非アルコール性脂肪肝疾患の肥満患者の体重に対する糞便微生物叢移植の影響

目的と目標。

仮説 • 帰無仮説: 非アルコール性脂肪肝疾患を有する肥満者の体重減少に関して、痩せたドナーの糞便微生物叢移植と糞便微生物叢移植なしの間に差はありません。

• 代替仮説: 痩せたドナーの糞便微生物叢の移植は、非アルコール性脂肪肝疾患のある肥満者の糞便微生物叢の移植を行わない場合と比較して、非アルコール性脂肪肝疾患のある肥満者の体重減少につながる

目的: 非アルコール性脂肪肝疾患の肥満患者の体重に対する糞便微生物叢移植の効果: パイロットランダム化対照試験。

FMT テクニック:

便ドナー基準 研究に登録されたすべての患者に対する普遍的なドナーとなる健康な単一ドナーが特定されます。

ドナーは次の検査を受けます

• 定期的な臨床検査
• ヘモグラム
• 空腹時血糖
• 肝機能検査
• 脂質プロファイル
• 排便ルーチンと卵子と嚢胞の顕微鏡検査、便培養、クロストリジウム ディフィシル毒素。ヘリコバクター ピロリの便抗原。クリプトスポリジウム &イソスポラ (耐酸性染色);ロタウイルス抗原。
• HBsAg
• 抗 HCV
• HIV 1 および 2
• VDRL
• HLA A1
• BMIは18～21、腹囲は男性で90cm未満、女性で80cm未満（3つすべてを満たす）。

ドナーが以下に該当する場合、ドナーは除外されます。

• 腸の動きの異常
• 慢性的なアルコール摂取
• 有効成分の乱用または同意の提供がなかった
• 18歳未満または60歳以上
• HBs抗原、抗HCV、HIV血清陽性
• 過去2か月以内に胃腸炎を患っている
• 炎症性腸疾患
• あらゆる悪性腫瘍
• 慢性腎臓病、冠動脈疾患、CVA、COPD、DM-2
• 登録時3か月以内の抗生物質の使用。
• 経アミノ炎、脂質異常症、便中の卵子/嚢胞、クロストリジウム・デフィシル毒素+

便提供者の手順:

• ドナーは、病院の栄養士と相談しながら、研究プロセス中、通常の食事計画に従うようアドバイスされます。
• ドナーは、登録時からプロトコール完了まで、屋台の食べ物を食べたり、公共/家族の行事やパーティーで食事をしたりすることは許可されません。

便の収集と準備:

• ドナーは、計画された手術当日に新鮮な便サンプルを収集して提出するよう推奨されます。
• 重量が約 250 g の便標本 (できれば Bristol Stool Type 4 または 5) が適切であると考えられます。
• 選択されたドナーからの250グラムの便サンプルを250mlの凍結培地に再懸濁します。 これをブレンダーで２０〜３０秒ずつ３回撹拌してホモジネートを得る。 凍結培地には 12.5% のグリセロールと 0.9% の N 生理食塩水が含まれます。
• 次いで、均質な懸濁液を滅菌ガーゼ片を通して３〜４回濾過する。
• ３０ｍｌの濾液を１００ｍｌのアリコートに集め、これを使用するまで−８０℃で保存する。
• 使用するには、30mlの濾液を含むアリコートを温水浴中で30℃で解凍する。 ７０ｍｌの０．９％Ｎ生理食塩水を加えて１００ｍｌの体積にする。

便投与手順 (ILBS FMT プロトコル)

• 500 mL の濾液が、UGI 内視鏡検査によって近位空腸に送達されます [(50 ml あたり 2 ～ 3 分)]。
• レシピエントは、便注入前の少なくとも 4 時間、経口的にゼロに保たれます。
• 100 mL の新鮮な解凍サンプルを 15 日に 1 回、3 回投与します。
• 非吸収性抗生物質は、研究への登録時および治療開始時から患者では回避されます。
• 培養および感受性に基づいて活動性敗血症の場合には、施設のプロトコールに従って抗生物質の静脈内投与が継続されます。
• 患者は処置の2時間後に流動食を摂取することが許可されます。

