Kan D-vitamin redusere hjertemuskelskader etter bypasskirurgi?

Påmeldingen startet i juni 2018 og ble fullført i desember 2018. Inklusjonskriteriene var som følger: pasientene henvist til elektiv og isolert koronararteriebypassgraft (CABG) ved bruk av kardiopulmonal bypass (CPB) med vitamin D-mangel (definert som 25-hydroksyvitamin D [25(OH) D] < 20 ng/mL ) og normal nyrefunksjon (kreatinin <1,5 mg/dL). Eksklusjonskriteriene var: nylig hjerteinfarkt, akutt CABG, ikke-isolert koronarkirurgi, gjentatt operasjon, ondartet sykdom, tilstedeværelse av akutte eller kroniske inflammatoriske sykdommer, historie med vitamin D-behandling i løpet av de siste 6 månedene, eller manglende vilje til å delta.

Intervensjon Etter informert samtykke ble kvalifiserte studiedeltakere tilfeldig tildelt (ved å bruke en datamaskingenerert tilfeldig kode) i et 1:1-forhold for å motta enten placebo eller totalt 450 000 internasjonale enheter (IE) vitamin D3 (tre 50 000 IE vitamin D3 tablett daglig i 3 dager) før operasjon. Placebogruppen fikk tre inaktive medisintabletter daglig på samme tidspunkt. Med unntak av farmasøytene ble alle etterforskerne, pasientene og det medisinske teamet blindet for gruppetildelingen.

Koronararterie-bypass ble utført i den skyldige lesjonene for begge grupper av ett kirurgisk team. Standardprotokollen for generell anestesi, kirurgi og CPB-behandling ble utført for alle pasienter og er allerede beskrevet i detalj [16].

Utfallsmål Det primære utfallet var graden av hjerteapoptose ved måling av kaspase 2, 3 og 7 aktivitet fra høyre atrieprøve med immunhistokjemifarging, og serumnivået av antiinflammatorisk interleukin-10 (IL-10) og insulinlignende vekst faktor (IGF-1), og N-terminal pro v-type hjernenatriuretisk peptid (nt-pro BNP). Biopsien fra høyre atrievedheng ble tatt på slutten av operasjonen etter fjerning av venøs kanyle på en ikke-traumatisk måte, holdt i formalin og i mindre enn 24 timer parafinisert. Blodprøver ble tatt ved baseline (T1), før anestesiinduksjon (T2), ved slutten av operasjonen etter protaminreversering (T3) og den første postoperative dagen (T4) for å måle serumnivået av IGF-1, IL-10 og pro BNP. Blodprøvene ble sentrifugert ved 2500 rpm i 15 minutter innen én time etter blodprøvetaking, og serumet ble lagret ved -20°C inntil det ble analysert.

Enzymkoblet immunosorbentanalyse Konsentrasjonen av IL-10 ble målt med et kvantitativt ELISA-sett. Konsentrasjonen av IGF-1 ble målt med et kvantitativt ELISA-sett.

Serum vitamin D ble påvist ved bruk av høyytelses væskekromatografimetoden. Pro BNP-målingen ble utført ved å bruke en kommersielt tilgjengelig to-seters kjemiluminescerende immunometrisk analyse.

Immunhistokjemistudier Immunhistokjemisk farging ble utført på 5 mikrometer tykke snitt. Objektglassene ble inkubert ved 37°C i 24 timer og avparafinisert i forhåndsoppvarmet xylen og rehydrert gjennom synkende alkoholkvaliteter, vasket i destillert vann. Varmeindusert antigeninnhenting ble utført i mikrobølgeovn med sitratbuffer (pH 6,0) for anti-kaspase-7 og etylendiamintetraeddiksyre; bufret løsning (Tris-EDTA) (pH=8) for anti-caspase-2 og 3. endoperoksidaseblokkering ble gjort ved å tilsette hydrogenperoksid på seksjonene. Proteinblokken ble deretter tilsatt i 5 minutter, objektglass ble vasket i Tris-bufret saltvann (TBS). Det primære antistoffet som anti-caspase-2 antistoff, kanin monoklonalt, anti-caspase-3 antistoff, kanin monoklonalt, anti-caspase-7 antistoff og muse monoklonalt (klon 7-1-11, abcam) antistoff ble tilsatt og holdt i 30 minutter, vasket i TBS. Mus og kanin Spesifikt pepperrotperoksidase/diaminobenzidin (HRP/DAB) immunhistokjemi (IHC) deteksjonsmikropolymersett ble brukt og inkubert i 15 minutter og deretter vasket med tris-bufret saltvann (TBS). Diaminobenzidin (DAB) kromogen ble tilsatt og holdt i 5 minutter. Objektglass vasket i destillert vann og motfarget med hematoksylin. Seksjoner som inneholdt lymfeknutevev ble brukt som positiv kontroll. Negativ kontroll inkluderte primært antistoff erstattet med fosfatbufret saltvann (PBS). Immunfargede seksjoner ble gjennomgått for cytoplasmatisk ekspresjon av anti-caspase-2, anti-caspase-3 og anti-caspase-7. Antall immunreaktive celler per High Power Field (HPF) (X 400) ble talt. For dette formålet ble minst 10 HPF vurdert og gjennomsnittet av positive celler ble registrert.

Prøvestørrelse og statistiske metoder Bestemmelsen av pasienttallet (30 pasienter per gruppe) var basert på tidligere studier som undersøkte kaspaseaktiviteten i CABG-innstillingen.

Kategoriske variabler ble rapportert som tall og prosenter, mens gjennomsnitt ± standardavvik ble uttrykt for kontinuerlige variabler. Gjentatte mål for variansanalyse og flere sammenligninger ved bruk av Bonferroni-korreksjon (type I feilkorrigering) ble brukt for å evaluere endringen av målte inflammatoriske markører mellom gruppene over tid. Kolmogorov-Smirnov-testen for normalitet ble utført. Kontinuerlige variabler og kategoriske variabler ble sammenlignet mellom grupper som brukte henholdsvis Students t-test (eller Mann-Whitney-test for de som møter unormal fordeling) og Chi-square. Alle de statistiske analysene ble utført ved bruk av SPSS versjon 23 (SPSS, Chicago, IL, USA). A p-verdier <0,05 ble ansett for å være signifikante.