Wpływ przeszczepu mikroflory kałowej na masę ciała otyłych pacjentów z niealkoholową stłuszczeniową chorobą wątroby

Cel i cele.

Hipoteza • Hipoteza zerowa: Nie ma różnicy między przeszczepem mikrobiomu kałowego dawcy Lean a brakiem przeszczepu mikrobiomu kałowego w odniesieniu do utraty wagi u osób otyłych z niealkoholową stłuszczeniową chorobą wątroby

• Hipoteza alternatywna: Przeszczep mikroflory kałowej od szczupłego dawcy doprowadzi do większej utraty wagi u osób otyłych z niealkoholową stłuszczeniową chorobą wątroby w porównaniu z brakiem przeszczepu mikrobioty kałowej u osób otyłych z niealkoholową stłuszczeniową chorobą wątroby

CEL: Wpływ przeszczepu mikroflory kałowej na wagę u otyłych pacjentów z niealkoholową stłuszczeniową chorobą wątroby: pilotażowe, randomizowane, kontrolowane badanie.

Technika FMT:

Kryteria dawcy kału Zidentyfikowany zostanie zdrowy pojedynczy dawca, który będzie uniwersalnym dawcą dla wszystkich pacjentów włączonych do badania.

Dawca zostanie przebadany

• Rutynowe badania laboratoryjne
• Hemogram
• Cukier we krwi na czczo
• Testy czynnościowe wątroby
• Profil lipidowy
• Rutyna i badanie mikroskopowe kału w kierunku komórek jajowych i torbieli, posiew kału, toksyna Clostridium difficile; antygen kału Helicobacter pylori; Cryptosporidium & Isospora (barwienie kwasoodporne); Antygen rotawirusa.
• HBsAg
• anty-HCV
• HIV 1 i 2
• VDRL
• HLA A1
• BMI wynosi od 18 do 21, a obwód talii < 90 cm u mężczyzn i < 80 cm u kobiet (wszystkie 3 spełnione).

Dawca zostanie wykluczony, jeśli ma:

• Nieprawidłowe ruchy jelit
• Przewlekłe spożywanie alkoholu
• Nadużywanie substancji czynnych lub brak zgody
• Mniej niż 18 lub więcej niż 60 lat
• HBsAg, anty HCV, seropozytywność HIV
• Zapalenie żołądka i jelit w ciągu ostatnich 2 miesięcy
• Zapalna choroba jelit
• Wszelkie nowotwory złośliwe
• Przewlekła choroba nerek, choroba wieńcowa, CVA, POChP, DM-2
• Stosowanie antybiotyków w ciągu 3 miesięcy w momencie rejestracji.
• Transaminitis, dyslipidemia, komórki jajowe/torbiele w stolcu, toksyna Clostridium deficile+

Procedura dawcy kału:

• Dawca zostanie poproszony o przestrzeganie normalnego planu diety podczas procesu badania, w porozumieniu z dietetykiem szpitalnym.
• Dawca nie będzie mógł jeść ulicznych potraw ani jeść podczas publicznych/rodzinnych uroczystości lub przyjęć od momentu rejestracji do zakończenia protokołu.

Zbieranie i przygotowanie stolca:

• Dawca zostanie poproszony o pobranie i dostarczenie świeżej próbki kału w dniu planowanego zabiegu.
• Próbka kału (najlepiej Bristol Stool Typ 4 lub 5) o masie około 250 g zostanie uznana za odpowiednią.
• Próbka kału o masie 250 g od wybranego dawcy zostanie ponownie zawieszona w 250 ml podłoża do zamrażania. To będzie mieszane w blenderze 3 razy w plusie 20-30 sekund, aby uzyskać homogenat. Pożywka do zamrażania będzie zawierała 12,5% glicerolu i 0,9% soli fizjologicznej.
• Jednorodna zawiesina będzie następnie filtrowana przez sterylne kawałki gazy, 3-4 razy.
• 30 ml przesączu zostanie zebrane w objętości 100 ml i będzie przechowywane w temperaturze -80°C aż do użycia.
• Do użytku podwielokrotność zawierająca 30 ml przesączu zostanie rozmrożona w temperaturze 30°C w ciepłej łaźni wodnej. Zostanie dodane 70 ml soli fizjologicznej 0,9% N, aby uzupełnić objętość do 100 ml.

