바이패스 수술 후 비타민 D가 심장 근육 손상을 줄일 수 있습니까?

2018년 6월에 등록을 시작하여 2018년 12월에 완료되었습니다. 포함 기준은 다음과 같습니다: 비타민 D 결핍(25-하이드록시비타민 D[25(OH) D] < 20 ng/mL로 정의됨)과 함께 심폐 우회술(CPB)을 사용하는 선택 및 격리 관상 동맥 우회술(CABG)을 위해 의뢰된 환자 ) 및 정상 신장 기능(크레아티닌 <1.5mg/dL). 제외 기준은 다음과 같습니다: 최근의 심근경색, 긴급 CABG, 비격리 관상동맥 수술, 재수술, 악성 질환, 급성 또는 만성 염증성 질환의 존재, 이전 6개월 이내에 비타민 D 치료 이력 또는 참여 의사 없음.

개입 정보에 입각한 동의에 따라 적격한 연구 참가자는 위약 또는 총 450,000 국제 단위(IU) 비타민 D3(3개의 50,000 IU 비타민 D3 3일 동안 매일 정제) 수술 전. 위약 그룹은 같은 시점에 매일 3개의 비활성 약물 정제를 받았습니다. 약사를 제외한 모든 연구자, 환자 및 의료팀은 그룹 할당에 대해 눈이 멀었습니다.

관상 동맥 우회술은 한 수술 팀에 의해 두 그룹의 원인 병변에서 수행되었습니다. 전신 마취, 수술 및 CPB 관리를 위한 표준 프로토콜은 모든 환자에 대해 수행되었으며 이미 자세히 설명되어 있습니다[16].

결과 측정 1차 결과는 면역조직화학 염색으로 우심방 표본에서 caspase 2, 3 및 7 활성을 측정하여 심장 세포사멸의 정도, 항염증 인터루킨-10(IL-10) 및 인슐린 유사 성장의 혈청 수준이었습니다. 인자(IGF-1), 및 N-말단 pro v-타입 뇌 나트륨 이뇨 펩티드(nt-pro BNP). 우심방 부속기로부터의 생검은 비외상성 방식으로 정맥 캐뉼러 제거 후 수술 종료 시에 이루어졌으며, 포르말린에 보관되고 24시간 미만으로 파라핀 처리되었습니다. 베이스라인(T1), 마취유도 전(T2), 프로타민 역전 후 수술 종료 시점(T3), 수술 후 첫 날(T4)에 혈액 샘플을 채취하여 IGF-1, IL-10의 혈중 농도를 측정하였다. 그리고 프로 BNP. 혈액 샘플은 채혈 후 1시간 이내에 2500rpm에서 15분 동안 원심분리되었고 혈청은 분석될 때까지 -20°C에서 보관되었습니다.

Enzyme-linked immunosorbent assay IL-10의 농도는 정량 ELISA 키트로 측정하였다. IGF-1의 농도는 정량 ELISA 키트로 측정하였다.

고성능액체크로마토그래피법을 이용하여 혈청 비타민D를 검출하였다. pro BNP 측정은 상업적으로 이용 가능한 2-사이트 화학발광 면역 측정법을 사용하여 수행되었습니다.

면역조직화학 연구 면역조직화학 염색은 5마이크로미터 두께 섹션에서 수행되었습니다. 슬라이드를 37°C에서 24시간 동안 배양하고 예열된 크실렌에서 파라핀을 제거하고 알코올 등급을 낮추어 재수화하고 증류수로 세척했습니다. 항-카스파제-7 및 에틸렌디아민 테트라아세트산을 위한 시트레이트 완충액(pH 6.0)을 사용하여 전자레인지에 의해 열 유도 항원 회수를 수행하였다; anti-caspase-2 및 3 endoperoxidase 차단을 위한 완충 용액(Tris-EDTA)(pH=8)은 섹션에 과산화수소를 첨가하여 수행되었습니다. 그런 다음 단백질 블록을 5분 동안 첨가하고 슬라이드를 TBS(Tris-Buffered Saline)로 세척했습니다. .1차항체는 anti-caspase-2 항체, rabbit monoclonal, anti-caspase-3 항체, rabbit monoclonal, anti-caspase-7 항체, mouse monoclonal (clone 7-1-11, abcam) 항체를 추가하여 보관하였다. 30분 동안 TBS로 세척하였다. 마우스 및 토끼 특정 양고추냉이 과산화효소/디아미노벤지딘(HRP/DAB) 면역조직화학(IHC) 검출 마이크로 폴리머 키트를 사용하고 15분 동안 배양한 다음 TBS(tris-buffered saline)로 세척했습니다. 디아미노벤지딘(DAB) 크로모겐을 첨가하고 5분 동안 유지하였다. 슬라이드를 증류수로 세척하고 헤마톡실린으로 역염색했습니다. 림프절 조직을 포함하는 절편을 양성 대조군으로 사용했습니다. 음성 대조군에는 인산염 완충 식염수(PBS)로 대체된 1차 항체가 포함되었습니다. 항-카스파제-2, 항-카스파제-3 및 항-카스파제-7의 세포질 발현에 대해 면역염색된 절편을 검토하였다. HPF(High Power Field)당 면역 반응 세포의 수(X 400)를 세었다. 이를 위해 적어도 10 HPF를 평가하고 양성 세포의 평균을 기록했습니다.

샘플 크기 및 통계 방법 환자 수(그룹당 30명의 환자)의 결정은 CABG 환경에서 카스파제 활성을 조사하는 이전 시험을 기반으로 했습니다.

범주형 변수는 숫자와 백분율로 보고된 반면 평균±표준편차는 연속형 변수로 표시되었습니다. Bonferroni 보정(유형 I 오류 보정)을 사용한 분산 분석 및 다중 비교의 반복 측정은 시간 경과에 따른 그룹 간 측정된 염증 마커의 변화를 평가하기 위해 적용되었습니다. 정규성에 대한 Kolmogorov-Smirnov 테스트가 수행되었습니다. 연속 변수와 범주 변수는 각각 Student's t test(또는 비정상 분포를 충족하는 경우 Mann-Whitney 검정)와 카이 제곱을 사용하여 그룹 간에 비교되었습니다. 모든 통계 분석은 SPSS 버전 23(SPSS, Chicago, IL, USA)을 사용하여 수행되었습니다. p 값 <0.05는 유의한 것으로 간주되었습니다.