Effecten van fecale microbiota-transplantatie op gewicht bij zwaarlijvige patiënten met niet-alcoholische leververvetting

Doel &Doelstellingen.

Hypothese • Nulhypothese: er is geen verschil tussen de magere donor fecale microbiota-transplantatie en geen fecale microbiota-transplantatie met betrekking tot gewichtsverlies bij zwaarlijvige personen met niet-alcoholische leververvetting

• Alternatieve hypothese: Fecale microbiota-transplantatie met magere donor zal leiden tot meer gewichtsverlies bij zwaarlijvige personen met niet-alcoholische leververvetting in vergelijking met geen fecale microbiota-transplantatie bij obese personen met niet-alcoholische leververvetting

DOEL: Effecten van fecale microbiota-transplantatie op het gewicht bij zwaarlijvige patiënten met niet-alcoholische leververvetting: een pilot-gerandomiseerde gecontroleerde studie.

FMT-techniek:

Criteria ontlastingdonor Er zal één gezonde donor worden geïdentificeerd die de universele donor zal zijn voor alle patiënten die aan het onderzoek deelnemen.

De donor wordt gescreend

• Routinematige laboratoriumtests
• Hemogram
• Nuchtere bloedsuikerspiegel
• Leverfunctietest
• Lipide profiel
• Ontlastingsroutine en microscopie voor eicellen en cysten, ontlastingscultuur, Clostridium difficile-toxine; Helicobacter pylori ontlastingsantigeen; Cryptosporidium &Isospora (zuurvaste vlek); Rotavirus-antigeen.
• HBsAg
• Anti-HCV
• Hiv 1 & 2
• VDRL
• HLA A1
• BMI is tussen 18-21 en tailleomtrek < 90 cm bij mannen en < 80 cm bij vrouwen (alle 3 vervuld).

Donor wordt uitgesloten als hij/zij:

• Abnormale stoelgang
• Chronische alcoholinname
• Misbruik van werkzame stoffen of het niet geven van toestemming
• Minder dan 18 jaar of ouder dan 60 jaar
• HBsAg, Anti HCV, HIV-seropositiviteit
• Gastro-enteritis in de afgelopen 2 maanden
• Inflammatoire darmziekte
• Elke maligniteit
• Chronische nierziekte, coronaire hartziekte, CVA, COPD, DM-2
• Antibioticagebruik binnen 3 maanden bij inschrijving.
• Transaminitis, dyslipidemie, eicellen/cyste in ontlasting, Clostridium deficile toxine+

Ontlastingdonorprocedure:

• In overleg met de diëtist van het ziekenhuis wordt de donor geadviseerd om tijdens het studieproces een normaal dieet te volgen.
• Het is de donor niet toegestaan ​​om straatvoedsel te eten of te eten bij openbare/familiefeesten of feesten vanaf het moment van inschrijving tot voltooiing van het protocol.

Ontlasting verzamelen en voorbereiden:

• De donor wordt geadviseerd om op de dag van de geplande procedure een vers ontlastingsmonster te verzamelen en in te dienen.
• Ontlastingsspecimen (bij voorkeur Bristol Stool Type 4 of 5) met een gewicht van ∼ 250 g wordt als voldoende beschouwd.
• 250 g ontlastingsmonster van de geselecteerde donor wordt geresuspendeerd in 250 ml vriesmedium. Dit wordt 3 keer in een blender geroerd in plussen van 20-30 seconden om een ​​homogenaat te krijgen. De vriesmedia bevatten 12,5% glycerol en 0,9% N-zoutoplossing.
• De homogene suspensie wordt vervolgens 3-4 keer door steriele gaasjes gefilterd.
• Er wordt 30 ml filtraat verzameld in een aliquot van 100 ml volume en dit wordt tot gebruik bij -80°C bewaard.
• Voor gebruik wordt het aliquot met 30 ml filtraat ontdooid bij 30°C in een warmwaterbad. Er wordt 70 ml 0,9% N zoutoplossing toegevoegd om het volume op 100 ml te brengen.

Ontlastingtoedieningsprocedure (ILBS FMT-protocol)

• 500 ml filtraten worden via de UGI-endoscopie afgeleverd in het proximale jejunum [(2 tot 3 minuten per 50 ml).]
• De ontvanger wordt gedurende ten minste 4 uur voorafgaand aan het indruppelen van de ontlasting nihil per oraal gehouden.
• Eens in de 15 dagen wordt 100 ml vers ontdooid monster gegeven voor 3 doses
• Niet-absorbeerbare antibiotica zullen bij de patiënt worden vermeden vanaf het moment van opname in de studie en de start van de therapie.
• Intraveneuze antibiotica worden voortgezet volgens instellingsprotocol in geval van actieve sepsis op basis van kweek en gevoeligheid.
• Twee uur na de procedure mag de patiënt een vloeibaar dieet consumeren.