処置後のアドバイスと管理

• リファキシミン、下剤、その他の非吸収性抗生物質の使用は控えられます。
• 臨床的に必要な場合には、両方のグループに抗生物質が投与されます。

食事と運動のプログラムとコンプライアンスの評価:

食事介入:

高タンパク低炭水化物食（HPLC）食が患者に処方されることになる。 HPLC（高タンパク質、低炭水化物）食は、エネルギーが 20 ～ 25 Kcal/Kg IBW/日（通常の食事摂取量より 700 ～ 800 Kcal 少ない）、タンパク質が 1.2 ～ 1.5 gm/Kg IBW/日で構成されます。総カロリーの30％がたんぱく質、52％が炭水化物、18％が脂質で、食物繊維は1日あたり25gとなります。 タンパク質の要件は、モジュール式の高タンパク質、低カロリーのサプリメントで満たされます25、26。

身体活動：

運動プログラムは早歩きで構成されます。 早歩きとは、それぞれの年齢から予測される最大心拍数 (目標心拍数) の 60 ～ 70% の歩行強度として定義されます 27,28。 ほとんどの研究では、時速 5 ～ 6 km の速度が早歩きと考えられており、できればトレッドミルで 30 ～ 45 分間 30、または早歩き (通常のペースより速く歩き、万歩計で連続 5000 歩を測定) と考えられています。 両方のグループに、週に 5 日間、30 ～ 45 分間の同じ量の身体活動が処方されます。

介入期間: この食事療法と運動療法は 6 か月間実施されます。

コンプライアンスの評価 - 患者のコンプライアンスを確保するために次の措置が講じられます -

1. 食事チャート: - 個別の食事チャート (患者の要求に合わせてカスタマイズ) - 食品の総量、その量、および家庭での基準を記載し、明確な理解を得るために提供および説明されます。
2. 毎日の食事乳製品: - すべての患者は、処方された食事を遵守するためのアドヒアランスと自発性を最大限に高めるために、与えられた乳製品に毎日の食事を記録します。
3. 電話によるフォローアップ: - 毎週、すべての患者に電話がかかり、処方された食事の全体的な遵守状況を確認します。
4. OPD でのフォローアップ: - 患者は、全体的な臨床経過とコンプライアンスを確認するために、1 か月後に OPD でフォローアップするように求められます。 食事と症状の日記が照合され、最も近い親戚にも確認されます。
5. 全体的なコンプライアンス: - コンプライアンスアンケートは、コンプライアンスを確保する方法の 1 つ (食事管理表、食事日記、OPD フォローアップおよび電話によるフォローアップを除く) であり、患者の全体的な食事コンプライアンスを定量化する客観的な方法です。 ポイント番号 5 では、リッカート尺度 (3 つのオプション) の計算が非常に明確に示されていますが、実際の質問票は、アブドラ アル ラヒリの論文の研究で使用されたものの修正版です。 この修正されたアンケートは、Performa に添付されています。 リッカート尺度に基づいたアンケート 24 (10 の自由回答形式の質問を含む)。 反応は 3 段階のスケールで評価され、患者が食事療法のアドバイスに従ったかどうか (常に = 2、時々 = 1、または決して = 0) を決定するために必要となります。 0 ～ 20 の範囲の総合スコアに従って、患者のアドヒアランスは i に分類されます。スコアが＞１５の場合は「良好な遵守」 ｉｉ． スコアが 10 ～ 15 の場合は「部分遵守」 iii． スコアが 10 未満の場合は「非遵守」。

食事の量は人それぞれです。 私たちはすべての人に食事チャートを渡します。プロテイン低炭水化物の利点と食事の定量化の重要性について、一人ひとりに詳しく説明します。 コンプライアンスの尺度についても検証され、使用されており、パフォーマにアンケートを添付しました。 Performa には食事チャートの例も添付されています。