Procedura podawania stolca (protokół ILBS FMT)

• 500 ml filtratów zostanie dostarczonych przez endoskopię UGI do proksymalnego jelita czczego [(2 do 3 minut na 50 ml).]
• Biorca będzie utrzymywany w stanie zerowym doustnie przez co najmniej 4 godziny przed wkropleniem stolca.
• 100 ml świeżo rozmrożonej próbki będzie podawane raz na 15 dni w 3 dawkach
• Pacjent będzie unikał antybiotyków niewchłanialnych od momentu włączenia do badania i rozpoczęcia terapii.
• Dożylne podawanie antybiotyków będzie kontynuowane zgodnie z protokołem instytucji w przypadku aktywnej posocznicy w oparciu o posiew i wrażliwość.
• Po dwóch godzinach od zabiegu pacjent będzie mógł spożywać płynną dietę.

Porady i zarządzanie po zabiegu

• Ryfaksymina, ŚRODKI PRZECZYSZCZAJĄCE i inne niewchłanialne antybiotyki zostaną wstrzymane.
• Antybiotyki będą podawane w obu grupach, jeśli istnieją wskazania kliniczne.

PROGRAM DIETY I ĆWICZEŃ ORAZ OCENA ZGODNOŚCI:

Interwencja dietetyczna:

Pacjentom przepisuje się dietę wysokobiałkową o niskiej zawartości węglowodanów (HPLC). Dieta HPLC (wysokobiałkowa i niskowęglowodanowa) zawierałaby energię w ilości 20-25 Kcal/kg IBW/dzień (co odpowiada 700-800 Kcal mniej niż zwykłe spożycie), Białko w ilości 1,2-1,5 g/kg IBW/dzień tj. 30% całkowitej liczby kalorii w postaci białek, 52% węglowodanów 18% tłuszczów z błonnikiem jako 25 g/dzień. Zapotrzebowanie na białko zostałoby zaspokojone dzięki modułowym, wysokobiałkowym, niskokalorycznym suplementom25,26.

Aktywność fizyczna:

Program ćwiczeń składa się z szybkiego marszu. Szybki marsz definiuje się jako intensywność marszu na poziomie 60-70% maksymalnego tętna przewidzianego dla danego wieku (tętno docelowe) 27,28. Prędkość 5-6 km/h uznawana za szybki marsz w większości badań, najlepiej na bieżni przez 30-45 minut30 lub szybki marsz (chodzenie szybsze niż normalne tempo, mierzyć krokomierzem 5000 kroków w sposób ciągły). Taka sama ilość aktywności fizycznej byłaby zalecana obu grupom przez 5 dni w tygodniu przez 30-45 min

Czas trwania interwencji: Ta dieta i schemat ćwiczeń byłyby wdrażane przez okres 6 miesięcy

Ocena przestrzegania zaleceń — Podjęte zostaną następujące środki w celu zapewnienia przestrzegania zaleceń przez pacjentów:

