鑑別白血球数とCovid-19診断

序章。 2020 年 6 月 3 日、イタリア政府は、仕事や社会活動の再開を含む、いわゆる「フェーズ 2」を開始しました。 この枠組みの中で、無意識のうちに SARS-CoV-2 感染を広げ、公衆衛生に脅威を与える可能性がある無症候性の個人をどのように特定するかという問題が世界中で提起されています。 モンディアルの人々は現在、パンデミックの第3段階を経験しており、感染の拡大と新しい症例の発生が急速に増加しています。 職場に呼び戻された人々の健康と安全を保証し、商業および会議スペースでの安全プロトコルを作成することが今や不可欠です。これは、感染した人々が新たな流行の発生を防ぐことを意味します. この目的のために、確立された集団スクリーニング プログラムがいくつかのニーズを満たす必要があります。まず、数分で結果が得られること、地域で簡単に実施できること、医療に関係のない医療専門家が簡単に実施できることです。また、非侵襲的で、再現性があり、信頼できるものでなければなりません。

現在まで、SARS-CoV-2 感染の診断は、鼻咽頭スワブまたはその他の呼吸器サンプルから採取されたサンプル中のウイルス RNA を特定することによって行われています。 ただし、この手法には、マス スクリーニングへの適用にはいくつかの制限があります。その中で最も重要なものは、診断に必要な時間、検体を分析するために指定されたセンターの混雑、無視できないウイルス感染のリスクです。医療従事者に。

ターンアラウンドタイムが短いポイントオブケア検査により、患者管理と感染制御の決定を迅速に行う必要がある設定で、より効果的なトリアージが可能になります。

最近、重度の Sar-COV-2 感染の発生とその結果としての COVID-19 を無罪とする新しい方法が開発され、ウイルス病原体を特定する白血球タイプの比率の特徴的なセットを持つ白血球レベルの早期上昇を検出します。そしてそれを他の多くのものと区別します。 この検査では、RT-qPCR や抗体などの他の検査よりも少なくとも 1 桁低いコストで、リアルタイム定量的 PCR (RT-qPCR) よりも最大 14 日間早く、全血球計算結果から陽性を予測できます。テスト。

研究の目的。 診断精度研究の主な目的は、ポイント オブ ケアの特徴である鑑別白血球計数 (CLDC) デバイスとアルゴリズムを使用して、症候性および無症候性の両方の個人の SARS-CoV-2 感染を集団への予備的アプローチとして検出することを検証することです。スクリーニングプログラム。 この比較は、COVID-19 診断のゴールド スタンダードである鼻咽頭スワブ分子検査によるアルゴリズム検証と、Coulter HMX、Beckman Coulter によるデバイス検証による血液学的サイトメトリー分析によって表されます。

二次的な目的は、CLCD法が綿棒分子検査と比較してSARS-CoV-2感染を早期に検出できるかどうかを定義し、すべての二重陽性患者に対して接触追跡調査を実施して、最初の感染日を推定し、感染曲線を決定することです。初期感染に対する感受性をテストします。

メソッド。 SARS-CoV-2感染の診断のために鼻咽頭スワブ検査を受ける被験者は、イタリアのアヴェッリーノにあるPozzilliのIRCCS NeuromedのClinic LaboratoryとDiagnostic Medica Spaで連続して募集されます。 Sar-Cov-2感染の低リスクおよび高リスクの被験者が検査されます：医療従事者、COVID-19または他の感染症以外の理由で待機的に入院する患者、感染した患者と直接接触した人。

朝の鼻咽頭スワブ手順と同時に、募集された各被験者は、CLDCデバイスとアルゴリズム（CLCD 2）を使用してテストされます。 自発的に、被験者は、Coulter HMX、Beckman Coulterによる血液細胞測定分析のために採血（3 ml）も受け、CLDCアルゴリズム（CLCD 1）のみを使用してテストされます。

rRT-PCR 解析の結果が得られるまでに少なくとも 6 時間かかるため、結果評価者は盲検化されます。 研究担当者は、COVID 19 の症状とリスク要因、および接触者の追跡 (日、モード) に関するアンケートを実施します。いずれかの CLDC テストで陽性であるが、綿棒で陰性である被験者は、2 回、5 回、場合によっては 8 回後に新しい綿棒テストを受けます。日まだ負の場合。