身体活動コンプライアンス: -

1. 研究施設での最初のセッション: 患者は、処方計画をよく理解し、残りを自宅で行えるように、研究施設で所定の運動の 1 セッションを完了するように求められます。
2. 活動記録簿：患者は毎日活動記録簿に記入し、OPD を訪れるたびに持参するように求められます。
3. それは自己申告アンケートによって測定されます。 修正可能な活動に関する質問票 (MAQ)、前の週の修正可能な活動に関する質問票 (PWMAQ)、最近の身体活動に関する質問票 (RPAQ)、国際的な身体活動に関する質問票 (IPAQ)、前日の身体活動のリコール (PDPAR) など、非常に多くの自己報告質問票があります。および 7 日間の身体活動リコール (PAR) 31、。 国際身体活動アンケート (IPAQ) - 短縮形式: IPAQ-SF は、身体活動の種類と座位時間を評価するために、ベースラインと介入期間の終了時に使用されます。 総身体活動量は MET-min/週で表され、座って過ごした時間は過去 7 日間に計算されます。 週あたりの MET 分によると、患者の身体活動レベルは、活発、中程度、または低に分類されます。 同様に、MET 分/週の変化は、患者のコンプライアンスを表すだけでなく、最低限処方されたもの以外に患者が行った追加の活動も考慮に入れます。 FMT 中のドナーの食事 選択されたドナーは、健康で痩せた若者 1 名です。希望の体重を持っている人。 したがって、学習期間中（すなわち、 ドナーが研究で便サンプルを提供するまで）ドナーは通常の通常の食事に従うことが求められ、彼が食べるべき食事の「種類」についての仕様はありません。 それにもかかわらず、抗生物質や便提供プロセスを妨げる他の薬物の使用を必要とする胃腸障害の事態を避けるために、この健康な提供者は屋台の食べ物を食べないように求められます。 ただし、家族の集まりやパーティーがあれば、自由に食事をすることができます。

患者の追跡調査 [ベースライン時、3 ヵ月、6 ヵ月、および 12 ヵ月]。

生活習慣の乱れは、食事療法により摂取量を現在のレベルから 500 ～ 1,000 kcal/日減らす必要があると定義されます。 低カロリー食（LCD）は、ほとんどの女性では 1,000 ～ 1,200 kcal/日、男性では 1,200 kcal/日～1,600 kcal/日を含みます。 身体活動（ウォーキング、ダンス、ガーデニング、家事、チームまたは個人のスポーツ）は、週のほとんどの曜日、できればすべての日に、少なくとも 30 分以上の中強度の身体活動を確保できるレベルまでゆっくりと増やす必要があります。 6か月間体重を5％減らすことができなかった場合、生活習慣の失敗とみなされました。

体重: - 電子体重計。

ウエストとヒップの測定: - ウエスト周囲径は、100 g の一定の張力を与える耐伸縮性テープを使用して、触知できる最後の肋骨の下縁と腸骨稜の上部の間の中間点で測定する必要があります。 ヒップ周囲径は、テープを床と平行にして、臀部の最も広い部分の周囲を測定する必要があります。 14

臨床検査評価。 インスリン抵抗性 (HOMA-IR): - (インスリン抵抗性 (HOMA-IR): - 空腹時インスリン (microU/L) x 空腹時血糖 (nmol/L)/22.5。) およびインスリンは化学発光免疫測定法 (CLIA) によって測定されています。 15 は、サンプル中のインスリン濃度の測定のために当社の研究室で一般的に使用されています。

