Effekter av fekal mikrobiotatransplantasjon på vekt hos overvektige pasienter med ikke-alkoholisk fettleversykdom

Mål og mål.

Hypotese • Nullhypotese: Det er ingen forskjell mellom Lean donor fekal mikrobiota transplantasjon og ingen fekal mikrobiota transplantasjon når det gjelder vekttap hos overvektige personer med ikke-alkoholisk fettleversykdom

• Alternativ hypotese: Mager donor transplantasjon av fekal mikrobiota vil føre til større vekttap hos overvektige personer med ikke-alkoholisk fettleversykdom sammenlignet med ingen fekal mikrobiotatransplantasjon hos overvektige personer med ikke-alkoholisk fettleversykdom

MÅL: Effekter av transplantasjon av fekal mikrobiota på vekt hos overvektige pasienter med ikke-alkoholisk fettleversykdom: En randomisert kontrollert pilotforsøk.

FMT-teknikk:

Kriterier for avføringsdonor En sunn enkeltdonor vil bli identifisert som vil være universell donor for alle pasienter som er registrert i studien.

Giveren vil bli screenet for

• Rutinemessige laboratorietester
• Hemogram
• Fastende blodsukker
• Leverfunksjonstester
• Lipidprofil
• Avføringsrutine og mikroskopi for egg og cyster, avføringskultur, Clostridium difficile-toksin; Helicobacter pylori avføringsantigen; Cryptosporidium &Isospora (hurtig syrefarging); Rotavirus antigen.
• HBsAg
• Anti-HCV
• HIV 1 og 2
• VDRL
• HLA A1
• BMI er mellom 18-21 og midjeomkrets < 90 cm hos menn og < 80 cm hos kvinner (alle 3 oppfylt).

Donor vil bli ekskludert hvis han/hun har:

• Unormale tarmbevegelser
• Kronisk alkoholinntak
• Aktivt rusmisbruk eller unnlatt å gi samtykke
• Under 18 eller over 60 år
• HBsAg, Anti HCV, HIV seropositivitet
• Gastroenteritt i løpet av de siste 2 månedene
• Inflammatorisk tarmsykdom
• Enhver malignitet
• Kronisk nyresykdom, koronarsykdom, CVA, KOLS, DM-2
• Antibiotikabruk innen 3 måneder ved påmelding.
• Transaminitt, dyslipidemi, Ova/cyste i avføring, Clostridium deficile toksin+

Prosedyre for avføringsdonor:

• Donor vil bli bedt om å følge en normal diettplan under studieprosessen, i samråd med sykehusets kostholdsekspert.
• Donor vil ikke ha tillatelse til å spise gatemat eller å spise på offentlige/familietilstelninger eller fester fra registreringstidspunktet til fullføring av protokollen.

Innsamling og klargjøring av avføring:

• Donor vil bli bedt om å samle inn og sende inn fersk avføringsprøve på dagen for den planlagte prosedyren.
• Avføringsprøve (fortrinnsvis Bristol Stool Type 4 eller 5) med en vekt på ~250 g vil anses som tilstrekkelig.
• 250 g avføringsprøve fra den valgte giveren vil bli resuspendert i 250 ml frysemedium. Dette vil bli omrørt i en blender 3 ganger i plusser på 20-30 sekunder for å få et homogent. Frysemediet vil inneholde 12,5 % glyserol og 0,9 % N saltvann.
• Den homogene suspensjonen vil deretter filtreres gjennom sterile gasbindstykker, 3-4 ganger.
• 30 ml filtrat vil bli samlet i alikvoter på 100 ml volum og dette vil bli lagret ved -80C til bruk.
• For bruk vil alikvoten som inneholder 30 ml filtrat tines ved 30 C i et varmt vannbad. 70 ml 0,9 % N saltvann vil bli tilsatt for å fylle opp volumet til 100 ml.

Avføringsprosedyre (ILBS FMT-protokoll)

• 500 ml filtrater vil bli levert gjennom UGI endoskopi inn i proksimalt jejunum [(2 til 3 minutter per 50 ml).]
• Mottakeren vil bli holdt null per oral i minst 4 timer før avføringsdryppingen.
• 100 ml nytint prøve vil bli gitt en gang i 15 dager for 3 doser
• Ikke-absorberbare antibiotika vil unngås hos pasienten fra tidspunktet for registrering i studien og terapistart.
• Intravenøs antibiotika vil bli videreført i henhold til institusjonsprotokoll ved aktiv sepsis basert på dyrking og sensitivitet.
• Pasienten vil få lov til å innta flytende diett to timer etter prosedyren.