1. Wykresy diet: - Indywidualne wykresy diet (dostosowane do wymagań pacjenta) - zawierające całkowitą ilość produktów żywnościowych, ich ilość i miarę gospodarstwa domowego zostaną dostarczone i wyjaśnione, dla jasnego zrozumienia.
2. Codzienna dieta nabiałowa: - Wszyscy pacjenci rejestrowali swoją codzienną dietę w podanym im nabiale, aby zmaksymalizować ich przestrzeganie i motywację do przestrzegania przepisanej diety.
3. Kontrole telefoniczne: - Co tydzień wszyscy pacjenci będą telefonowani w celu sprawdzenia ich ogólnej zgodności z zaleconą dietą.
4. Kontynuacja w OPD: - Pacjent zostanie poproszony o kontynuację w OPD po 1 miesiącu, aby sprawdzić ogólny postęp kliniczny i przestrzeganie zaleceń. Dieta i dziennik objawów byłyby sprawdzane krzyżowo, a także potwierdzane przez najbliższego krewnego.
5. Ogólne przestrzeganie zaleceń: - Kwestionariusz przestrzegania zaleceń jest jedną z metod zapewniania przestrzegania zaleceń (innych niż wykresy diet, dzienniczek diet, wizyty kontrolne OPD i rozmowy telefoniczne) oraz obiektywny sposób ilościowego określenia ogólnego przestrzegania zaleceń dietetycznych przez pacjentów. W punkcie 5 wyliczenie skali Likerta (3 warianty) jest bardzo wyraźnie podane, niemniej aktualny kwestionariusz jest zmodyfikowaną wersją tego, który wykorzystano w badaniu artykułu Abdullaha Al Lahiri. Ten zmodyfikowany kwestionariusz jest dołączony do Performa. Kwestionariusz oparty na skali Likerta24, zawierający 10 pytań zamkniętych. Odpowiedzi byłyby oceniane na trzystopniowej skali, która byłaby wymagana do określenia, czy pacjenci (zawsze=2, czasami=1 lub nigdy=0) przestrzegali zaleceń dietetycznych. Zgodnie z ogólną punktacją, która mieściłaby się w przedziale od 0 do 20, przestrzeganie zaleceń przez pacjenta zostałoby sklasyfikowane jako: i. „Dobre przyleganie”, jeśli wynik wynosi >15 ii. „Częściowe przestrzeganie”, jeśli wynik wynosi od 10 do 15 iii. „Brak przestrzegania zaleceń”, jeśli wynik wynosi <10.

Ilość jedzenia będzie oparta na każdej osobie. Każdej osobie podamy jadłospis; szczegółowo wyjaśnimy każdej osobie korzyści płynące z białka o niskiej zawartości węglowodanów oraz znaczenie ilościowego określenia diety. Jeśli chodzi o skalę zgodności, to jest ona również zwalidowana i stosowana, a ankiety załączam w Performie. Przykładowy jadłospis również w załączniku Performa.

Zgodność z przepisami dotyczącymi aktywności fizycznej: -

1. Pierwsza sesja w placówce badawczej: Pacjent zostanie poproszony o wykonanie jednej sesji przepisanych ćwiczeń w placówce badawczej, aby dobrze zrozumiał schemat i mógł wykonać resztę w domu.
2. Dzienniczek aktywności: Pacjenci będą proszeni o codzienne wypełnianie dzienników aktywności i przynoszenie ich za każdym razem, gdy odwiedzają OPD.
3. Mierzy się go za pomocą kwestionariuszy samoopisowych. Istnieje wiele kwestionariuszy samoopisowych, takich jak modyfikowalny kwestionariusz aktywności (MAQ), modyfikowalny kwestionariusz aktywności z poprzedniego tygodnia (PWMAQ), kwestionariusz ostatniej aktywności fizycznej (RPAQ), międzynarodowe kwestionariusze aktywności fizycznej (IPAQ), przypomnienie aktywności fizycznej z poprzedniego dnia (PDPAR), i 7-dniowe przypomnienie aktywności fizycznej (PAR) 31,. Międzynarodowy kwestionariusz aktywności fizycznej (IPAQ) — wersja skrócona: IPAQ-SF zostanie wykorzystany na początku i na końcu okresu interwencji w celu oceny rodzaju aktywności fizycznej i czasu siedzenia. Całkowita aktywność fizyczna wyrażona jest w MET-min/tydzień, a czas spędzony w pozycji siedzącej będzie liczony w ciągu ostatnich 7 dni. Zgodnie z MET-min/tydzień poziom aktywności fizycznej pacjentów zostałby sklasyfikowany jako energiczny, umiarkowany lub niski. Podobnie zmiany w MET-min/tydzień wyrażałyby nie tylko podporządkowanie się pacjenta, ale także uwzględniałyby wszelkie dodatkowe czynności wykonywane przez pacjenta inne niż zalecane minimalne Dieta dawcy podczas FMT Wybrany dawca to samotny, zdrowy, szczupły młody osoba o pożądanej masie ciała. Dlatego w okresie studiów (tj. dopóki dawca nie odda próbki kału w badaniu) dawca byłby proszony o przestrzeganie swojej zwykłej normalnej diety i nie byłoby żadnych specyfikacji dotyczących „rodzaju” diety, którą powinien spożywać. Niemniej jednak, aby uniknąć ewentualności zaburzeń żołądkowo-jelitowych, które wymagałyby stosowania antybiotyków i innych leków utrudniających proces dawstwa kału, ten zdrowy dawca byłby proszony o powstrzymanie się od jedzenia ulicznego jedzenia. Jednak może jeść na rodzinnych spotkaniach i przyjęciach, jeśli takie istnieją.