高感度C反応性タンパク質、フィブリノーゲンTNF-α、アディポネクチン、レプチン、グレリン： - 専用のELISAキットで測定します。

腸内マイクロバイオーム分析方法: - この技術により、一度に複数のサンプルの迅速なシーケンスが可能になり、サンプルごとに数千のシーケンスリードが得られます。 具体的には、27F プライマー (AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3=) および 355R' (5=-GCTGCCTCCCGTAGGAGT-3=) 上の 454 個のエマルション PCR リンカーと、異なる 8- A アダプターと 27F プライマーの間のベース バーコード。8 したがって、各糞便サンプルは、独自のバーコード付きフォワード 16S リボソーム RNA プライマーを使用して増幅され、最大 96 個のサンプルがプールされ、エマルジョン PCR および pyro シーケンスが行われました。 16

血清トランスクリプトーム: - トランスクリプトミクス技術は、生物のトランスクリプトーム (すべての RNA 転写物の合計) を研究するために使用される技術です。 生物の情報内容はゲノムの DNA に記録され、転写によって表現されます。 ここで、mRNA は情報ネットワーク内で一時的な中間分子として機能し、一方、非コード RNA は追加の多様な機能を実行します。 トランスクリプトームは、細胞内に存在する総転写物の時間内のスナップショットをキャプチャします。 トランスクリプトーム全体を研究する最初の試みは 1990 年代初頭に始まり、1990 年代後半以降の技術の進歩により、トランスクリプトームは広く普及した分野になりました。 トランスクリプトミクスは、この分野を変革する度重なる技術革新によって定義されてきました。 この分野には 2 つの主要な現代技術があります。1 つはあらかじめ決められた配列のセットを定量化するマイクロアレイ、もう 1 つはハイスループット シーケンシングを使用してすべての配列を捕捉する RNA シーケンシング (RNA-Seq) です。 17

体組成分析方法: - 一般的な評価は人体測定法であり、体重、身長、腹囲、皮下脂肪の測定が含まれます。 18 食事および運動プログラムの遵守状況の評価: - 患者の来院ごとに尋ねられるアンケートの数による。

マイクロバイオーム分析用の便サンプルは、0、7、90、180日目に収集されます。 すべての悪影響は監視され、通知されます。

研究対象集団: NAFLD を患う 18 ～ 55 歳、および

• BMI ≤ 35 または
• BMI（Body Mass Index）が 30 ～ 34.9 kg/m2 以下で、少なくとも 1 つの治療済みまたは未治療の併存疾患（高血圧、脂質異常症、心血管疾患、耐糖能異常、睡眠時無呼吸症候群、NASH）を患っている。

肝臓内科OPDに参加。 研究デザイン: ランダム化比較試験 研究期間: 倫理承認から 1 年間。 サンプルサイズ: 110 (各グループ 55 例) 介入: 対象者には UGI 内視鏡検査による FMT が施されます。 彼らには、痩せた健康なドナーから収集した処理済みの糞便微生物叢サンプルが、0/15/30日間投与されます。

患者の追跡調査 [ベースライン、3 か月、6 か月、および 12 か月]

• 体重
• ウエストとヒップの寸法
• 臨床検査評価
• インスリン抵抗性 (HOMA-IR) (インスリン抵抗性 (HOMA-IR): - 空腹時インスリン (microU/L) x 空腹時血糖 (nmol/L)/22.5。)
• 高感度 C 反応性タンパク質、フィブリノーゲン TNF-α、アディポネクチン、レプチン、ガーリン。
• 腸内マイクロバイオーム解析
• 血清トランスクリプトーム
• 体組成分析 食事と運動プログラムの遵守状況の評価
• マイクロバイオーム分析用の便サンプルは、0、7、90 日目、および 180、360 日目に収集されます。
• すべての悪影響は監視され、通知されます。 モニタリングと評価: - 目標のすべてのパラメーターと悪影響も記録します。

副作用: 下痢、肺炎、腹痛、便秘、吐き気、嘔吐、発熱、死亡 中止ルール: 治療中に何らかの副作用が生じた場合。

研究における倫理的問題とこれらの問題に対処する計画: なし