Advies en beheer na de procedure

• Rifaximin, laxeermiddelen en andere niet-absorbeerbare antibiotica zullen worden ingehouden.
• Antibiotica zullen in beide groepen worden gegeven wanneer dit klinisch geïndiceerd is.

DIEET EN BEWEGINGSPROGRAMMA EN BEOORDELING VAN NALEVING:

Dieetinterventie:

Een eiwitrijk dieet met weinig koolhydraten (HPLC) zou aan de patiënten worden voorgeschreven. HPLC (high-protein low carb) dieet zou bestaan ​​uit energie van 20-25 Kcal/Kg IBW/dag (wat neerkomt op 700-800 Kcal minder dan de gebruikelijke inname via de voeding), Eiwitten van 1,2-1,5 g/Kg IBW/dag d.w.z. 30% van de totale calorieën als eiwitten, 52% koolhydraten 18% vetten met voedingsvezels als 25 g/dag. Aan de eiwitbehoefte zou worden voldaan met modulaire eiwitrijke, caloriearme supplementen25,26.

Fysieke activiteit:

Het oefenprogramma zou bestaan ​​uit stevig wandelen. Stevig wandelen wordt gedefinieerd als de loopintensiteit van 60-70% van hun respectievelijke door leeftijd voorspelde maximale hartslag (streefhartslag) 27,28. Snelheid van 5-6 km/u beschouwd als stevig wandelen in de meeste onderzoeken, bij voorkeur op een loopband gedurende 30-45 minuten30 of stevig wandelen (sneller lopen dan normaal tempo, continu 5000 stappen meten met stappenteller). Dezelfde hoeveelheid fysieke activiteit zou aan beide groepen worden voorgeschreven gedurende 5 dagen per week gedurende 30-45 minuten

Duur van de interventie: Dit dieet- en lichaamsbewegingsregime zou gedurende een periode van 6 maanden worden toegepast

Beoordeling van naleving- De volgende maatregelen zouden worden genomen om de naleving van de patiënten te waarborgen-

1. Dieetschema's: - Individuele dieetschema's (aangepast aan de eisen van de patiënt) - met vermelding van de totale hoeveelheid voedselproducten, hun hoeveelheid en huishoudelijke maatstaf worden verstrekt en uitgelegd, voor een duidelijk begrip.
2. Dagelijkse voeding zuivel: - Alle patiënten noteerden hun dagelijkse voeding in een zuivel die aan hen werd gegeven, om hun therapietrouw en zelfmotivatie te maximaliseren om zich aan het voorgeschreven dieet te houden.
3. Telefonische follow-ups: - Wekelijks zouden alle patiënten worden opgebeld om na te gaan of ze zich in het algemeen aan het voorgeschreven dieet hielden.
4. Follow-up in OPD: - Patiënt wordt gevraagd om na 1 maand een follow-up in de OPD te doen om hun algehele klinische voortgang en therapietrouw te controleren. Het dieet- en symptoomdagboek zou worden gecontroleerd en ook worden bevestigd met het naaste familielid.
5. De algehele naleving: - De nalevingsvragenlijst is een van de methoden om naleving te garanderen (anders dan dieetschema's, dieetdagboek, OPD-follow-ups en telefonische follow-ups) en een objectieve manier om de algehele dieettrouw van de patiënten te kwantificeren. In punt 5 wordt de berekening van de Likert-schaal (3 opties) heel expliciet gegeven, maar de eigenlijke vragenlijst is een gewijzigde versie van de vragenlijst die werd gebruikt bij de bestudering van het artikel van Abdullah Al Lahiri. Deze aangepaste vragenlijst is bijgevoegd in de Performa. Op Likertschaal gebaseerde vragenlijst24, inclusief 10 gesloten vragen. De antwoorden zouden worden beoordeeld op een driepuntsschaal, die nodig zou zijn om te bepalen of de patiënten (altijd=2, soms=1 of nooit=0) het dieetadvies opvolgden. Volgens de algemene score, die zou variëren van 0 tot 20, zou de therapietrouw van de patiënt worden geclassificeerd als i. 'Goede therapietrouw' als de score >15 is ii. 'Gedeeltelijke therapietrouw' als de score tussen 10 en 15 ligt iii. 'Niet-naleving' als de score <10 is.

De hoeveelheid voedsel is afhankelijk van elk individu. We zullen aan elk individu een voedingsschema geven; we zullen aan elk individu in detail uitleggen wat de voordelen zijn van eiwitarm koolhydraat en het belang van de kwantificering van het dieet. Wat betreft de mate van naleving, deze is gevalideerd en ook gebruikt en ik heb de vragenlijsten bijgevoegd in de Performa. Voorbeeld voedingsschema ook bijgevoegd in de Performa.