OBSERWACJA PACJENTÓW [POCZĄTKOWO, 3 MIESIĄC, 6 MIESIĄC I 12 MIESIĄC].

Niepowodzenie stylu życia definiuje się jako Terapia dietetyczna powinna zapewniać zmniejszenie spożycia od 500 do 1000 kcal/dobę w stosunku do obecnego poziomu. Diety niskokaloryczne (LCD) zawierające od 1000 do 1200 kcal dziennie dla większości kobiet i od 1200 kcal dziennie do 1600 kcal dziennie dla mężczyzn. Aktywność fizyczną (spacery, taniec, prace w ogrodzie, prace domowe oraz sporty zespołowe lub indywidualne) należy powoli zwiększać do poziomu, który zapewnia co najmniej 30 minut aktywności fizycznej o umiarkowanej intensywności przez większość, a najlepiej we wszystkie dni tygodnia przez 6 miesięcy nie udało się zredukować wagi o 5%, co oznacza niepowodzenie stylu życia.

Masa ciała: - waga elektroniczna.

Pomiary talii i bioder: obwód talii należy mierzyć w punkcie środkowym między dolnym brzegiem ostatnich wyczuwalnych żeber a górną krawędzią grzebienia biodrowego, używając taśmy odpornej na rozciąganie, która zapewnia stałe napięcie 100 g. Obwód bioder należy mierzyć wokół najszerszej części pośladków, taśmą równolegle do podłogi. 14

Oceny laboratorium klinicznego. Oporność na insulinę (HOMA-IR): - (Insulinooporność (HOMA-IR): - insulina na czczo (mikroU/l) x glukoza na czczo (nmol/l)/22,5) i insulina jest mierzona za pomocą chemiluminescencyjnego testu immunologicznego (CLIA) 15 jest powszechnie używany w naszych laboratoriach do pomiaru stężenia insuliny w naszych próbkach.

Wysokoczułe białko C-reaktywne, fibrynogen TNF-alfa, adiponektyna, leptyna, grelina: - oznacza się je specjalnym zestawem ELISA.

Metody analizy mikrobiomu jelitowego: - Ta technika umożliwia szybkie sekwencjonowanie wielu próbek jednocześnie, dając tysiące odczytów sekwencji na próbkę. W szczególności wygenerowaliśmy zestaw 96 starterów fuzyjnych do reakcji łańcuchowej polimerazy emulsyjnej (PCR), które zawierają 454 łączników emulsyjnego PCR na starterze 27F (AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3=) i 355R' (5=-GCTGCCTCCCGTAGGAGT-3=) i różne 8- podstawowy kod kreskowy między adapterem A a starterem 27F.8 W ten sposób każdą próbkę kału amplifikowano za pomocą unikalnych starterów rybosomalnego RNA 16S z kodem kreskowym do przodu, a następnie zebrano do 96 próbek i poddano emulsyjnemu PCR i pirosekwencjonowaniu. 16

