Csökkentheti a D-vitamin a szívizom károsodását bypass műtét után?

A beiratkozás 2018 júniusában kezdődött és 2018 decemberében fejeződött be. A felvételi kritériumok a következők voltak: az elektív és izolált szívkoszorúér bypass-graftra (CABG) utalt betegek Cardiopulmonary Bypass (CPB) alkalmazásával D-vitamin-hiány esetén (definíció szerint 25-hidroxi-D-vitamin [25(OH) D] < 20 ng/ml ) és a normál veseműködés (kreatinin <1,5 mg/dl). A kizárási kritériumok a következők voltak: friss szívinfarktus, sürgős CABG, nem izolált koszorúér-műtét, ismételt műtét, rosszindulatú betegség, akut vagy krónikus gyulladásos megbetegedések jelenléte, az anamnézisben szereplő D-vitamin-kezelés az elmúlt 6 hónapban, vagy részvételi hajlandóság.

Beavatkozás Tájékozott beleegyezés után a vizsgálatra jogosult résztvevőket véletlenszerűen (számítógép által generált véletlenszerű kód segítségével) 1:1 arányban placebót vagy összesen 450 000 nemzetközi egység (NE) D3-vitamint (három 50 000 NE D3-vitamint) kaptak. tabletta naponta 3 napig) műtét előtt. A placebo csoport naponta három inaktív gyógyszertablettát kapott ugyanabban az időpontban. A gyógyszerészek kivételével az összes vizsgáló, beteg és az orvosi csoport elvakult a csoportfelosztástól.

A koszorúér bypass-t mindkét csoportban egy sebészi csapat végezte a kiváltó léziókban. Az általános érzéstelenítés, sebészeti és CPB kezelés standard protokollját minden betegnél elvégezték, és már részletesen leírták [16].

Eredménymérések Az elsődleges eredmény a szív apoptózisának mértéke volt a kaszpáz 2, 3 és 7 aktivitásának mérésével jobb pitvari mintából immunhisztokémiai festéssel, valamint a gyulladásgátló interleukin-10 (IL-10) és az inzulinszerű növekedés szérumszintjével. faktor (IGF-1) és N-terminális pro v-típusú Brain Natriuretic Peptide (nt-pro BNP). A jobb pitvari függelékből vett biopsziát a műtét végén a vénás kanül nem traumás módon történő eltávolítása után formalinban tartottuk, és kevesebb mint 24 órán belül parafinizáltuk. Vérmintákat vettünk az alapvonalon (T1), az érzéstelenítés beindítása előtt (T2), a műtét végén a protamin visszafordítása után (T3) és az első posztoperatív napon (T4), hogy megmérjük az IGF-1, IL-10 szérumszintjét. és pro BNP. A vérmintákat 2500 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk 15 percig a vérmintavétel után egy órán belül, és a szérumot -20 °C-on tároltuk a vizsgálatig.

Enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat Az IL-10 koncentrációját kvantitatív ELISA kittel mértük. Az IGF-1 koncentrációját kvantitatív ELISA kittel mértük.

A szérum D - vitamint nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel határoztuk meg . A pro BNP mérést a kereskedelemben kapható kéthelyes kemilumineszcens immunometrikus vizsgálattal végeztük.

Immunhisztokémiai vizsgálatok Immunhisztokémiai festést végeztünk 5 mikrométer vastag metszeteken. A tárgylemezeket 37 °C-on 24 órán át inkubáltuk, majd előmelegített xilolban paraffinmentesítettük, majd csökkenő minőségű alkohollal rehidratáltuk, majd desztillált vízzel mostuk. A hővel indukált antigén-kinyerést mikrohullámú sütőben végeztük citrát pufferrel (pH 6,0) az anti-kaszpáz-7 és az etilén-diamin-tetraecetsav esetében; pufferolt oldat (Tris-EDTA) (pH=8) anti-kaszpáz-2 és 3. endoperoxidáz blokkolásra hidrogén-peroxid hozzáadásával történt. A fehérjeblokkot ezután 5 percig hozzáadtuk, majd a lemezeket Tris-puffered Saline-ban (TBS) mostuk. .Az elsődleges antitestet, mint anti-kaszpáz-2 antitestet, nyúl monoklonális, anti-kaszpáz-3 antitestet, nyúl monoklonális, anti-kaszpáz-7 antitestet és egér monoklonális (7-1-11 klón, abcam) antitestet hozzáadtuk és megtartottuk. 30 percig, TBS-ben mostuk. Egér- és nyúlspecifikus torma-peroxidáz/diaminobenzidin (HRP/DAB) immunhisztokémiai (IHC) detektáló mikropolimer készletet használtunk, és 15 percig inkubáltuk, majd trisz-pufferolt sóoldattal (TBS) mostuk. Diaminobenzidin (DAB) kromogént adtunk hozzá, és 5 percig tartottuk. A tárgylemezeket desztillált vízben mostuk és hematoxilinnel ellenfestettük. Pozitív kontrollként nyirokcsomószövetet tartalmazó metszeteket használtunk. A negatív kontroll az elsődleges antitestet foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS) helyettesítette. Az immunfestett metszeteket felülvizsgáltuk az anti-kaszpáz-2, anti-kaszpáz-3 és anti-kaszpáz-7 citoplazmatikus expressziójára. Megszámoltuk az immunreaktív sejtek számát nagy teljesítményű mezőnként (HPF) (X 400). Ebből a célból legalább 10 HPF-et értékeltünk, és feljegyeztük a pozitív sejtek átlagát.

Mintanagyság és statisztikai módszerek A betegszám (csoportonként 30 beteg) meghatározása a kaszpázaktivitást CABG-környezetben végzett korábbi vizsgálatokon alapult.

A kategorikus változókat számok és százalékok formájában adtuk meg, míg a folytonos változókra átlag± szórást fejeztünk ki. A mért gyulladásos markerek csoportok közötti időbeli változásának értékelésére ismételt varianciaanalízist és többszörös összehasonlítást alkalmaztunk Bonferroni korrekcióval (I. típusú hibakorrekció). Elvégeztük a Kolmogorov-Smirnov normalitástesztet. A folytonos változókat és a kategorikus változókat Student-féle t-próbával (vagy Mann-Whitney-próbával a kóros eloszlásúak esetén), illetve Chi-négyzet segítségével hasonlítottuk össze. Az összes statisztikai elemzést az SPSS 23-as verziójával végeztük (SPSS, Chicago, IL, USA). A p <0,05 értéket tekintettük szignifikánsnak.