独立した盲目の臨床医が、リアルタイム逆転写 (rRT)-PCR を通じて、国際ガイドラインに従って鼻咽頭スワブを分析します。

デバイスの検証では、フル ブラッド カウント (FBC) は、フル ブラッド カウントを測定し、その結果を Medichain CLDC-1 ポータルに入力して迅速に分析することと、スマートフォンに接続されたポイント オブ ケア デバイス ( Medichain CLDC-2 スマートフォン顕微鏡 - Adstock Test)。

Medichain CLDC-2 スマートフォン顕微鏡は、標準的なスマートフォンにクリップで留められるデバイスで、位相差モードで照明された顕微鏡スライド (バージョン 2 - Adstock Test) に塗抹された約 1µl の血液滴を分析するために使用されます。 その後、画像はデバイスからメディチェーンに送信され、英国のサーバーで分析され、手動でクロスチェックされます。

次に、入力固有の FBC パラメータを測定できる準備アルゴリズム Athena S3ER が、この結果からデータを分析し、出力を返します。感染の開始時に特定の FBC パラメータの数に異常が発生することを考慮します。 この調査の基本的なテスト ポータル (S3ER アルゴリズムとして知られている) は、http://cldc.medichain.online にあります。 推奨される拡張ポータルは、http://cldc.medichain.online/research の研究ポータルです。 鼻咽頭スワブ分析。 サンプルは、90 ° C で 1 分間ウイルスの熱不活化にさらされます。 鼻咽頭スワブからの RNA 抽出は、Abbott mSample Preparation System (Promega Corporation) および自動抽出システム (Extraction m2000SP、Abbott Molecular) を使用して実行されます。 抽出された RNA は、SARS-CoV-2 RdRp、E、および N 遺伝子をターゲットとするワンステップ rRT-PCR システムである GeneFinderTM COVID19 Plus RealAmp PCR キット (ELITechGroup) で増幅されます。 募集されたすべての被験者は鼻咽頭スワブを受けるため、部分的な検証バイアスはなくなります。 CLDCテストと鼻咽頭スワブ手順は、病気の進行の偏りを避けるために同時に行われます。 CLCD テストと独立した盲目の臨床医によって分析された鼻咽頭スワブであるため、スワブのレート PCR の結果を解釈する際に情報の偏りが回避されます。 指数テストは参照テストから完全に独立しているため、組み込みバイアスを回避できます。 決定的でない結果が記録されます。

サンプルサイズと統計分析。 現在、COVID-19 の陽性率は、一般集団で 15%、高リスクの人々で 20% と推定されています。 したがって、感染のリスクが異なる1000人の被験者の集団で、150人から200人の陽性者が見つかると推定されています。

陽性の鼻咽頭スワブの有病率が 15% の 1000 のサンプル サイズは、95% 信頼区間で 0.15 の精度と 0.8 の検出力で約 0.75 の感度を推定するのに十分です。

適格な参加者の人口統計学的および臨床的特徴は、それぞれ連続変数と離散変数の平均と標準比率、または絶対頻度と相対頻度を使用して要約されます。 説明のみを目的として、陽性および陰性の鼻咽頭スワブ被験者でも同じ統計分析が報告されます。 手順を繰り返す可能性のないテストの技術的な失敗の場合、参加者はさらなる分析から除外されます。 他の被験者では、鼻咽頭スワブ (参照テ​​スト 1) または FBC (参照テ​​スト 2) と比較した場合の CLDC (指標テスト) の感度と特異性を推定し、それらの 95% 信頼区間を正確な二項分布。 これらの分析は、主要な被験者の特性に従って複製されます。 参加者は、陽性のCLDC-PCR、CLDC-FBCの結果の有病率に関して、真陽性(TP)、偽陽性(FP)、偽陰性(FN)および真陰性(TN)として特徴付けられます。 TP、FP、FN、および TN 全体で差がないというヌル関連は、Kruskal-Wallis 検定を使用して検定されます。