Rådgivning og ledelse etter prosedyren

• Rifaximin, AVFØRINGSMIDLER og andre ikke-absorberbare antibiotika vil bli holdt tilbake.
• Antibiotika vil bli gitt i begge gruppene når det er klinisk indisert.

KOSTHOLD OG TRENINGSPROGRAM OG VURDERING AV OVERHOLDELSE:

Kosttilskudd:

En høy-protein lavkarbo-diett (HPLC) diett vil bli foreskrevet til pasientene. HPLC (high-protein low carbohydrate) diett vil bestå av energi som 20-25 Kcal/Kg IBW/dag (tilsvarer 700-800 Kcal mindre enn det vanlige diettinntaket), Protein som 1,2-1,5 gm/Kg IBW/dag, dvs. 30% av de totale kaloriene som proteiner, 52% av karbohydrater 18% av fett med kostfiber som 25 g/dag. Proteinkravene vil bli møtt med modulære kosttilskudd med høyt protein og lavt kaloriinnhold25,26.

Fysisk aktivitet:

Treningsprogrammet ville bestå av rask gange. Rask gange er definert som gangintensiteten på 60-70 % av deres respektive alderspredikerte maksimalpuls (målpuls) 27,28. Hastighet på 5-6 km/t anses som rask gange i de fleste studiene fortrinnsvis på tredemølle i 30-45 minutter30 eller rask gange (gå raskere enn normalt tempo, mål 5000 skritt kontinuerlig med skritteller). Samme mengde fysisk aktivitet vil bli foreskrevet til begge gruppene i 5 dager i uken i 30-45 min.

Intervensjonsvarighet: Denne dietten og treningsregimet vil bli implementert i en periode på 6 måneder

Vurdering av samsvar- Følgende tiltak vil bli iverksatt for å sikre pasientens samsvar-

1. Diettkart: - Individuelle diettskjemaer (tilpasset pasientens behov) - som nevner den totale mengden matvarer, deres mengde og husholdningsmål vil bli gitt og forklart, for en klar forståelse.
2. Daglig diett meieri: - Alle pasientene ville registrere sitt daglige kosthold i et meieri gitt til dem, for å maksimere deres etterlevelse og selvmotivasjon til å overholde den foreskrevne dietten.
3. Telefonisk oppfølging: - Ukentlig ble alle pasientene oppringt for å sjekke at de generelt overholdt den foreskrevne dietten.
4. Oppfølging i OPD: - Pasienten vil bli bedt om å følge opp i OPD etter 1 måned for å sjekke deres generelle kliniske fremgang og samsvar. Diett- og symptomdagboken vil krysssjekkes og også bekreftes med nærmeste slektning.
5. Den overordnede etterlevelsen: - Samsvarsspørreskjemaet er en av metodene for å sikre etterlevelse (annet enn kostholdsskjemaer, kostholdsdagbok, OPD-oppfølginger og telefoniske oppfølginger) og en objektiv måte å kvantifisere den totale kostholdsoverholdelsen til pasientene. I punkt nummer 5 er beregningen av Likert-skalaen (3 alternativer) veldig eksplisitt gitt, likevel er selve spørreskjemaet en modifisert versjon av den som ble brukt i studien av Abdullah Al Lahiris artikkel. Dette endrede spørreskjemaet er vedlagt i Performa. Likert-skalabasert spørreskjema24, inkludert 10 lukkede spørsmål. Svarene vil bli vurdert på en trepunkts skala, som vil være nødvendig for å avgjøre om pasientene (alltid=2, noen ganger=1 eller aldri=0) fulgte kostholdsrådene. I henhold til den totale poengsummen, som vil variere fra 0 til 20, vil pasientens etterlevelse bli klassifisert som i. 'God etterlevelse' hvis poengsummen er >15 ii. 'Delvis overholdelse' hvis poengsummen er mellom 10 og 15 iii. 'Ikke-overholdelse' hvis poengsummen er <10.

