X 400) räknades. För detta ändamål utvärderades minst 10 HPF och medelvärdet av positiva celler registrerades.

Provstorlek och statistiska metoder Bestämningen av patientantalet (30 patienter per grupp) baserades på tidigare försök som undersökte kaspasaktiviteten i CABG-inställningen.

Kategoriska variabler rapporterades som siffror och procentsatser, medan medel ± standardavvikelse uttrycktes för kontinuerliga variabler. Upprepade mätningar av variansanalys och flera jämförelser med Bonferroni-korrigering (typ I-felkorrigering) användes för att utvärdera förändringen av uppmätta inflammatoriska markörer mellan grupperna över tiden. Kolmogorov-Smirnov-testet för normalitet utfördes. Kontinuerliga variabler och kategoriska variabler jämfördes mellan grupper som använde Students t-test (eller Mann-Whitney-test för de som möter onormal fördelning) respektive chi-kvadrat. Alla statistiska analyser utfördes med SPSS version 23 (SPSS, Chicago, IL, USA). A p-värden <0,05 ansågs vara signifikanta.