Transkryptom surowicy: - Technologie transkryptomiczne to techniki stosowane do badania transkryptomu organizmu, sumy wszystkich jego transkryptów RNA. Zawartość informacyjna organizmu jest zapisywana w DNA jego genomu i wyrażana poprzez transkrypcję. Tutaj mRNA służy jako przejściowa cząsteczka pośrednicząca w sieci informacyjnej, podczas gdy niekodujące RNA pełnią dodatkowe różnorodne funkcje. Transkryptom przechwytuje migawkę w czasie wszystkich transkryptów obecnych w komórce. Pierwsze próby zbadania całego transkryptomu rozpoczęły się na początku lat 90., a postęp technologiczny od późnych lat 90. sprawił, że transkryptomika stała się powszechną dyscypliną. Transkryptomika została zdefiniowana przez powtarzające się innowacje technologiczne, które zmieniają tę dziedzinę. Istnieją dwie kluczowe współczesne techniki w tej dziedzinie: mikromacierze, które określają ilościowo zestaw z góry określonych sekwencji, oraz sekwencjonowanie RNA (RNA-Seq), które wykorzystuje sekwencjonowanie o dużej przepustowości do wychwycenia wszystkich sekwencji. 17

Metoda analizy składu ciała: - powszechne oceny są antropometryczne i obejmują pomiary wagi, wzrostu, obwodu brzucha i fałdów skórnych. 18 Ocena przestrzegania diety i programu ćwiczeń: - na podstawie liczby ankiet zadawanych podczas każdej wizyty pacjenta w szpitalu.

Próbka kału do analizy mikrobiomu zostanie pobrana w dniach 0, 7, 90 i 180. Wszystkie negatywne skutki będą monitorowane i zgłaszane.

Badana populacja: 18-55 lat z NAFLD i

• BMI ≤ 35 lub
• Wskaźnik masy ciała (BMI) wynosi ≤30 do 34,9 kg/m2 przy co najmniej jednej leczonej lub nieleczonej chorobie współistniejącej (nadciśnienie, dyslipidemia, choroba układu krążenia, nietolerancja glukozy, bezdech senny, NASH).

Uczęszczał na hepatologię OPD. Projekt badania: Randomizowana, kontrolowana próba Okres badania: Jeden rok od zatwierdzenia etycznego. Wielkość próby: 110 (55 przypadków w każdej grupie) Interwencja: Osobnicy otrzymają FMT poprzez endoskopię UGI. Będą im podawać przetworzoną próbkę mikroflory kałowej pobraną od szczupłego zdrowego dawcy przez okres 0/15/30 dni.

OBSERWACJA PACJENTÓW [POCZĄTKOWO, 3 MIESIĄC, 6 MIESIĄC I 12 MIESIĄC]

• Masy ciała
• Pomiary talii i bioder
• Oceny laboratorium klinicznego
• Insulinooporność (HOMA-IR) (Insulinooporność (HOMA-IR): - insulina na czczo (mikroU/l) x glukoza na czczo (nmol/l)/22,5.)
• Wysokoczułe białko C-reaktywne, fibrynogen TNF-alfa, adiponektyna, leptyna, korniszon.
• Analiza mikrobiomu jelitowego
• Transkryptom surowicy
• Analiza składu ciała Ocena przestrzegania diety i programu ćwiczeń
• Próbka kału do analizy mikrobiomu zostanie pobrana w dniach 0,7, 90 i 180, 360
• Wszystkie negatywne skutki będą monitorowane i zgłaszane. Monitorowanie i ocena: -wszystkie parametry celu, a także odnotowane wszelkie negatywne skutki.

Działania niepożądane: biegunka, zapalenie płuc, bóle brzucha, zaparcia, nudności wymioty, gorączka i śmierć Zasada przerwania: W przypadku wystąpienia któregokolwiek z objawów niepożądanych w trakcie terapii.

Kwestie etyczne w badaniu i plany rozwiązania tych kwestii: Brak