Lichamelijke activiteit naleving: -

1. Eerste sessie in het onderzoekscentrum: De patiënt wordt gevraagd om één sessie van de voorgeschreven oefening in het onderzoekscentrum uit te voeren, zodat ze het regime goed begrijpen en de rest thuis kunnen doen.
2. Activiteitenlogboek: Patiënten wordt gevraagd om dagelijks de activiteitenlogboeken in te vullen en mee te nemen telkens wanneer ze de OPD bezoeken.
3. Het wordt gemeten door middel van zelfrapportagevragenlijsten. Er zijn zoveel zelfrapportagevragenlijsten zoals Modifiable Activity Questionnaire (MAQ), Previous Week Modifiable Activity Questionnaire (PWMAQ), Recent Physical Activity Questionnaire (RPAQ), International Physical Activity Questionnaires (IPAQ), Previous Day Physical Activity Recall (PDPAR), en 7-daagse terugroepactie voor fysieke activiteit (PAR) 31,. International Physical Activity Questionnaire (IPAQ) - verkort formulier: IPAQ-SF zal worden gebruikt bij aanvang en aan het einde van de interventieperiode om het type fysieke activiteit en zittijd te beoordelen. De totale fysieke activiteit wordt uitgedrukt in MET-min/week en de zittende tijd wordt berekend gedurende de laatste 7 dagen. Volgens het MET-min/week fysieke activiteitsniveau van de patiënten zou worden gecategoriseerd als Krachtig, Matig of Laag. Evenzo zouden veranderingen in de MET-min/week niet alleen de therapietrouw van de patiënt uitdrukken, maar ook rekening houden met eventuele aanvullende activiteiten die door de patiënt worden gedaan, behalve de minimaal voorgeschreven. Donordieet tijdens FMT De geselecteerde donor is een enkele gezonde magere jonge persoon met een gewenst lichaamsgewicht. Vandaar dat tijdens de studieperiode (d.w.z. totdat de donor het ontlastingsmonster in het onderzoek doneert) zou de donor worden gevraagd om zijn gebruikelijke normale dieet te volgen en zouden er geen specificaties zijn voor het 'type' dieet dat hij geacht wordt te eten. Desalniettemin, om eventuele gastro-intestinale stoornissen te voorkomen die het gebruik van antibiotica en andere medicijnen die het ontlastingsdonatieproces belemmeren, noodzakelijk zouden maken, zou deze gezonde donor worden gevraagd om zich te onthouden van het eten van straatvoedsel. Hij is echter vrij om te eten op familiebijeenkomsten en feesten, indien van toepassing.

FOLLOW-UP VAN PATIËNTEN [BIJ BASELINE, 3 MO, 6 MO EN 12 MO].

Leefstijlfalen wordt gedefinieerd als Dieettherapie moet ervoor zorgen dat de inname met 500 tot 1.000 kcal/dag wordt verlaagd ten opzichte van het huidige niveau. Caloriearme diëten (LCD's) met 1.000 tot 1.200 kcal/dag voor de meeste vrouwen en tussen 1.200 kcal/dag en 1.600 kcal/dag voor mannen. Lichamelijke activiteit (wandelen, dansen, tuinieren, huishoudelijke taken en teamsporten of individuele sporten) moet langzaam worden opgevoerd tot een niveau dat zorgt voor ten minste 30 minuten of meer matige lichamelijke activiteit op de meeste, en bij voorkeur alle, dagen van de week gedurende 6 maanden konden het gewicht niet met 5% verminderen, bestempeld als een mislukte levensstijl.

Lichaamsgewicht: - elektronische weegmachine.

Taille- en heupmetingen: - de middelomtrek moet worden gemeten in het midden tussen de onderste rand van de laatste voelbare ribben en de bovenkant van de bekkenkam, met behulp van een rekbestendige tape die zorgt voor een constante spanning van 100 g. De heupomtrek moet worden gemeten rond het breedste deel van de billen, met de tape parallel aan de vloer. 14

Klinische laboratoriumbeoordelingen. Insulineresistentie (HOMA-IR): - (Insulineresistentie (HOMA-IR): - nuchtere insuline (microU/L) x nuchtere glucose (nmol/L)/22,5.) en insuline wordt gemeten met een chemiluminescente immunoassay (CLIA) 15 wordt vaak gebruikt in onze laboratoria voor het meten van de insulineconcentratie in onze monsters.

Hooggevoelig C-reactief proteïne, fibrinogeen TNF-alfa, adiponectine, leptine, ghreline.: - ze worden gemeten met de speciale ELISA-kit.