Mengden mat kommer til å være basert på hver enkelt person. Vi vil gi diettkart til hver enkelt; vi vil forklare hver enkelt person i detalj om fordelene med protein lavt karbohydrat og viktigheten av kvantifisering av dietten. Når det gjelder omfanget av samsvar, er det også validert og brukt, og jeg har lagt ved spørreskjemaene i Performa. Eksemplarisk kostholdskart er også vedlagt i Performa.

Overholdelse av fysisk aktivitet: -

1. Første økt på studieanlegget: Pasienten vil bli bedt om å fullføre én økt med den foreskrevne øvelsen på studieanlegget slik at de forstår kuren godt og kan gjøre resten hjemme.
2. Aktivitetsloggbok: Pasienter vil bli bedt om å fylle aktivitetsloggbøkene på daglig basis og ta den med hver gang de besøker OPD.
3. Det måles med selvrapporteringsskjemaer. Det er så mange selvrapporterende spørreskjemaer som Modifiable Activity Questionnaire (MAQ), Previous Week Modifiable Activity Questionnaire (PWMAQ), Recent Physical Activity Questionnaire (RPAQ), International Physical Activity Questionnaires (IPAQ), Previous Day Physical Activity Recall (PDPAR), og 7-dagers tilbakekalling av fysisk aktivitet (PAR) 31,. International Physical Activity Questionnaire (IPAQ) - Kort skjema: IPAQ-SF vil bli brukt ved baseline og ved slutten av intervensjonsperioden for å vurdere type fysisk aktivitet og sittetid. Total fysisk aktivitet uttrykkes i MET-min/uke og tid brukt i sittende vil bli beregnet i løpet av de siste 7 dagene. I henhold til MET-min/uke vil fysisk aktivitetsnivå til pasientene bli kategorisert som Kraftig, Moderat eller Lav. Likeledes vil endringer i MET-min/uke uttrykke ikke bare pasientens etterlevelse, men også ta hensyn til eventuelle tilleggsaktiviteter utført av pasienten, bortsett fra de minimum som er foreskrevet. person som har ønsket kroppsvekt. Derfor i løpet av studieperioden (dvs. inntil giveren donerer avføringsprøven i studien) vil donoren bli bedt om å følge sitt vanlige normale kosthold, og det ville ikke være noen spesifikasjoner for 'typen' diett han skal spise. For å unngå eventuelle gastrointestinale lidelser som vil nødvendiggjøre bruk av antibiotika og andre medikamenter som hindrer avføringsdonasjonsprosessen, vil denne sunne giveren bli bedt om å avstå fra å spise gatemat. Han står imidlertid fritt til å spise på familiesammenkomster og fester, hvis noen.

OPPFØLGING AV PASIENTER [VED BASELINE, 3 MO, 6 MO OG 12 MO].

Livsstilssvikt er definert som kostholdsbehandling skal sikre et inntak redusert med 500 til 1000 kcal/dag fra dagens nivå. Lavkaloridietter (LCD) som inneholder 1000 til 1200 kcal/dag for de fleste kvinner og mellom 1200 kcal/dag og 1600 kcal/dag for menn. Fysisk aktivitet (gåturer, dans, hagearbeid, husarbeid og lag- eller individuelle idretter) bør økes sakte til et nivå som sikrer minst 30 minutter eller mer med moderat intensitet fysisk aktivitet på de fleste, og helst alle, ukedager for 6 måneder kunne ikke redusere vekten med 5 % merket som livsstilssvikt.

Kroppsvekt: - elektronisk veiemaskin.

Midje- og hoftemål:- midjeomkretsen skal måles i midtpunktet mellom nedre margin av de siste følbare ribbeina og toppen av hoftekammen, ved hjelp av en strekkfast tape som gir en konstant 100 g spenning. Hofteomkretsen skal måles rundt den bredeste delen av baken, med tapen parallelt med gulvet. 14

Kliniske laboratorievurderinger. Insulinresistens (HOMA-IR): - (Insulinresistens (HOMA-IR): - fastende insulin (microU/L) x fastende glukose (nmol/L)/22,5.) og insulin blir målt ved en kjemiluminescerende immunoassay (CLIA) 15 brukes ofte i våre laboratorier for måling av insulinkonsentrasjon i prøvene våre.

Høysensitivt C-reaktivt protein, fibrinogen TNF-alfa, adiponectin, leptin, Ghrelin.: - de måles med det spesielle ELISA-settet.