Analysemethoden van het darmmicrobioom: - Deze techniek maakt snelle sequentiëring van meerdere monsters tegelijk mogelijk, wat resulteert in duizenden sequentielezingen per monster. Concreet hebben we een set van 96 emulsiepolymerasekettingreactie (PCR) fusieprimers gegenereerd die de 454 emulsie-PCR-linkers op de 27F-primer (AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3=) en 355R' (5=-GCTGCCTCCCGTAGGAGT-3=) en verschillende 8- basisstreepjescode tussen de A-adapter en de 27F-primer.8 Aldus werd elk fecaal monster geamplificeerd met unieke streepjescode voorwaartse 16S ribosomale RNA-primers, en vervolgens werden tot 96 monsters samengevoegd en onderworpen aan emulsie-PCR en pyro-gesequenced. 16

Serumtranscriptoom: - Transcriptomics-technologieën zijn de technieken die worden gebruikt om het transcriptoom van een organisme te bestuderen, de som van al zijn RNA-transcripten. De informatie-inhoud van een organisme wordt vastgelegd in het DNA van zijn genoom en uitgedrukt door middel van transcriptie. Hier dient mRNA als een tijdelijk intermediair molecuul in het informatienetwerk, terwijl niet-coderende RNA's aanvullende diverse functies vervullen. Een transcriptoom legt een momentopname vast van het totale aantal transcripten dat in een cel aanwezig is. De eerste pogingen om het hele transcriptoom te bestuderen, begonnen in het begin van de jaren negentig, en door de technologische vooruitgang sinds het einde van de jaren negentig is transcriptomics een wijdverbreide discipline geworden. Transcriptomics is gedefinieerd door herhaalde technologische innovaties die het veld transformeren. Er zijn twee belangrijke hedendaagse technieken in het veld: microarrays, die een reeks vooraf bepaalde sequenties kwantificeren, en RNA-sequencing (RNA-Seq), die sequencing met hoge doorvoer gebruikt om alle sequenties vast te leggen. 17

Methode voor analyse van de lichaamssamenstelling: - gebruikelijke beoordelingen zijn antropometrisch en omvatten metingen van gewicht, lengte, buikomtrek en huidplooi. 18 Beoordeling van de naleving van het dieet- en bewegingsprogramma: - door het aantal vragenlijsten dat wordt opgevraagd tijdens elk bezoek van de patiënt in het ziekenhuis.

Ontlastingsmonster voor microbioomanalyse wordt verzameld op dag 0, 7, 90 en 180. Alle nadelige effecten worden gemonitord en gemeld.

Studiepopulatie: 18-55 jaar met NAFLD en

• BMI ≤ 35 of
• Body Mass Index (BMI) is ≤30 tot 34,9 kg/m2 met ten minste één behandelde of onbehandelde comorbide aandoening (hypertensie, dyslipidemie, hart- en vaatziekten, glucose-intolerantie, slaapapneu, NASH).

Bijgewoonde hepatologie OPD. Onderzoeksopzet: gerandomiseerde gecontroleerde studie Onderzoeksperiode: één jaar na goedkeuring door de ethiek. Steekproefomvang: 110 (55 gevallen in elke groep) Interventie: De proefpersonen krijgen FMT via UGI-endoscopie. Ze zullen gedurende een periode van 0/15/30 dagen het verwerkte fecale microbiota-monster toegediend krijgen dat is verzameld van een magere, gezonde donor.

FOLLOW-UP VAN PATIËNTEN [BIJ BASELINE, 3 MO, 6 MO EN 12 MO]

• Lichaamsgewicht
• Taille- en heupmetingen
• Klinische laboratoriumbeoordelingen
• Insulineresistentie (HOMA-IR) (Insulineresistentie (HOMA-IR): - nuchtere insuline (microU/L) x nuchtere glucose (nmol/L)/22,5.)
• Hooggevoelig C-reactief proteïne, fibrinogeen TNF-alfa, adiponectine, leptine, augurk.
• Darm microbioom analyse
• Serum transcriptoom
• Analyse van de lichaamssamenstelling Beoordeling van de naleving van het dieet en het trainingsprogramma
• Ontlastingsmonster voor microbioomanalyse wordt verzameld op dag 0,7, 90 en 180, 360
• Alle nadelige effecten worden gemonitord en gemeld. Monitoring en evaluatie: -alle parameters van de doelstelling en ook eventuele nadelige effecten genoteerd.

Bijwerkingen: diarree, longontsteking, buikpijn, obstipatie, misselijkheid, braken, koorts en overlijden Stopregel: Bij een van de bijwerkingen tijdens de therapie.

Ethische kwesties in het onderzoek en plannen om deze kwesties aan te pakken: Geen