Analysemetoder for tarmmikrobiom: - Denne teknikken tillater rask sekvensering av flere prøver på en gang, og gir tusenvis av sekvenser per prøve. Spesifikt genererte vi et sett med 96 emulsjonspolymerasekjedereaksjon (PCR) fusjonsprimere som inneholder de 454 emulsjons-PCR-linkerne på 27F-primeren (AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3=) og 355R' (5=-GCTGCCTCCCGTAGGAGT-3=) og forskjellige 8- grunnstrekkode mellom A-adapteren og 27F-primeren.8 Dermed ble hver avføringsprøve amplifisert med unike strekkodede fremre 16S ribosomale RNA-primere, og deretter ble opptil 96 prøver slått sammen og utsatt for emulsjons-PCR og pyrosekvensert. 16

Serumtranskriptom: - Transkriptomikkteknologier er teknikkene som brukes til å studere en organismes transkriptom, summen av alle dens RNA-transkripsjoner. Informasjonsinnholdet til en organisme registreres i DNAet til dens genom og uttrykkes gjennom transkripsjon. Her fungerer mRNA som et forbigående mellomliggende molekyl i informasjonsnettverket, mens ikke-kodende RNA-er utfører flere forskjellige funksjoner. Et transkriptom fanger et øyeblikksbilde i tid av de totale transkripsjonene som er tilstede i en celle. De første forsøkene på å studere hele transkriptomet begynte tidlig på 1990-tallet, og teknologiske fremskritt siden slutten av 1990-tallet har gjort transkriptomi til en utbredt disiplin. Transcriptomics har blitt definert av gjentatte teknologiske innovasjoner som transformerer feltet. Det er to viktige moderne teknikker på feltet: mikroarrayer, som kvantifiserer et sett med forhåndsbestemte sekvenser, og RNA-sekvensering (RNA-Seq), som bruker sekvensering med høy gjennomstrømning for å fange opp alle sekvenser. 17

Analysemetode for kroppssammensetning: - Vanlige vurderinger er antropometriske og inkluderer vekt, statur, abdominal omkrets og hudfoldmålinger. 18 Vurdering av overholdelse av kosthold og treningsprogram: - ved antall spørreskjemaer stilt under hvert besøk av pasienten på sykehuset.

Avføringsprøve for mikrobiomanalyse vil bli samlet inn på dag 0,7, 90 og 180. Alle skadevirkningene vil bli overvåket og varslet.

Studiepopulasjon: 18-55 år med NAFLD og

• BMI ≤ 35 eller
• Kroppsmasseindeks (BMI) er ≤30 til 34,9 kg/m2 med minst én behandlet eller ubehandlet komorbid tilstand (hypertensjon, dyslipidemi, kardiovaskulær sykdom, glukoseintoleranse, søvnapné, NASH).

Gikk på hepatologi OPD. Studiedesign: Randomisert kontrollert studie Studieperiode: Ett år fra etikkgodkjenning. Prøvestørrelse: 110 (55 tilfeller i hver gruppe) Intervensjon: Forsøkspersonene vil få FMT gjennom UGI endoskopi. De vil bli administrert den behandlede fekale mikrobiotaprøven samlet fra mager, frisk donor i en periode på 0/15/30 dager.

OPPFØLGING AV PASIENTER [VED BASELINE, 3 MO, 6 MO OG 12 MO]

• Kroppsvekt
• Midje- og hoftemål
• Kliniske laboratorievurderinger
• Insulinresistens (HOMA-IR) (Insulinresistens (HOMA-IR): - fastende insulin (microU/L) x fastende glukose (nmol/L)/22,5.)
• Høysensitivt C-reaktivt protein, fibrinogen TNF-alfa, adiponectin, leptin, Gherlin.
• Analyse av tarmmikrobiom
• Serum transkriptom
• Kroppssammensetningsanalyse Vurdering av etterlevelse av kosthold og treningsprogram
• Avføringsprøve for mikrobiomanalyse vil bli samlet inn på dag 0,7, 90 og 180, 360
• Alle skadevirkningene vil bli overvåket og varslet. Overvåking og vurdering: -alle parametere for målet og også bemerket eventuelle negative effekter.

Bivirkninger: diaré, lungebetennelse, magesmerter, forstoppelse, kvalme oppkast, feber og død Stopperegel: Ved noen av bivirkningene under behandlingen.

Etiske problemstillinger i studien og planer om å ta opp disse problemene: Ingen